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HBV DNA在血清HBV标志物阴性肝炎肝组织中的表达

周晓萍;李爱月;陈勇;周永兴;邓明德;李向霞

摘要: 1.资料与方法:肝穿刺活检组织45例均取自1995~1997年传染科住院患者,用ELISA法检测血清HBV标志物及常规PCR检测血清HBV DNA均为阴性.男39例,女6例,年龄12~56岁.临床诊断:急性黄疸性肝炎24例;慢性肝炎:轻度13例,中度3例,重度1例;肝硬化4例.肝组织原位杂交:带有HBV全基因组的重组PCR10质粒,经PCR扩增,获S基因500bp片段,经DNA回收试剂盒回收.以其作为裸探针,采用地高辛标记试剂盒制备探针.常规脱蜡入水,0.2盐酸室温消化20 min,蛋白酶K消化10 μ g/ml,37℃20 min,加入600ng/ml浓度的地高辛标记探针于42℃杂交过夜.用系列SSC洗涤,2%的羊血清封闭,加入1:500稀释的地高辛抗体碱性磷酸酶,37℃作用2 h,按操作说明加底物NBT/BCIP暗处显色3 h,镜下观察结果.

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