反相高效液相色谱法测定祛白灵凝胶中氟尿嘧啶含量
摘要： 目的:建立测定祛白灵凝胶中氟尿啶啶(5-FU)含量的方法.方法:反相高效液相色谱分离测定.结果:氟尿嘧啶线性范围是20～70 mg/L,r=0.9999,平均回收率98.21%,RSD为1.25%.结论:本法灵敏,准确可靠,重现性好.
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薄层CT容积重建技术对乙状窦后入路切入点与标志点的形态学测量及其意义
目的：利用影像学方法测量乙状窦后入路切入点与特定标志点的距离和特定标志面夹角，为听神经瘤手术乙状窦后入路提供指导。方法：对100名志愿者的乙状窦、颈静脉孔和听耳道进行CT扫描，利用三维重建技术，以过手术入路平行于眼耳平面的平面和鼻中隔所在平面作为测量平面，分别测量横窦乙状窦转折处（A）、颈静脉孔上缘（B）、内听道下缘（C）三者之间的距离（记为 AB、AC和BC）以及颈静脉孔到 AC边的短距离。测量 AC和 AB与矢状轴所成夹角（α和β）。结果：AC的长度为（45.20±3.97）mm，AB的长度为（44.27±4.68）mm，BC的长度为（6.18±2.02）mm，颈静脉孔到 AC的短距离为（5.27±2.03）mm，角α测量值为（39.07±4.86）°；角β测量值为（45.99±5.62）°。结论：得到乙状窦后入路中手术切入点与标志点的距离和夹角及手术入路距颈静脉孔的安全距离。
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全反式维甲酸对人视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用
目的:研究全反式维甲酸(ATRA)对体外培养人视网膜色素上皮(RPE)细胞增生的抑制作用及机制.方法:采用传代培养的人RPE细胞,分成不同浓度(10-9、10-8、10-7、10-6和10-5 mol·L-1的ATRA)和不同时间点(6、12、24、48、72和96 h)给药组,通过活细胞计数法、MTT比色法和流式细胞术分别检测ATRA对人RPE细胞增生的影响.结果:ATRA给药组细胞生存率低于非给药组(P<0.01).细胞增生的抑制率与药物剂量及时间呈正相关(r1=0.9926,P<0.05;r2=0.9647,P<0.05).与非给药组比较,ATRA给药组RPE细胞周期中G1期细胞增加(P<0.05),而G0/G1期细胞数明显减少(P<0.05).结论:ATRA可能通过阻滞人RPE细胞周期对RPE细胞增生具有剂量依赖和时间依赖的抑制作用.
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步长脑心通对慢性脑缺血致血管性痴呆大鼠认知功能及神经细胞凋亡的影响
目的:通过观察步长脑心通对慢性脑缺血致血管性痴呆大鼠认知功能及神经细胞凋亡的影响,探讨步长脑心通治疗血管性痴呆的疗效和机制.方法:采用双侧颈总动脉永久结扎法制备前脑缺血大鼠模型,将造模成功的Wistar大鼠随机分为1月和2月模型对照组及给药组(步长脑心通),另设1月和2月正常对照组,每组6只大鼠.应用Morris水迷宫评定不同时期大鼠认知功能;通过HE染色观察神经细胞的形态学改变;采用免疫组化方法对脑组织神经细胞凋亡率及Bcl-2蛋白表达水平进行检测.结果:Morris水迷宫检测结果表明,1月和2月给药组大鼠游迷宫平均潜伏期均明显低于模型对照组(P＜0.01);HE染色观察发现,1月和2月给药组大鼠锥体细胞海马CA1区神经细胞缺血性改变较模型对照组改变轻,2月较1月给药组缺血改变明显;TUNEL染色观察发现,1月和2月给药组大鼠神经细胞凋亡率明显低于模型对照组(P＜0.05);给药组Bcl-2蛋白阳性细胞灰度平均值明显低于模型对照组(P＜0.05).结论:步长脑心通可明显提高Bcl-2的表达,抑制神经细胞凋亡,可用于治疗慢性脑缺血所致的认知功能障碍.
