LC-MS-MS测定黄连解毒汤中3种生物碱在大鼠血清的含量及其药代动力学研究
摘要： 目的:建立灵敏、特异、准确、可靠的药根碱、巴马汀、小檗碱在大鼠血清中液质联用(LC-MS-MS)分析方法,用于黄连解毒汤中3种生物碱在正常大鼠体内药代动力学研究.方法:优化药根碱、巴马汀、小檗碱及内标延胡索乙素质谱检测条件,确定相关条件并开展方法学考察.正常大鼠灌胃给予黄连解毒汤,经时取血,样品经处理后将该方法用于3种成分的测定.DAS药代动力学软件拟合房室模型,计算药动参数.结果:在ESI(+)离子化条件下采用MRM工作模式,用,m/z 338～322,351.9～308,336-319.8来分别检测药根碱、巴马汀、小檗碱,同时以m/z 356.1～192.1来检测内标延胡索乙素.药根碱在0.2～25μg·L~(-1)、巴马汀、小檗碱在O.4～50μg·L~(-1)呈良好线性关系.3种生物碱在高、中、低3个浓度的准确度、精密度、稳定性等均符合要求.药根碱、巴马汀、小檗碱在正常大鼠体内药动学过程符合一室开放模型.结论:应用LC-Ms-s技术建立了测定药根碱、巴马汀、小檗碱血药浓度的方法,并成功应用于黄连解毒汤正常大鼠体内这3个成分的药动学研究,为中药复方药动学研究提供了可以借鉴的分析方法.
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鱼腥草新品系离体培养和快速繁殖
目的:通过筛选鱼腥草组织培养适的植物生长调节剂种类、浓度以及佳外植体,构建起鱼腥草快速繁殖体系.方法:利用含不同浓度的不同植物生长调节剂种类的MS培养基对鱼腥草新品系不同外植体进行培养.结果:鱼腥草快速繁殖,其外植体以地上茎节和茎尖较适宜.其中,MS+0.5mg·L-1KT培养基诱导地上茎节,其抽叶数多且植株高.MS+1.0mg·L-16-BA培养基则对茎尖愈伤组织诱导作用较佳.MS+1.0mg·L-16-BA+0.2mg·L-1NAA和MS+0.5mg·L-16-BA+0.2mg·L-1NAA培养基对地上茎节丛生芽的诱导速度快,数目多.生根培养基则以MS+0.2mg·L-1IAA好.结论:通过诱导鱼腥草地上茎节丛生芽可大大提高鱼腥草繁殖系数,为生产提供足够种源.
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八珍汤对60Coγ照射小鼠骨髓细胞及脾细胞凋亡研究
目的:探讨八珍汤对60Co γ射线照射小鼠骨髓细胞及脾细胞凋亡的影响.方法:利用60Co γ射线一次性全身照射小鼠,动态观察其骨髓细胞、脾细胞凋亡情况.结果:实验观察到照射后模型组小鼠骨髓细胞在6 h其凋亡数多,以后随时间延长而逐渐减少,八珍汤组小鼠骨髓细胞和脾细胞凋亡数与模型组相比两者在6 h处有显著性差异(P＜0.05,P＜0.01);在12,18,24 h也能相应的拮抗细胞的凋亡.结论:八珍汤对60Co γ射线照射小鼠骨髓细胞及脾细胞凋亡有较好的抑制作用,可能也是八珍汤补血的机制之一.
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灯黄注射液对脑缺血模型动物的保护作用
目的:评价灯黄注射液对脑缺血模型动物的保护作用.方法:以犬大脑中动脉结扎和大鼠颈内动脉注射血栓复制局部脑缺血动物模型,测定犬血清碱性磷酸酶(AKP),肌酸激酶(GK)值,计算缺血区比例,对局部脑缺血大鼠进行神经症状和行为学的评分,计算脑梗死区百分比.以沙土鼠颈动脉结扎法复制动物全脑缺血模型,测定大脑皮层含水量,观察海马损伤程度并测定脑匀浆丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及乳酸脱氢酶(LDH)的含量.结果:灯黄注射液可明显降低犬结扎大脑中动脉后的AKP及CK的升高(P＜0.05),降低脑梗死区百分比(P＜0.05);改善局部脑缺血大鼠神经症状评分和行为学评分(P＜0.05),减小大鼠脑梗死区域百分比(P＜0.05);能明显降低沙土鼠大脑皮层水含量(P＜0.05),提高存活锥体神经元数量,抑制脑匀浆的MDA和LDH的升高.结论:灯黄注射液对脑缺血模型动物具有良好的保护作用.
