HPLC法测定维格列汀原料药中的有关物质
摘要： 目的:建立维格列汀原料药有关物质的HPLC测定方法.方法:采用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)对降解杂质和工艺杂质进行定量分析,以10 mmol·L-1辛烷磺酸钠(加入0.1％磷酸调pH至2.1)-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,检测波长为210 nm.结果:主峰与各杂质峰间能达到基线分离,维格列汀质量浓度在1.521 0～20.280μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 8),低检测限为0.5 μg·mL-1;3批样品有关物质测定结果显示,已知杂质含量均低于0.1％.结论:方法学验证结果表明,本法可作为维格列汀质量控制的方法.
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河北道地药材北沙参HPLC - PDA指纹图谱研究
目的:建立河北道地药材北沙参HPLC - PDA指纹图谱分析方法,并与不同产地北沙参药材指纹图谱特征进行比较,为科学评价与有效控制北沙参药材质量提供新方法.方法:采用DiamonsilTM C18(250 mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-乙腈-0.05%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-,柱温30℃,检测波长295 nm.结果:13批道地药材的相似度在0.9以上,化学组成一致性较好；不同产地饮片相似度只在0.1 ～0.4之间.结论:本方法操作简便、快速、准确,为北沙参药材的鉴别和质量的全面控制提供了依据.
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斑蝥、青娘子、红娘子鉴别研究
目的:研究建立斑蝥(Mylabris)、青娘子(Lytta)、红娘子(Huechys)3个毒性药材的鉴别分析方法.该3个药材具有特殊的药理活性如抗体活性、抗子宫颈癌等.方法:除形态外观和显微鉴别外,本文研究建立气相色谱和毛细管电泳鉴别特征成分指纹图谱的方法.气相色谱分析主要测定药材中斑蝥素成份而毛细管电泳指纹图谱则集中药材的氨基酸分布.结果:所建立的方法可为验证该3个药材的质量提供参考.结论:研究发现青娘子与斑蝥一样含有斑蝥素但含量很低,而红娘子不含斑蝥素.
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梯度洗脱HPLC法双波长测定呋喃唑酮中的相关物质
目的:建立测定呋喃唑酮中5-硝基糠醛二乙酸酯及其他相关物质的方法.方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Alhima C18(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为水-乙腈,梯度洗脱[0 min(90%水)→10 min(50%水)→20 min(95%水)→30min(95%水)→35 min(90%水)],流速1.0 mL·min-1,检测波长为303 nm(5-硝基糠醛二乙酸酯)和210 nm(其他相关物质).结果:呋喃唑酮与5 -硝基糠醛二乙酸酯及其强制破坏产生的降解产物均分离良好；5-硝基糠醛二乙酸酯线性范围为0.2516～3.744 μg·mL-1,平均回收率(n=9)为100.7%；呋喃唑酮和5-硝基糠醛二乙酸酯低检测量分别为1.53 ng和0.20 ng;供试品溶液至少8h内稳定.结论:本法专属性强,操作方便,测定准确,灵敏度高,可作为呋喃唑酮的质量控制方法.
关键词： 抗生素 呋喃唑酮(痢特灵) 5-硝基糠醛二乙酸酯 有关物质 高效液相色谱法 -
HPLC法同时测定通脉方中6个异黄酮类成分的含量
目的:建立HPLC - DAD法同时测定通脉方中3’-羟基葛根素、葛根素、3'-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷和大豆苷元6个异黄酮类有效成分的含量.方法:采用Dikma DiamonsilTM C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),Dikma EasyGuardC18保护柱(20 mm×4.6 mm,5μm)；以0.5%醋酸乙腈-0.5%醋酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长250 nm,柱温为25℃.结果:6个异黄酮类成分的线性范围分别为:3’-羟基葛根素,6.25～200 μg· mL-l(r =0.9998)；葛根素,31.25～ 1000 μg·mL-l(r =0.9996)；3’-甲氧基葛根素,6.25～200μg·mL-1(r =0.9999);葛根素芹菜糖苷,6.25～200 μg·mL -(r=0.9998)；大豆苷,6.25 ～200μg·mL-1(r =0.9995)；大豆苷元,1.25 ～40 μg· mL-1(r =0.9997).平均加样回收率均在95.43%～103.9%,RSD均在0.40% ～4.3%.结论:该方法准确,灵敏度高,重复性好,可用于通脉方中6个主要异黄酮类成分的含量测定.
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酸水解前后甘草中4个黄酮类化合物含量的变化
目的:建立甘草提取物中4个活性成分甘草苷、异甘草苷、甘草素和异甘草素的测定方法,并评价酸水解法对4个黄酮类化合物含量测定的影响.方法:采用高效液相色谱法,分别测定乌拉尔甘草乙醇提取液和酸水解提取液中4个活性成分的含量.色谱柱为Agilent HC - C18(150 mm ×4.6 mm,5μm)柱,流动相为pH 3甲酸溶液-乙腈,梯度洗脱,流速0.8 mL·min -,甘草苷和甘草素检测波长为276 nm,异甘草苷和异甘草素的检测波长为370 nm,柱温为25℃(室温).结果:乌拉尔甘草乙醇提取液中甘草苷、异甘草苷、异甘草素占原药材的质量百分数分别为1.29%,0.33%,0.01%,因药材中甘草素含量过低,未检出；酸水解提取液中甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素占原药材的质量百分数分别为0.71%,0.32%,0.26%,0.11%.结论:酸水解法能显著提高甘草素和异甘草素的含量测定值.
