Sonic Hedgehog通过调控促分裂原活化的蛋白激酶/胞外信号调节激酶信号通路促进类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖
摘要： 目的 初步探讨促分裂原活化的蛋白激酶/胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)信号通路在Sonic Hedgehog (Shh)调控RA成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)增殖中的作用.方法 收集病情活动(DAS28≥3.2)的RA患者经关节镜下滑膜清理术或关节置换术切除的滑膜组织,组织块培养法培养分离RA-FLS,分别予Shh激动剂purmorphamine、抑制剂cyclopamine及MAPK/ERK信号通路抑制剂U0126处理,采用蛋白质印迹法检测RA-FLS细胞MAPK/ERK信号通路关键蛋白phospho ERK1/2(p-ERK1/2)磷酸化水平,细胞增殖与毒性试剂盒(CCK8)检测细胞增殖活力,以及流式细胞术检测细胞增殖情况,采用单因素方差分析和Kruskal-Wallis H (K)方法对数据进行分析.结果 与对照组相比,浓度为1μmol/L的purmorphmine可短时间内引起p-ERK1/2蛋白表达增加,作用15 min时显著(P＜0.01),经U0126和cyclopamine处理后,p-ERK1/2蛋白表达明显下降(P＜0.01).RA-FLS经purmorphmine(1μmol/L)处理后,细胞增殖活力为(114±5)％,明显高于对照组(100±0)％(P＜0.01),purmorphmine(1μmol/L)组S期细胞占(8.39±0.60)％,较对照组(3.29±0.69)％明显增加(P＜0.01);经cyclopamine(10 μmol/L)处理后,细胞增殖活力为(89±1)％(P＜0.05),S期细胞占(1.53±0.22)％(P＜0.05);经purmorphamine(1μmol/L)和U0126(10 μmol/L)共同处理后,细胞增殖活力为(89±2)％(P＜0.05),S期细胞占(1.07±0.25)％(P＜0.05).结论 Shh可能通过调控MAPK/ERK信号通路,促进RA-FLS细胞增殖,促进滑膜增生,导致RA疾病的进展.
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性病型赖特综合征二例分析
目的加强对性病型赖特综合征(RS)的认识.方法报告2例性病型RS并复习文献.结果总结性病型RS的病因、发病机制、临床表现、诊断及鉴别诊断.结论性病型RS多为沙眼衣原体、解尿脲原体感染引起的,以尿道炎、关节炎、结膜炎为临床特征的疾病.相关的临床表现还有皮肤黏膜、生殖系统、心血管及神经系统损害,其发病与遗传易感性HLA-B27有关.对于性病后出现尿道、关节、结膜、皮肤黏膜损害者应考虑性病型RS.
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系统性硬化病肺间质病变与血管内皮细胞生长因子的关系
目的探讨血清血管内皮细胞生长因子(VEGF)与系统性硬化病(SSc)肺间质病变的关系.方法采用免疫学酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测了病例组(SSc 20例)及正常对照组(30名)的血清VEGF,并分析血清VEGF与肺功能的关系.结果病例组血清VEGF (363±178) ng/L较正常对照组(183±59) ng/L明显升高(P＜0.001),VEGF升高的SSc患者肺间质病变的发生率(87.5%)显著高于VEGF正常的SSc病患者肺间质病的发生率(33.3%)(P＜0.05),SSc患者血清VEGF浓度与肺活量占预计值百分比(VC%)及肺一氧化碳弥散量占预计值百分比(DLCO%)呈负相关(r=-0.86,P＜0.001;r＝-0.87,P＜0.001).结论血清VEGF水平的测定,对评估SSc肺间质病变的病情活动性有意义.
