ESBLs在大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌中的检出率及耐药情况比较
摘要： 目的检测我国大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)产生及耐药情况.方法对2000～2001年中国细菌耐药监测研究所收集的来自9座城市13家医院的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌采用平皿二倍稀释法测定抗菌药物对各种致病菌的MIC值,计算MICs0与MIC90,并按NCCLS 2002规定的临界浓度,求出各类细菌对所测定的各种抗菌药物的耐药率(R%).以纸片扩散法确证试验检测产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,以三维试验检测产ESBLs和AmpC酶的阴沟肠杆菌.结果在总共341株大肠埃希菌和212株肺炎克雷伯菌中共检测到产ESBLs菌100株,检出率18.1%(100/553).其中产ESBLs大肠埃希菌63株,检出率18.5%(63/341);产ESBLs肺炎克雷伯菌37株,检出率17.5%(37/212).产ESBLs菌株对β-内酰胺类抗生素的耐药率明显高于非ESBLs菌株.酶抑制剂联合制剂头孢哌酮/舒巴坦、第四代头孢菌素头孢吡肟和碳青霉烯类对产ESBLs菌株有较好作用.81株阴沟肠杆菌中,28株产ESBLs,检出率34.6%;31株产AmpC酶,检出率38.3%;14株同时产生此二类酶,检出率17.3%.在对头孢曲松中介的14株阴沟肠杆菌中,AmpC酶检出率为42.9%(6/14),而ESBLs的检出率高达92.9%(13/14),是AmpC酶检出率的两倍多.但在对头孢曲松耐药的27株阴沟肠杆菌中,情况刚好相反,AmpC酶的检出率为88.9%(24/27),是ESBLs检出率(40.7%,11/27)的两倍多.头孢噻肟中介和耐药株中两酶的检出情况与头孢曲松相似.头孢他啶只有1株中介株,耐药株中AmpC酶检出率(78.4%,29/37)约是ESBLs检出率(56.8%,21/37)的1.4倍.若将敏感和中介株合并计算可见,头孢他啶敏感和中介株中两酶的检出率明显低于头孢曲松和头孢噻肟.结论①细菌耐药研究显示ESBLs在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的检出率为18.1%;②ESBLs在我国阴沟肠杆菌中有很高的检出率;③在阴沟肠杆菌中,对头孢曲松和头孢噻肟中介的菌株,以产ESBLs为主,而耐药菌株以产AmpC酶为主.
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反相高效液相色谱法检测红霉素发酵过程中S-腺苷甲硫氨酸
建立用反相高效液相色谱(RP-HPLC)检测红霉素发酵液中S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的方法,观察其在发酵过程中的变化.样品经离心、超声等处理,进行RP-HPLC分析,梯度洗脱.实验结果说明,该方法可以使SAM与发酵液中其它复杂组分得到较好的分离.红霉素发酵过程中SAM量随时间呈曲线变化,高峰值出现在96h左右.
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嗜线虫致病杆菌代谢产物CB6-1的分离、纯化与结构鉴定
目的从对植物疫病有拮抗作用的嗜线虫致病杆菌北京变种(Xenorhabdus nematophilus var.pekingensis)CB6菌株的发酵产物中分离纯化抗菌组分,并鉴定其结构.方法采用多种层析方法对其进行分离,并采用UV、IR、MS和NMR对其进行结构鉴定.结果分离到一个主要组分CB6-1,并鉴定其结构为3,4-二氢-8-羟基苯并吡喃衍生物.结论主要抗菌组分CB6-1与文献报道的Xencoumacin 1相同.
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单剂量头孢克洛缓释片与常释胶囊在健康人体药动学和生物等效性研究
目的了解单剂量头孢克洛缓释片和常释胶囊的药动学特点,评价其生物等效性.方法22名健康男性受试者随机口服头孢克洛缓释片或常释胶囊750mg,定时采集血标本,HPLC法测定血药浓度,按照佳拟合的方法求算两种药物的药动学参数,评价生物等效性.结果头孢克洛缓释片和常释胶囊的Cmax分别为(7.44±2.77)和(10.11±3.887)mg/L;tmax分别为(3.80±0.87)和(1.42±0.53)h;t1/2β分别为(0.74±0.46)和(0.74±0.19)h;AUC0～n分别为(22.94±5.19)和(23.14±5.41)mg·h/L;AUC0～∞分别为(23.11±5.17)和(23.33±5.497)mg·h/L;CL/F分别为(4.4±1.98)和(6.05±7.49)L/h.F为(101±17.5)%.AUC的双向单侧t检验结果显示两药为生物等效制剂,Cmax和tmax的结果显示头孢克洛缓释片的达峰时间明显滞后于常释胶囊(P＜0.05),血药浓度也明显低于常释胶囊(P＜0.05).结论头孢克洛缓释片和常释胶囊为生物等效制剂,且头孢克洛缓释片在体内确有缓慢释放的特点.
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茜素红荷移分光光度法测定阿奇霉素片的溶出度
目的建立茜素红荷移分光光度法测定阿奇霉素片溶出度的方法.方法采用中国药典附录XC第三法,以250mlpH5的磷酸盐缓冲液为溶剂,转速为100r/min,经45min取样,茜素红荷移分光光度法在538nm处测定阿奇霉素的溶出度,限度为标示量的75%.结果阿奇霉素在51～255μg/ml范围内线性关系良好(r=0.9996),平均回收率为99.2%.结论该方法准确、简便,可用于阿奇霉素片溶出度的测定.
