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大鼠CD40基因RNA干扰真核表达载体的构建及鉴定

王楠;马庆久;鲁建国;何显力;邹爱民;李坤
关键词: RNA干扰 CD40 重组载体

摘要: 目的:构建靶向大鼠CD40基因小分子干扰RNA(siRNA)真核细胞表达载体.方法:利用Ambion公司的网上设计工具,设计2个靶向CD40基因的发夹状siRNA,通过化学合成的方法合成2对分别互补的寡核苷酸链,退火后将双链DNA片段连接至pSilencer4.1-CMV neo vector的多克隆位点,转化扩增提取质粒,对重组质粒进行BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切电泳鉴定和DNA序列分析鉴定.结果:经酶切电泳鉴定和DNA序列分析鉴定,目的片段与pSilencer4.1-CMV neo vector连接正确,靶向大鼠CD40基因的siRNA重组表达质粒构建成功.结论:成功构建了大鼠CD40基因的RNA干扰真核表达载体pSilencer4.1-CMV-CD40.1和pSilencer4.1-CMV-CD40.2,为进一步研究CD40基因在同种器官移植排斥反应中的作用奠定基础.

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