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骶髂关节穿刺的断层解剖研究
目的探讨经臀骶髂关节(sacroiliac joint，SIJ)穿刺的佳途径和穿刺的安全性。方法防腐盆部标本SIJ CT扫描，于低温冷冻下参照CT扫描基线行水平断层或冠状断层。观察SIJ在不同层面的表现，并与CT图像对照分析。结果断层标本显示SIJ包括滑膜部和韧带部，CT显示的骶髂骨间隙不全是滑膜部。SIJ下1/3，则全为滑膜部所占据，且其后面无骨质覆盖，但其下半部为SIJ边缘且骨盆壁较薄。从臀部至SIJ后缘路径无重要神经、血管，虽然SIJ盆面有腰骶干及髂血管等经过，但远离穿刺部位，不失为佳穿刺途径。结论经臀SIJ佳穿刺部位为SIJ下1/3的上半部。经该途径穿刺安全，但不宜过深，以免穿透盆壁，误伤盆内结构。
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系统性红斑狼疮初发患者外周血中维生素D及其受体mRNA的水平和意义
目的 ①检测初发系统性红斑狼疮(SEE)患者外周血中维生素D内分泌系统的水平,探讨维生素D内分泌系统在SLE发病中的作用.②分析维生素D内分泌系统水平与SLE患者骨密度和病情活动程度的关系.方法 选择初发SLE患者43例,健康对照组44名,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者外周血浆中25羟基维生素D3(250HD3)和1,25-二羟基D3[1,25(OH)2D3]的水平,利用实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测患者外周血维生素D受体(VDR)表达水平.双能X线分别检测患者腰椎(L1-4)和股骨近端2个部位的骨密度,根据SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分评估SLE病情活动程度.采用统计学单因素分析分别检验25OHD3、1,25(OH)2D3和VDR基因mRNA表达水平与SLE患者骨密度和病情活动程度的关系.结果 初发SLE患者25OHD3和1,25(OH)2D3激素水平与健康对照组比较,差异有统计学意义(P均<0.01);初发SLE患者组与健康对照组比较,VDR基因mRNA表达水平的差异有统计学意义(P<0.01);SLE患者2个部位的骨密度均低于健康对照组,且两组间的差异有统计学意义(P<0.05),SLE患者组骨量异常的发生率为35%,骨量异常与骨量健康对照组之间25OHD3、1,25(OH)2D3激素水平及VDR基因mRNA表达水平的差异无统计学意义(P0.05);250HD3、1,25(OH)2D3激素水平和VDR基因mRNA表达水平与SLE患者骨密度的情况不存在相关性(r=0.187,P0.05;r=0.172,P0.05;r=0.287,P0.05),它们与SLE患者的病情活动度之间也不存在相关性(r=0.054,P0.05;r=0.190,P0.05;r=0.046,P0.05).结论 SLE患者维生素D激素的水平及VDR基因的表达异常提示维生素D内分泌系统可能参与了SLE的发病,但与SLE患者骨量异常的发生和SLE病情活动度不存在相关性.
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CD147在单核-巨噬细胞促进成纤维细胞分泌活化基质金属蛋白酶中的作用及意义
目的探讨CD147在单核-巨噬细胞(THP-1)诱导成纤维细胞(HFC)分泌基质金属蛋白酶(MMPs)过程中的作用及其在类风湿关节炎(RA)发病机制中的意义.方法通过建立THP-1与HFC体外共培养模型,采用流式细胞术、明胶酶谱电泳分析法和侵袭小室法,观察THP-1细胞表面CD147的表达、THP-1与HFC共培养前后上清中MMPs的分泌与活化水平、侵袭力的变化.结果 THP-1细胞表面CD147呈现高表达;共培养后MMPs的产生以及侵袭力均明显增强;CD147拮抗肽AP-9对共培养后明胶酶的产生以及侵袭力均有明显的抑制作用.结论单核-巨噬细胞通过CD147促进成纤维细胞MMPs分泌活化水平的提高及侵袭力的增强.提示CD147可能成为导致RA受损关节软骨、骨基质降解的重要因素之一.
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系统性红斑狼疮合并深部真菌感染临床分析
目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)合并深部真菌感染的部位、菌种、诊断及预后.方法 回顾性分析北京协和医院2000-2006年住院治疗的1466例SLE患者中合并深部真菌感染的51例患者的临床资料. 结果 合并深部真菌感染51例SLE患者.感染的病原菌以白色念珠菌为主,其次为隐球菌和曲霉菌.感染常见的部位是肺,其次为脑膜和血液.本组病例巾死亡10例,病死率达20%.曲霉菌感染者病死率高达4/5.低蛋白血症、多部位真菌感染、曲霉菌感染、真菌血症可能是导致SLE患者死亡的独立危险因素. 结论 SLE合并真菌感染的主要部位为肺,感染的病原菌以白色念珠菌为主;临床应重视早期诊断和曲霉菌感染.
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趋化因子CXCL13在系统性红斑狼疮患者的血浆表达水平及临床意义
目的 检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血浆趋化因子CXCL13表达,分析CXCL13表达与SLE疾病活动性及脏器受累的关系,探讨CXCL13在SLE发病机制中的可能作用.方法 酶联免疫吸附法(ELISA)检测60例SLE患者血浆CXCL13水平,并与21名健康体检者对照.组间计量资料比较采用Mann-Whitney检验,组间计量资料相关性分析采用Pearson相关性分析.结果 血浆趋化因子CXCLl3在SLE患者组表达水平明显高于健康对照组[(501±446)和(102±121) pg/ml,P＜0.01].有肾脏及中枢神经系统受累的SLE患者较无相应器官受累的SLE患者有着较高水平的血浆CXCL13表达(P=0.038,0.026).另外,分析发现血浆CXCL13表达水平与SLE疾病活动指数呈正相关(r=0.585,P=0.001).结论 趋化因子CXCL13在SLE发病机制中具有重要作用,可能参与了SLE肾脏及中枢神经系统受累过程；CXCL13可作为判断SLE病情活动性的指标.