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低分子壳聚糖对缺氧/复氧大鼠心肌细胞中ClC-3表达的影响
目的:研究低分子壳聚糖(LMCTS)对缺氧/复氧(H/R)损伤大鼠心肌细胞中氯离子通道3(ClC-3)表达的影响,探讨LMCTS对大鼠心肌细胞H/R损伤的保护作用及其与ClC-3通道的关系.方法:原代培养的大鼠心肌细胞分为空白对照组,模型组和200、400及600 mg·L-1 LMCTS组.除空白对照组细胞不做任何处理、正常培养外,其余各组细胞均进行低压缺氧处理1h,之后在37℃条件下复氧24 h,构建心肌细胞H/R损伤模型,其中模型组不加药物,正常培养;而不同浓度LMCTS组细胞在构建模型前分别给予200、400和600mg·L-1 LMCTS.采用RT-PCR法检测大鼠心肌细胞中ClC-3 mRNA的表达水平;Western blotting法和免疫荧光法检测大鼠心肌细胞中ClC-3蛋白的相对表达水平.结果:RT-PCR法和Western blotting法检测,与空白对照组比较,模型组大鼠心肌细胞中ClC-3 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P＜0.01);与模型组比较,不同浓度LMCTS组大鼠心肌细胞中ClC-3 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P＜0.05),其中以600 mg·L-1 LMCTS组心肌细胞中ClC-3 mRNA和蛋白表达水平低.免疫荧光检测,与空白对照组比较,模型组大鼠心肌细胞荧光强度明显增强;与模型组比较,不同浓度LMCTS组大鼠心肌细胞荧光强度明显降低.结论:大鼠心肌细胞中ClC-3表达水平与心肌细胞H/R损伤有关联,LMCTS可降低ClC-3表达水平,其可能通过降低ClC-3表达水平对大鼠心肌细胞H/R损伤发挥保护作用.
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去氢表雄酮及其代谢产物对人肿瘤细胞系的抗增殖作用
目的:研究去氢表雄酮(DHEA)及其代谢物去氢表雄酮硫酸酯(DHEAs)对HepG2和HT-29细胞增殖的抑制作用及其机制.方法:HepG2和HT-29细胞分别分为对照组、不同浓度(1、10、50、100及200 μmol·L-1)DHEA组和DHEAs组,孵育8、24、48及72 h后,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法和BrdU测定法检测DHEA对肿瘤细胞的生长抑制率,同时测定3-羟基-3-甲基戊二酸单酰A还原酶(HMGR)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)及乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果:①MTT法结果显示,与对照组比较,不同浓度DHEA组HepG2和HT-29细胞增殖抑制率均显著增加(P<0.05).作用24 h时,100 μmol·L-1 DHEA组细胞增殖抑制率降低显著(P<0.05),而DHEAs组差异无显著性(P>0.05).②BrdU法结果显示,当DHEA浓度在50、100和200 μmol·L-1时细胞的生长均显著受到抑制,尤其以HepG2细胞的生长抑制率高(P<0.05).③DHEA对HepG2细胞HMGR活性抑制率为62%,对HT-29细胞HMGR活性抑制率为51%,而DHEAs则无明显作用.④100 μmol·L-1 DHEA抑制G6PD的效力为85%,而DHEAs的抑制效力仅为6%.⑤DHEA和DHEAs对细胞LDH的活性影响组间比较差异无显著性(P>0.05).结论:DHEA对HepG2和HT-29两种肿瘤细胞系均具有较强的抗增殖作用,能明显降低细胞的G6PD或HMGR活性,DHEAs则无明显作用.
