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内源性H2S对糖尿病肾病细胞外基质积聚的作用
目的 观察糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾组织中纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)分布及含量变化,探讨内源性硫化氢(H2S)对糖尿病肾病细胞外基质积聚的作用.方法雄性SD大鼠28只用数字表法随机分为对照组、DN组、H2S干预组和胱硫醚-γ裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)阻断剂组,每组7只.用免疫组织化学法及Western blotting免疫印迹法检测各组大鼠肾组织中FN分布及含量.结果 1)对照组大鼠FN主要分布于系膜基质和肾小囊壁;DN组和CSE阻断剂组大鼠肾小球基质中FN的分布增加;与DN组及CSE阻断剂组比较,H2S组大鼠FN的分布明显减少.2)与对照组比较,DN组大鼠FN的含量增加,Western blotting检测结果显示,DN组(48 896±779)与对照组(38 531±902)比较差异有统计学意义(P<0.01);与DN组、CSE阻断剂组比较,H2S组中FN的含量下降,Western blotting结果显示,H2S干预组(42 737±1 196)与DN组(48 896±779)、CSE阻断剂组(48 252±1 068)比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论内源性H2S可抑制DN大鼠肾脏中细胞外基质的过度积聚,延缓糖尿病肾病的病理改变.
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PINCH蛋白在人食管鳞状细胞癌中的表达及临床病理意义
目的:探讨PINCH蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床病理意义.方法:采用免疫组化SP法检测25例正常食管黏膜组织和52例食管鳞状细胞癌组织中PINCH蛋白的表达.结果:PINCH蛋白在人食管鳞状细胞癌组织中,其阳性表达率为73.1%(38/52),明显高于正常食管黏膜组织0(0/25),二者差异有统计学意义(P<0.01);Western Blotting结果与免疫组化结果一致.结论:PINCH蛋白在食管鳞癌中表达可能与肿瘤的浸润和转移有关,提示PINCH蛋白可作一个肿瘤相关间质的标志物来猜测肿瘤浸润和淋巴结转移的能力.
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肝细胞癌患者血清中Glypican-3蛋白的表达及与AFP联合检测意义
目的 探讨肝细胞癌(HCC)患者血清中Glypican-3(GPC3)蛋白的表达和意义,及其与AFP联合检测在HCC中的诊断价值. 方法 收集35例HCC患者,24例肝良性病变患者以及6例正常对照术前血清标本,采用westernblotting检测血清中GPC3蛋白,化学发光法检测血清中AFP. 结果 35例HCC患者、24例肝良性病变患者以及6例正常对照GPC3蛋白的阳性率分别为51%、0%、0%,AFP的阳性率分别为60%、38%、0%.单独用GPC3蛋白或AFP对HCC诊断的灵敏度分别为51%、60%(P>0.05).特异度分别为100%、70%(P<0.05),Youden指数分别为0.51、0.30(P<0.05);而用GPC3蛋白+AFP联合检测诊断HCC的灵敏度、特异度和Youden指数分别为91%、70%和0.61. 结论 GPC3蛋白在HCC患者血清中有较高的表达,可作为HCC早期诊断的标志物,GPC3蛋白+AFP联合检测可提高HCC的确诊率.
关键词： 肝细胞癌 glypican-3 AFP Western blotting -
罗氏沼虾变应原的热稳定性研究
目的 分析罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)变应原和抗原的热稳定性.方法 将罗氏沼虾变应原提取液在沸水中处理后,利用SDS-PAGE电泳技术和Westem blotting技术分析处理前后提取液中抗原组分和变应原组分的变化.结果 罗氏沼虾变应原提取液经SDS-PAGE电泳检测到11条可辨蛋白带,其分子量在35～105 kD之间.沸水处理以后,可辨蛋白带只有3条,其中44 kD的蛋白带为新出现的条带.罗氏沼虾变应原提取液经westem blotting检测到3条分子量均大于80 kD的致敏条带,而沸水处理后的提取液米检测到致敏带.结论 罗氏沼虾变应原提取液经沸水处理以后,溶液中的变应原成分和其他蛋白成分发生明显变化.
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小鼠组织中Cxcl15 mRNA表达及其在肺组织中的的定位特征
目的观察Cxcl15(chemokine,C-X-C motif,ligand 15)基因在小鼠体内的表达分布规律.方法采用Northern,将小鼠Cxcl15基因与小鼠8种主要组织来源的Poly A+RNA印迹膜进行杂交,观察该基因在小鼠各种组织中的分布规律;采用原位杂交,观察该基因在小鼠肺组织中的分布规律.结果Cxcl15基因主要在小鼠肺组织支气管上皮细胞胞浆中表达,并可能存在不同亚型.结论Cxcl15基因的表达存在组织特异性.