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Light诱导类风湿关节炎滑膜细胞向破骨细胞转化
目的 观察Light在类风湿关节炎(RA)滑膜细胞向破骨细胞转化过程中的作用.方法 取8例RA患者滑膜组织,胶原酶消化获取滑膜细胞,每例滑膜细胞分成5份培养,第1组加入巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)作阴性对照,第2组加入MCSF和LIGHT,第3组加入MCSF和核因子(NF)-κB受体激动剂配体(RANKL),第4组加入MCSF、LIGHT和RANKL,第5组加入LIGHT.体外培养2周后,行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,F肌动蛋白(F-actin)染色以及象牙片上骨吸收陷窝观察破骨细胞的形成和活性.结果 第1组和第5组TRAP(-),F-actin(-),象牙片上无骨吸收陷窝形成;第2组TRAP(+),F-actin(+),骨陷窝形成(+),多核破骨细胞呈圆形和椭圆形,体积较小,骨陷窝分散,体积较小;第3组TRAP(++).F-actin(++),骨陷窝形成(++),多核破骨细胞体积大,骨陷窝较多,体积大,形态不规则;第4组TRAP(+++),F-actin(+++),骨陷窝形成(++++),多核破骨细胞更多,骨陷窝大且有融合趋势.结论 Light能诱导RA滑膜细胞向破骨细胞转化,并能促进RANKL诱导滑膜细胞向破骨细胞转化的能力.
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抗环瓜氨酸肽抗体与系统性红斑狼疮关节炎的相关性研究
目的 研究抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体在系统性红斑狼疮(SLE)患者中的临床意义,探讨抗CCP抗体与SLE患者关节炎及骨侵蚀的关系.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测138例SLE患者血清中抗CCP抗体水平,并与SLE患者关节表现及其他临床指标进行相关性分析.结果 抗CCP抗体在SLE患者中的阳性率为13.8%(19/138).SLE患者关节炎的发生率为50.7%,关节炎组抗CCP抗体阳性率(20%)高于非关节炎组(7.4%)(P＜0.05).在SLE关节炎患者中,抗CCP抗体阳性者类风湿因子(RF)阳性率显著高于抗CCP抗体阴性者(71.4%与14.3%)(P＜0.01).而且,抗CCP抗体与RF之间显著相关(r=0.36,P=0.002).抗CCP抗体阳性的SLE患者关节炎的发生率明显高于抗CCP抗体阴性者(73.7%与47.1%,P＜0.05).138例SLE患者中有8例出现受累关节的影像学改变,与抗CCP抗体阴性患者相比,抗CCP抗体阳性患者表现出侵蚀性关节炎的比例显著为高(35.7%与5.4%,P＜0.01).在8例表现为侵蚀性关节炎的患者中有2例患者抗CCP抗体和RF均阴性,而抗RA33抗体阳性.此8例患者均满足美国风湿病学学会(ACR)1987年类风湿关节炎(RA)的分类标准.SLE相关其他临床指标分析显示,关节炎组.与非关节炎组、抗CCP抗体阳性组与阴性组之间差异均无统计学意义.结论 13.8%的SLE患者体内存在抗CCP抗体.抗CCP抗体的出现与SLE患者关节炎和骨侵蚀密切相关,并对判断SLE关节炎的预后具有重要的临床价值.
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人类白细胞抗原B2704基因在转基因小鼠中的整合与表达
目的研究人类白细胞抗原(HLA)-B2704基因在转基因小鼠中的整合与表达.方法应用显微注射技术将HLA-B2704基因注入C57BL/6×昆明鼠和昆明鼠×昆明鼠F0代受精卯,出生动物进行聚合酶链反应(PCR)筛选及Southern杂交鉴定.阳性者进行反转录(RT)-PCR和流式细胞光度术检测其在mRNA和蛋白水平的表达.结果101只F0代仔鼠中,10只F0代仔鼠基因组中有HLA-B2704基因整合.其中昆明鼠×昆明鼠F0代3只,整合率为4.7%,C57BL/6×昆明鼠F0代7只,整合率为18.9%(x2检验,P＜0.05).阳性小鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有HLA-B2704基因的mRNA水平表达,其外周血淋巴细胞膜上HLA-B2704基因的蛋白表达为7.87%(直方图统计表,5%以上为阳性).结论尽管受精卵的注射成活率差异无统计学意义,在注射浓度相同的情况下,含有C57BL/6基因背景的受精卵更易整合外源基因,而单纯昆明鼠的受精卯不易接受外源基因.C57BL/6×昆明鼠F0代比单纯昆明鼠F0代更适合于转基因动物的制备.HLA-B2704的重链分子与小鼠β2微球蛋白结合的复合物不稳定,不易于在细胞表面表达.