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瞬时受体电位通道蛋白6在人乳腺癌细胞中的表达及其对乳腺癌细胞侵袭能力的影响
目的：探讨瞬时受体电位通道蛋白6（TRPC6）在人乳腺癌细胞中的表达，阐明 TRPC6与乳腺癌细胞侵袭能力的关联性。方法：常规培养的不同侵袭能力乳腺癌细胞株分为 MCF-7（低侵袭组）和 MDA-MB-231（高侵袭组），采用 Western blotting法和 RT-PCR法检测2组中TRPC6蛋白和mRNA的表达；将 MDA-MB-231细胞分为空白对照组和SKF96365组，不同浓度SKF96365（5、25和40μmol·L－1）预处理MDA-MB-231细胞，阻滞TRPC6通道，采用Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭能力。结果：Western blotting和 RT-PCR法检测，高侵袭组 MDA-MB-231细胞中TRPC6蛋白及mRNA表达水平均高于低侵袭组 MCF-7细胞（P＜0.05）；划痕实验，5、25和40μmol·L－1 SKF96365组迁移细胞数（76.24±7.54、45.33±4.50和25.12±1.57）均少于空白对照组（130.48±9.55）（P＜0.05）；Transwell体外侵袭实验，不同浓度 SKF96365（5、25和40μmol·L－1）组迁移细胞数明显低于对照组（P＜0.05）。结论：高侵袭乳腺癌细胞 MDA-MB-231可通过上调 TRPC6表达提高乳腺癌细胞的侵袭能力，提示TRPC6在乳腺癌转移中可能起作用。
关键词： 瞬时受体电位通道蛋白 6 乳腺肿瘤 肿瘤侵袭 -
miR-210靶基因HBVSP2的鉴定
目的:构建miR-210的过表达载体,利用双荧光蛋白报告基因分析系统验证miR-210的靶基因HBVSP2.方法:构建含有miR-210前体序列的miR-210的过表达质粒pcDNA3.1(+)/pri-miR-210;选取表达绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒pcDNA3/EGFP,将miR-210在HBVSP2上靶位点的一段特异性序列插入该质粒中,构建EGFP报告载体pcDNA3/EGFP-H BVSP2,并与miR-210ASO或者pcDNA3.1(+)/pri-miR-210及表达红色荧光蛋白质(RFP)的pDsRed2 -N1共同转染HEK293以及HepG2 2215细胞,用荧光分光光度计定量检测转染后提取的蛋白样品的荧光值.结果:共同转染pcDNA3/pri-miR-210和pcDNA3/ EGFP-HBVSP2质粒后,EGFP/RFP的表达量明显低于pcDNA3和pcDNA3/ EGFP- HBVSP2共转染组,差异具有统计学意义(P＜0.05).pcDNA3/pri-miR-210和pcDN A3/EGFP- HBVSP2组EGFP/RFP低于pcDNA3和pcDNA3/EGFP-HBVSP2共转染组(P＜0.05).共转染miR-210ASO和pcDNA3/EGFP-HBVSP2组EGFP/RFP的表达量高于共转染LacZ和pcDNA3/EGFP-HBVSP2组,差异具有统计学意义(P＜0.05).LacZ和pcDN A3/EGFP-H BVSP2组EGFP/RFP低于LacZ和pcDNA3/EGFP组(P＜0.05).结论:成功构建miR-210的过表达质粒pcDNA3.1(+)/pri-miR-210和含有miR-210靶位点的pcDNA3/EGFP- HBVSP2,HBVSP2可能是miR-210的直接靶基因.