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结核分支杆菌MPT83蛋白基因在大肠杆菌表达载体中的克隆、表达与鉴定
[目的]从分支杆菌培养物中提取DNA,扩增结核分支杆菌MPT83蛋白基因,并在大肠杆菌中进行表达、克隆和鉴定. [方法]从分支杆菌培养物中提取总DNA,扩增MPT83因并克隆入T载体,将目的基因插入表达载体pET-32a(+)中,转化BL21宿主菌,IPTG诱导表达构建的表达质粒pET-MPT83经PCR和BamHⅠ+HindⅢ双酶切进行鉴定. [结果]经SDS-PAGE分析,在约42 ku处出现新的蛋白条带,5 h后表达量即达到高峰;Western blotting分析表明,融合蛋白能够被分支杆菌阳性血清所识别;纯化的表达蛋白经SDS-PAGE电泳,出现清晰的单一条带.表明MPT83基因原核表达载体构建成功. [结论]结核分支杆菌MPT83蛋白基因在大肠杆菌表达载体中的克隆、表达与鉴定,为结核病的诊断以及亚单位疫苗、核酸疫苗的制备和应用奠定基础.
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免疫蛋白质组学技术在肿瘤相关抗原筛选中的应用
蛋白质组学研究在后基因组时代得到快速发展,免疫蛋白质组学技术为肿瘤相关抗原的发现提供了一种有效的分析方法,其筛选的肿瘤相关抗原不仪可用于肿瘤诊断和预后的检测,还可能成为新的治疗靶标.本文就免疫蛋白质组学技术的研究进展作一综述.
关键词： 免疫蛋白质组学 肿瘤相关抗原 2D-Western blotting -
KDR蛋白在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达及临床意义
目的:探讨卵巢浆液性肿瘤(OSC)与正常卵巢组织中血管内皮生长因子受体(KDR、蛋白)的表达情况及临床意义.方法:利用Western Blotting方法对38例OSC、14例卵巢交界性浆液性瘤、11例卵巢良性浆液性瘤以及10例正常卵巢组织中KDR蛋白进行检测.结果:OSC组织中KDR蛋白表达的阳性率(89.5%)高于卵巢交界性浆液性瘤组织(64.3%)(P<0.05).OSC组织中KDR蛋白表达的相对含量(141.10±87.31)明显高于卵巢交界性浆液性瘤(65.60±11.61)组织(P<0.005).KDR蛋白在OSC和卵巢交界性浆液性瘤组织中表达的阳性率和相对含量均高于卵巢良性浆液性瘤(18.2%,42.62±12.66)及正常卵巢(10.0%,37.72±12.96)组织(P<0.05).手术病理分期Ⅲ期+Ⅳ期OSC组织KDR蛋白表达的阳性率(96.2%)和相对含量(181.96±96.37)高于Ⅰ期+Ⅱ期(75.0%,112.37±59.28)OSC组织(P<0.05).组织学Ⅲ级OSC组织KDR蛋白表达的阳性率(95.5%)和相对含量(171.76±91.66)高于Ⅰ级(4/6,87.96±35.59),有统计学意义(P<0.05).有淋巴结转移的OSC组织中KDR蛋白表达的阳性率(96.2%)和相对含量(219.25±92.4)与无淋巴结转移的OSC组织(75.0%,108.43±30.45)相比较,有统计学意义(P<0.05).有腹水的OSC组织中KDR蛋白表达的阳性率(83.3%)及相对含量(139.94±83.94)与元腹水的OSC组织(85.7%,167.07±93.66)相比较,无统计学意义(P>0.05).结论:卵巢浆液性肿瘤的发生、发展与KDR蛋白的过高表达密切相关.KDR蛋白表达与卵巢浆液性癌生物学行为相关.
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金黄色葡萄球菌NorA蛋白免疫检测方法的建立
目的建立金黄色葡萄球菌耐药转运蛋白NorA免疫检测方法.方法利用琼脂稀释法测定诺氟沙星(NFLX)对临床分离的6株金葡菌和标准菌株ATCC25923的MIC.对norA基因进行克隆、表达,提取表达产物包涵体,并进行了纯化.将纯化的表达蛋白作为免疫原免疫家兔,获取NorA蛋白的抗体血清.利用制得的抗体通过Western blotting检测临床分离的6株金葡菌的NorA蛋白表达水平.结果氟喹诺酮类药物耐药水平较高的临床分离金葡菌菌株的NorA蛋白表达水平一般较高,敏感菌株的耐药水平较低且接近.结论免疫检测方法可用于检测金葡萄菌耐药转运蛋白NorA的表达水平.
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次声作用后大鼠下丘脑HSP70的表达
目的研究大鼠经次声作用后下丘脑中HSP70的表达.方法 SD大鼠先经8 Hz,120 dB次声作用2 h,然后分为8组, 每组3只.分别于次声作用后0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6和7 h后取下丘脑, 通过Western blotting技术检测HSP70的表达.2组对照组,1组放入次声压力仓,但无次声作用;另1组既不放入次声压力仓,也无次声作用.结果与2组对照比较, 次声作用2 h后, 随时间延长, HSP70表达呈升高趋势.结论 HSP70参与了次声应激后机体的反应机制.