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TaqMan MGB探针法实时荧光定量PCR快速检测支原体的研究
目的:建立特异、敏感、快速检测支原体的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法.方法:针对支原体16S rRNA基因的保守区设计特异性引物和探针,建立支原体TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方检测方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性.对2008～2010年期间在北京采集的680份小型猪、小鼠、大鼠样本中的支原体进行检测,同时进行分离培养和常规PCR检测.结果:建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法对支原体的检测具有高度的特异性,对空肠弯曲菌、支气管鲍特杆菌、肺炎克雷伯杆菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌均无交叉反应,检测的灵敏度达9.2拷贝.标准曲线显示各浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.328,TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR效率为100%.对680份动物样本进行检测,结果TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR和常规PCR均能检出77份支原体阳性样本,但分离培养未能检出支原体阳性样本.结果显示,建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法比细菌分离培养方法更敏感,能够直接从动物样本中检出支原体DNA,检测时间仅为2h.结论:本研究建立了一种可靠、快速、灵敏的检测支原体的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法,并且成功应用于小型猪、小鼠、大鼠样本中支原体的检测.该技术为动物源性药品和生物制品中支原体的快速检测提供了实用的工具.
关键词： 微生物 支原体 小沟结合物(MGB)探针 实时荧光定量PCR 检测 -
电化学发光增强法高灵敏度测定蜂蜜中四环素总量
目的:建立高灵敏度测定蜂蜜中四环素总量的电化学发光法.方法:基于四环素、土霉素、金霉素、强力霉素对钌联吡啶的电化学发光具有几乎完全相同的增强效应,建立本方法,并阐明其机理.结果:在优实验条件下,钌联吡啶的电化学发光增强值与四环素、土霉素、金霉素、强力霉素的浓度的对数呈线性关系,线性范围为1.0×10-12～5.0×10-10mol· L-1,检测限约为3×10-13 mol·L-1.精密度和准确度好.机理研究表明:四环素的电化学氧化产物增强了钌联吡啶的电化学发光.结论:该方法灵敏度极高,测定结果准确可靠,可用于蜂蜜中四环素总量的测定.
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人用狂犬病疫苗ELISA快速鉴别试验的建立及验证
目的:建立人用狂犬病疫苗快速鉴别试验并进行验证.方法:采用双抗体夹心ELISA,以4株抗狂犬病毒核蛋白单抗包被微孔板,通过捕捉检品中狂犬病病毒核蛋白进行快速鉴别试验,对该方法进行特异性、灵敏度、重复性和适用性验证.结果:采用双抗体夹心ELISA进行鉴别试验,验证结果显示该方法具有较高的特异性和灵敏性,RSD＜ 15%,对于不同疫苗生产毒株均可有效鉴别.结论:双抗体夹心ELISA可以替代传统效力试验对人用狂犬病疫苗进行快速鉴别.
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HPLC、UPLC测定芪参益气滴丸中5个丹参活性成分含量的比较研究
目的:建立同时测定芪参益气滴丸中5个丹参活性成分(丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A)含量的高效液相色谱(HPLC)和超高效液相色谱(UPLC)方法,并对建立的方法进行比较.方法:HPLC方法色谱柱为Agilent Zorbax SBC18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),UPLC方法色谱柱为Waters Acquity BEH C18柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相均为乙腈-甲酸-水体系梯度洗脱,2种方法的流速分别为1.0和0.4 mL·min-,检测波长均为280 nm,柱温均为30℃.比较2种方法的分离情况及线性、精密度、重复性、加样同收率、样品测定结果.结果:UPLC的分析时间少于HPLC；5个物质在一定范围内均呈现良好线性,r均大于0.9998；2种方法的精密度、重复性、加样回收率和样品测定结果无显著性差异.结论:HPLC和UPLC 2种方法准确性、重复性均较好；UPLC分析比HPLC具有更加快速、高效的优势.
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重楼药材中4种重楼皂苷含量测定的对照品替代方法研究
目的:建立用替代对照品法测定重楼药材中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ4种重楼皂苷的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法,以柴胡皂苷d为替代对照品,使用Waters SymmetryShield RP18(4.6 mm × 250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长203 nm,柱温27℃,同时测定重楼药材中4种重楼皂苷的含量.结果:以柴胡皂苷d与4种重楼皂苷的峰面积比值和柴胡皂昔d与4种重楼皂苷的浓度比值得到的标准曲线具有良好的线性关系,加样回收率在101.6%～104.2%之间.结论:柴胡皂苷d作为替代对照品可同时测定重楼药材中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ4种重楼皂苷的含量.