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异氟醚对缺锌APP/PS1转基因阿尔茨海默病模型小鼠海马神经元凋亡的影响
目的:研究吸入麻醉药异氟醚对缺锌APP/PS1转基因小鼠海马神经元凋亡的影响,探讨其相关作用机制.方法:8和9月龄APP/PS1转基因小鼠随机分为常锌组、常锌十异氟醚组、缺锌组和缺锌十异氟醚组,每组24只.常锌组小鼠给予正常锌含量饮食2个月;常锌十异氟醚组小鼠给予正常锌含量饮食2个月后接受1.4％异氟醚麻醉2h;缺锌组小鼠给予低锌饮食1个月;缺锌十异氟醚组小鼠给予低锌饮食1个月后接受1.4％异氟醚麻醉2h.分别在麻醉后6和24 h杀鼠取海马组织,采用免疫荧光双染法检测海马神经元凋亡率,Western blotting法检测海马β淀粉样蛋白(Aβ)、活化型半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶3(Cleavedcaspase-3)表达水平和Bax/Bcl-2比值.结果:与常锌组比较,常锌十异氟醚组小鼠麻醉后6h海马神经元凋亡率、Cleaved caspase-3表达水平和Bax/Bcl-2比值升高(P＜0.05或P＜0.01),麻醉后24 h海马神经元凋亡率总Aβ、Aβ40和Aβ42表达水平无明显改变(P＞0.05);缺锌组和缺锌十异氟醚组小鼠麻醉后6和24 h海马神经元凋亡率、Aβ42表达水平、Cleaved caspase-3表达水平和Bax/Bcl-2比值升高(P＜0.05或P＜0.01).与缺锌组比较,缺锌十异氟醚组小鼠麻醉后6和24 h海马神经元凋亡率、Aβ42和Cleaved caspase-3表达水平及Bax/Bcl-2比值进一步升高(P＜0.05或P＜0.01).结论:10月龄常锌APP/PS1转基因小鼠给予1.4％异氟醚麻醉2h能够短暂加重其海马神经元凋亡;1.4％异氟醚麻醉2h能够明显加重缺锌APP/PS1转基因小鼠海马神经元凋亡,其作用机制可能与促进海马Aβ42聚集、增强Bax表达、抑制Bcl-2表达和激活Caspase-3有关.
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miR-200c对三阴性乳腺癌上皮间质转化的抑制作用及其机制
目的:研究miR-200c对乳腺癌MDA-MB-231细胞和BT-549细胞迁移能力及增殖能力的影响,阐明miR-200c抑制三阴性乳腺癌上皮间质转化(EMT)的相关机制.方法:选取三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231和BT-549,对其进行瞬时转染,分为空白对照组、阴性对照组(转染negative control/Lipo2000)、试剂对照组(转染Lipo2000)和实验组(转染miR-200c mimic/Lipo2000);利用RT-PCR和Western blotting法分别检测vimentin及β-catenin mRNA和蛋白表达水平;采用CCK8实验和划痕实验分别检测细胞增殖能力和迁移能力.结果:RT-PCR法和Western blotting法检测,实验组细胞中vimentin和p-catenin mRNA和蛋白表达水平降低,与空白对照组、阴性对照组和试剂对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).CCK8法检测,实验组细胞增殖低于阴性对照组和试剂对照组(P＜0.05).划痕实验,实验组细胞划痕宽度恢复率低于阴性对照组和试剂对照组(P＜0.05).结论:miR-200c通过调节MDA-MB-231和BT-549中β-catenin、vimentin的mRNA和蛋白表达量、降低细胞的迁移和增殖能力,进而抑制三阴性乳腺癌EMT.
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人白细胞介素18和新城疫病毒HN基因嵌合表达载体的构建与表达
目的:构建人白细胞介素18(IL-18)与新城疫病毒(NDV)HN基因嵌合表达质粒.方法:选用适当的限制性核酸内切酶将NDV的HN基因连接至真核表达质粒pVAX1 IL-18中IL-18基因的尾部,同时替换掉IL-18基因的终止子,构建表达IL-18 HN嵌合基因的pVAX1 IL-18 HN质粒,经酶切鉴定正确后,通过脂质体介导转染HeLa细胞,应用Western blotting及血凝试验检测其表达情况.结果:酶切鉴定证实正确地构建了pVAX1IL-18 HN嵌合表达质粒,Western blotting和血凝试验检测结果表明,嵌合后的IL-18和HN基因均能够表达,且表达的HN蛋白具有较高的血凝活性.结论:IL-18和HN基因嵌合后不影响二者的表达,而且表达的HN蛋白具有血凝活性.