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安徽省术属药用植物过渡类群的居群生物学研究
目的:探索常用中药苍术与白术分化在居群生物学中的体现.方法:对安徽省术属药用植物连续采样,进行标本研究、栽培观察和生物学特性研究.结果:南苍术与野生白术、南苍术与罗田苍术之间随生态环境的变化呈现连续过渡,南苍术、野生白术与罗田苍术是连续过渡中的极端类型,分别是苍术、白术、汉苍术的种质.南苍术与野生白术的过渡类型与关苍术十分接近,药用功效处于苍术与白术之间.结论:白术、苍术和汉苍术商品的形成与分化、种质来源及道地性的选择与术属植物居群生物学的演化是统一的.
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丹参多糖的提取分离及结构鉴定
目的:对中药丹参中多糖进行研究.方法:丹参药材经过水提醇沉得到丹参粗多糖,以DEAE-Sepharose Fast Flow纯化后,以H2O2脱色,流水透析,冷冻干燥后得到2个浅黄色均一多糖SMP 1,SMP 0.5,经13C-NMR,DEPT,IR谱,单糖组分分析、部分酸水解等方法鉴定其结构.结果:SMP 1,SMP 0.5相对分子质量分别约为1.39×106,4.03×105,SMP1主要以α-(1→6)D-Glc聚合而成,有少量的α-(1→2)D-GIc聚合;SMP 0.5主要由α-(1→6)D-Glc聚合而成.结论:SMP 1,SMP 0.5为从丹参中首次分离得到的中性均一多糖.
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绿藻基根硬毛藻的化学成分及其活性
目的:对绿藻基根硬毛藻Chaetomorpha basiretorsa进行化学成分研究,并对单体化合物进行细胞毒活性筛选以及抗动脉硬化活性筛选.方法:利用正相和反相色谱、Sephadex LH-20色谱以及反相HPLC等手段进行分离纯化,应用MS,IR和1D,2D NMR等方法鉴定结构;通过MTT法对单体化合物进行细胞毒活性筛选;通过MTT法对单体化合物在犬血管平滑肌细胞模型上进行增殖抑制活性测试.结果:从基根硬毛藻中分离并鉴定了5个化合物,分别为euphol(Ⅰ),loloilide(Ⅱ),4-cumylphenol(Ⅲ),zeaxanthin(Ⅳ),lactucaxanthin(Ⅴ).结论:所有化合物均为首次从本属海藻中分离得到,其中4-cumylphenol(Ⅲ)为新天然产物.细胞毒活性试验结果显示所有化合物均无明显活性(IC50＞10μg·mL-1);犬血管平滑肌细胞增殖抑制测试结果表明化合物Ⅰ具有一定的增殖抑制活性,其细胞成活率为(0.32±0.056)%.
关键词： 绿藻 基根硬毛藻 化学成分 细胞毒活性 犬血管平滑肌细胞增殖抑制活性 -
姜黄素固体分散体对大鼠胃溃疡的疗效研究
目的:研究姜黄素固体分散体(SDS,姜黄素:聚乙烯吡咯烷酮PVP k30质量比1:8)对大鼠胃溃疡的作用.方法:大鼠设为模型组、姜黄素SDS低、中、高剂量(含姜黄素10,30,90 mg·kg~(-1))组,阳性对照雷尼替丁(27 mg·kg~(-1))组.每组10只.乙酸致大鼠胃溃疡模型,连续口服给药14 d后,取血测定血清NO、血浆ET,测定胃溃疡指数;制备幽门结扎致大鼠胃溃疡模型,给药3 d后禁食36 h麻醉条件下施幽门结扎术,16 h后解剖收集胃液,测定胃液量、胃蛋白酶活性、溃疡指数;小鼠口服给药3 d后禁食24 h,第5天皮下注射利血平10 mg·kg~(-1)制备胃溃疡模型,6 h后处死测定胃溃疡指数.结果:乙酸致胃溃疡实验表明,与模型组溃疡指数5.87±0.48,血清NO(23.63±5.73)mmol·L~(-1)相比,口服姜黄素SDs中、高剂量组大鼠溃疡指数显著降低,分别为4.59±0.96,3.33±0.93(P＜0.01),大鼠血清NO水平明显升高,分别为(29.75±5.90)mmol·L~(-1)(P＜0.05),(39.63±12.73)mmol·L(-1)(P＜0.01);与模型组血浆ET(163.65±63.84)ng·L~(-1)相比,姜黄素SDS高剂量明显降低大鼠的血浆ET水平(104.22±63.84)ng·L~(-1)(P＜0.05).