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慢病毒载体构建稳定的maspin表达敲减食管癌细胞株

陈静;周园;郑磊;王前;蔡贞

摘要: 目的 前期研究表明maspin在食管癌组织中表达下调.文中利用慢病毒载体介导短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)感染食管癌细胞株,诱导maspin基因沉默,构建稳定的maspin表达敲减细胞株.方法 合成maspin特异shRNA序列(shMas1和shMas2),构建shMas1和shMas2慢病毒表达载体;利用293FT细胞包装病毒后,感染食管癌细胞株HKESC-2;经嘌呤霉素筛选获得稳定感染细胞株.定量PCR和免疫印迹法检测干扰效果.结果 成功构建shMaspin的慢病毒表达载体;与野生型HKESC-2细胞比较,获得的稳定maspin表达敲减细胞株shMas1/HK2和shMas2/HK2生长特性无明显变化,其maspin mRNA及蛋白质表达水平均明显降低,maspin mRNA敲减效率分别为37.8%及58.2%,maspin蛋白质表达的相对抑制率分别为49%和53%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 成功构建了稳定的maspin表达敲减的食管癌细胞株shMas1/HK2和shMas2/HK2.

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