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地高辛标记人 TGF β1cDNA 探针的制备
用EcoRI/XhoI两种限制性内切酶在同一反应体系中对TGFβ1cDNA重组质粒联合酶切获得1.3Kb的酶切片段作为裸探针,比以往文献申报道的长度缩短约700bp,经地高辛标记获得较高的标记效率.本方法简化了操作步骤,并大大降低了cDNA探针的制备成本,不失为制备TGFβ1cDNA探针的好方法,为TGFβ1mRNA的检测提供了较好的工具.
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氨苄青霉素及四环素耐药基因的裸探针制备
通过PCR方法由DNA聚合酶催化,在自行设计的两段特异引物引导下,用PCR生成克隆化双链DNA,将其中氨苄青霉素及四环素耐基因的特异序列制备裸探针.
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HBV DNA在血清HBV标志物阴性肝炎肝组织中的表达
1.资料与方法:肝穿刺活检组织45例均取自1995~1997年传染科住院患者,用ELISA法检测血清HBV标志物及常规PCR检测血清HBV DNA均为阴性.男39例,女6例,年龄12~56岁.临床诊断:急性黄疸性肝炎24例;慢性肝炎:轻度13例,中度3例,重度1例;肝硬化4例.肝组织原位杂交:带有HBV全基因组的重组PCR10质粒,经PCR扩增,获S基因500bp片段,经DNA回收试剂盒回收.以其作为裸探针,采用地高辛标记试剂盒制备探针.常规脱蜡入水,0.2盐酸室温消化20 min,蛋白酶K消化10 μ g/ml,37℃20 min,加入600ng/ml浓度的地高辛标记探针于42℃杂交过夜.用系列SSC洗涤,2%的羊血清封闭,加入1:500稀释的地高辛抗体碱性磷酸酶,37℃作用2 h,按操作说明加底物NBT/BCIP暗处显色3 h,镜下观察结果.