幽门结扎胃溃疡实验表明:与模型组溃疡指数相比,姜黄素SDS高剂量能够显著降低大鼠溃疡指数(P＜0.01);与模型组胃液量、胃酸分泌以及胃蛋白酶活性相比,姜黄素SDS中、高剂量能够明显降低大鼠胃液量,分别为(12.68±1.46)mL(P＜0.05),(9.99±0.79)mL(P＜0.01),能够明显降低大鼠胃酸分泌(77.62±8.34)mmol·L~(-1)(P＜0.05),(65.77±8.19)mmol·L~(-1)(|P＜0.01),能够明显抑制大鼠胃蛋白酶活性(358.13±37.44)U·mL~(-1)(P＜0.05),(292.13±41.93)U·mL~(-1)(P＜0.01).利血平诱导胃溃疡模型实验表明:与模型组溃疡指数相比,姜黄素SDS中、高剂量组能够显著降低利血平诱导胃溃疡的溃疡指数,分别为3.88±0.40,3.03±0.64(P＜0.01).结论:通过多种实验性胃溃疡模型证明:姜黄素SDS具有明显的抗胃溃疡作用,通过抑制胃酸的分泌、降低胃液的酸度、抑制胃蛋白酶活性,促进溃疡面愈合,达到抗胃溃疡效果.
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北京东灵山与雾灵山地区不同生境下柴胡中柴胡皂苷的差异
目的:探讨北京东灵山与雾灵山地区不同生境柴胡化学成分的差异,为认识和发展道地柴胡提供理论依据.方法:对东灵山和雾灵山不同生境类型的柴胡居群进行取样,采用HPLC分析不同生境下柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量的差异.结果:不同生境下柴胡皂苷含量差异显著,草甸生境下的柴胡皂苷含量较高,而林下生境及灌丛生境柴胡皂苷含量相对较低,经分析柴胡皂苷含量与坡向呈正相关,通风透光的生境条件有利于柴胡皂苷的累积.结论:生境对柴胡皂苷产生与积累起着非常重要的作用,建议考察道地药材,应突破传统区域认识,结合生境层级开展.
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青蒿P450 cDNA基因的克隆及生物信息学分析
目的:对青蒿P450 cDNA基因进行克隆和生物信息学分析.方法:通过RT-PCR,从青蒿cDNA中克隆了1个P450基因;通过生物信息学方法,对其结构特点进行分析.结果:该P450 cDNA基因ORF为1 464 bp,编码488个氨基酸,该序列在GenBank上的登录号为DQ667171.编码蛋白是一个中等大小的A型P450,相对分子质量54.992 kDa;等电点8.83,定位于线粒体,和CYP71AV1具有很高的同源性.结论:该青蒿P450和CYP71AV1在进化和性质上很接近,可能在青蒿中执行类似功能.
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氧化苦参碱对心肌损伤大鼠线粒体保护作用的研究
目的:探讨氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对异丙基肾上腺素(isoproterenol,ISO)致心肌损伤大鼠线粒体(mitoehondria,Mit)的保护作用及其机制.方法:健康雄性SD大鼠24只,随机分为4组:对照组、模型组、OMT低、高剂量组,每组6只.皮下注射ISO 5 mg·kg-1·d-1复制心肌损伤模型,低、高剂量组分别腹腔注射OMT 100,150 mg·kg-1·d-1,连续10 d.差速离心法提取心肌Mit,比色法测定血浆乳酸(Lactic acid,LD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量与乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutaae,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)的活性和心肌Mit中MDA的含量与琥珀酸脱氢酶(succinic dehydrogenaae,SDH),SOD,GSH-PX的活性,原子吸收法测定心肌Mit的钙含量.HE染色观察心肌组织的病理学改变,电镜下观察Mit超微结构的改变.结果:与模型组相比,低、高剂量OMT均可减轻心内膜下心肌缺血性损伤,保护心肌Mit超微结构的完整性,且二者均可显著降低心肌线粒体MDA和钙含量(P＜0.01),增加线粒体SOD与GSH-PX活性(低剂量组P＜0.05,高剂量组P＜0.01),升高SDH活性(P＜0.01),降低血浆LDH活性(P＜0.01)和LJ)含量(低剂量组P＜0.05,高剂量组P＜0.01).结论:OMT可保护ISO致心肌损伤大鼠Mit的结构和功能,其机制可能与抑制脂质过氧化、减轻钙超载、改善心肌细胞的代谢有关.