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特比萘芬与氟康唑或伊曲康唑体外联合抗白念珠菌的作用
目的探讨特比萘芬与氟康唑或伊曲康唑体外联合抗白念珠菌的作用.方法采用微量液体稀释法测定特比萘芬、氟康唑、伊曲康唑对生殖器部位分离的36株白念珠菌药敏试验,应用棋盘微量稀释法测定特比萘芬与氟康唑或伊曲康唑对36株白念珠菌的联合药敏试验.结果白念珠菌菌株对氟康唑、伊曲康唑、特比萘芬耐药株分别为3株(8.33%)、4株(11.11%)、6株(16.67%).特比萘芬和氟康唑联用MIC几何平均数较其单独应用均显著降低(t=3.590,P＜0.05;t=3.252,P＜0.05),15株有协同作用(42%),18株有相加作用(50%),3株无关作用(8%);特比萘芬和伊曲康唑联用后的MIC几何平均数较其单独应用均显著降低(t=3.849,P＜0.001;t=2.409,P＜0.05),表现为协同作用有14株(39%),相加作用的有17株(47%),无关作用的有5株(14%);均未发现拮抗作用.结论特比萘芬与氟康唑或伊曲康唑联合应用对大部分白念珠菌能产生协同作用和相加作用,提示特比萘芬与氟康唑或伊曲康唑联合应用能增强抗白念珠菌的作用.
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美罗培南与亚胺培南治疗老年重度医院内肺炎临床评价
目的评价美罗培南和亚胺培南治疗老年重度医院内肺炎的有效性和安全性.方法共分析132例(53例美罗培南,79例亚胺培南;两药均为500mg,bid,ivgtt,疗程5～16d)老年重度医院内肺炎的临床疗效、细菌清除率、安全性和临床分离菌体外药敏试验.结果美罗培南和亚胺培南治疗老年重度医院内肺炎的总有效率分别为94.3%(50/53)和88.6%(70/79),痊愈率为88.6%(47/53)和75.9%(60/79).治疗前共分离细菌123株,美罗培南和亚胺培南对细菌的体外总敏感率为95.9%(118/123)和93.5%(87/93),细菌清除率为92.3%(48/52)和90.1%(64/71),不良反应发生率为9.4%(5/53)和12.6%(10/79),反应轻微(P＞0.05).结论美罗培南和亚胺培南治疗老年重度医院内肺炎疗效确切且安全.
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微生物法测定力达霉素的效价
建立力达霉素效价测定的微生物检定法,检定菌为枯草芽孢杆菌.当力达霉素的浓度为1.85～13.51μg/ml时,其抑菌圈直径与反应剂量呈线性关系,并与HPLC法进行比较,测定结果基本一致.
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金黄色葡萄球菌NorA蛋白免疫检测方法的建立
目的建立金黄色葡萄球菌耐药转运蛋白NorA免疫检测方法.方法利用琼脂稀释法测定诺氟沙星(NFLX)对临床分离的6株金葡菌和标准菌株ATCC25923的MIC.对norA基因进行克隆、表达,提取表达产物包涵体,并进行了纯化.将纯化的表达蛋白作为免疫原免疫家兔,获取NorA蛋白的抗体血清.利用制得的抗体通过Western blotting检测临床分离的6株金葡菌的NorA蛋白表达水平.结果氟喹诺酮类药物耐药水平较高的临床分离金葡菌菌株的NorA蛋白表达水平一般较高,敏感菌株的耐药水平较低且接近.结论免疫检测方法可用于检测金葡萄菌耐药转运蛋白NorA的表达水平.
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粘质沙雷菌中SHV型β-内酰胺酶编码基因的克隆及序列分析
目的研究重庆地区临床分离的粘质沙雷菌E121编码超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因.方法PCR扩增ESBLs编码基因片段,克隆入pUCm-T载体,双脱氧链终止法测定核苷酸序列并确定亚型,等电聚焦测定β-内酰胺酶的等电点(pI).结果PCR扩增结果显示粘质沙雷菌E121产生的ESBLs为SHV型,其基因片段含756个核苷酸,GenBank查询其核苷酸序列与SHV-28型ESBLs完全相同.该耐药株至少含有等电点pI约为5.4和8.2的两种β-内酰胺酶.结论重庆地区粘质沙雷菌E121所产ESBLs亚型为SHV-28.
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中心组合设计优化必特螺旋霉素合成培养基
将克隆自卡波霉素产生菌的4″-O-异戊酰基转移酶基因整合到螺旋霉素产生菌Streptomyces spiramyceticus F-21的染色体上,构建成一株稳定的生物工程菌WSJ-1-195,它产生的一组以4″-O-异戊酰螺旋霉素为主要成分的多组分基因工程新型抗生素命名为必特螺旋霉素.针对目前没有适合必特螺旋霉素产生菌的合成培养基,所以本文顺序通过部分因子析因设计法、速上升实验、中心组合实验,并利用统计学软件SAS V8对实验数据进行分析,确定了必特螺旋霉素合成培养基的组成,为以后对必特螺旋霉素生理生化特性的研究提供基础.经过优化后必特螺旋霉素的发酵效价从173μg/ml提高到1880μg/ml.
