放射性核素多门电路心血池显像评价保留瓣下结构的二尖瓣置换术后的左室心功能
摘要： 为了解行保留瓣下结构二尖瓣置换术后患者左室功能的变化,采用放射性核素平衡法多门电路心血池显像,测定了14例行保留瓣下结构的二尖瓣置换患者的术前和术后6月左室心功能.结果显示,术后左室射血分数51.68±18.2, 较术前40.0±17.8有明显升高(P＜0.05),术后侧壁的局部射血分数为69.7±21.2, 较术前51.0±18.1也有显著升高(P＜0.01),表明保留瓣下结构的二尖瓣置换术后患者的左室功能有明显改善.
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消退素RvD1减轻雨蛙素联合LPS诱导的小鼠重症急性胰腺炎的实验研究
目的 探讨消退素(RvD1)对雨蛙素联合脂多糖(LPS)诱导的小鼠重症急性胰腺炎(SAP)的治疗作用.方法 雨蛙素联合LPS诱导小鼠重症急性胰腺炎模型,并设立生理盐水对照组.建模4h后,对小鼠一次性腹腔注射RvD1(150 mg/kg)进行干预处理,所有小鼠在开始造模24 h后取血,处死小鼠取胰腺标本,HE染色观察病理改变及评分;ELISA检测小鼠血清淀粉酶、脂肪酶水平,液相芯片检测小鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)质量浓度.结果 雨蛙素联合LPS成功诱导小鼠SAP模型(胰腺组织炎症性改变,病理评分增加,淀粉酶、脂肪酶升高);RvD1干预明显减轻SAP组小鼠胰腺病理改变,降低淀粉酶、脂肪酶的水平,降低血清TNF-α、IL-6质量浓度.结论 RvD1能够减轻雨蛙素联合LPS诱导的小鼠SAP炎症程度.
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microRNA启动子区甲基化调控对人肺癌细胞A549增殖、迁移、侵袭的影响
目的 研究microRNA启动子区甲基化水平的变化对几种microRNAs (miRNA34a、miRNA34b、miRNA148a、miRNA203a)表达的影响,并进一步研究该甲基化调控对人肺癌细胞A549增殖、迁移以及侵袭能力的影响.方法 不同浓度的去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理人肺癌细胞A549,分别作用24 h、48 h、72 h,采用CCK8法检测细胞增殖情况,计算增殖抑制率.20 μmol/L 5-Aza-CdR处理A549细胞72 h,通过甲基化特异性PCR(MSP)检测A549细胞相关miRNAs启动子甲基化水平的变化;实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测A549细胞相关miRNAs表达水平的变化.20μmol/L 5-Aza-CdR处理A549细胞0h、24 h、48 h,采用划痕实验检测细胞迁移能力(计算细胞在24 h和48 h的划痕愈合率);作用48 h,采用Transwell检测细胞侵袭能力.结果 CCK8结果显示,随着5-Aza-CdR的处理浓度升高、时间延长,A549细胞的增殖抑制率逐渐增加.经5-Aza-CdR去甲基化处理后,MSP结果表明,实验组相对于对照组甲基化引物扩增条带减弱,而非甲基化引物扩增条带增强;Real-time PCR结果显示,相关miRNAs表达水平升高(P＜0.05).由划痕实验和Transwell检测结果揭示,经5-Aza-CdR处理后,A549细胞的生长愈合能力降低(P＜0.05),并且侵袭到Transwell小室滤膜下表面的细胞数亦减少(P＜0.05).结论 人肺癌细胞A549经5-Aza-CdR去甲基化处理后,miRNAs表达水平升高,进一步抑制肺癌细胞的增殖、迁移以及侵袭能力.
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年龄增加对人血管内皮依赖性舒张作用的实验研究及机制探讨
目的 探讨年龄增加对人血管内皮依赖性舒张作用的影响及其初步机制.方法 采用血管环张力测定法,在15例不同年龄段(51～83岁)胃癌患者手术切除的胃网膜动脉上,测定0.001～10 μmol/L乙酰胆碱(ACh)诱发的血管内皮依赖性舒张作用和内皮依赖性超级化因子(EDHF)样血管舒张作用的变化;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法观察不同年龄人血管中的内皮型NO合酶(eNOS)、环氧合酶(COX)、胱硫醚γ裂解酶(CSE)以及C-型利钠肽(CNP)基因表达的改变.结果 相同剂量下,ACh诱导出人动脉内皮依赖性的舒张作用会随着年龄的增加而减弱(P＜0.05),其EDHF样血管舒张作用也明显降低(P＜0.05);qRT-PCR发现随着年龄的增加,其血管eNOS、CSE和CNP mRNA表达降低(P＜0.05),而COX mRNA表达的年龄趋势不明显.结论 随年龄的增加,血管内皮依赖性舒张和EDHF样舒张作用降低,可能与内皮合成的NO和CNP等舒血管物质减少有关.
关键词： 年龄 血管内皮依赖性舒张 内皮依赖性超级化因子 内皮细胞 人动脉 -
靶向ROR1的嵌合抗原受体修饰T细胞的构建及对ROR1阳性肿瘤细胞的杀伤作用
目的 探讨靶向Ⅰ型受体酪氨酸激酶样孤儿受体(ROR1)的嵌合抗原受体修饰的T细胞(chimeric antigen receptor T cell,CAR-T)治疗ROR1阳性肿瘤细胞的体外杀伤作用.方法 设计并合成CAR基因,通过慢病毒载体质粒pWPXLd,构建靶向ROR1的CAR-T核心质粒,采用BamH Ⅰ/EcoR Ⅰ双酶切鉴定,应用流式细胞术检测多种实体瘤癌细胞株表面ROR1的表达,并采用流式细胞术、乳酸脱氢酶(LDH)检测试验检测CAR-T对ROR1阳性肿瘤细胞的杀伤作用,ELISA检测试剂盒测定培养细胞上清中γ-干扰素(IFN-γ)含量.结果 构建的CAR-T质粒双酶切鉴定有CAR基因插入,流式细胞术检测结果显示CAR-T感染效率约为47.23％.多种肿瘤细胞不同程度表达ROR1.流式细胞术、LDH检测试验结果提示CAR-T能特异性地杀伤ROR1阳性肿瘤细胞.CAR-T针对ROR1阳性靶细胞能释放更多的IFN-γ(P＜0.05).结论 成功构建靶向ROR1的CAR-T,并能特异地杀伤ROR1阳性肿瘤细胞,释放大量IFN-γ,为临床应用提供了实验基础.
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干扰UCA1及抑制miR-185-5p对非小细胞肺癌β-Catenin通路的活化、自噬和存活影响
目的 探究在非小细胞肺癌中,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)尿路上皮癌抗原1(urothelial carcinoma associated 1,UCA1)敲降miR-185-5p对β-Catenin通路的影响.方法 选取非小细胞肺癌A549细胞为研究材料,设置A549空白对照组、sh-scramble阴性对照组、sh-UCA1干扰组、miR-185 inhibitor组和sh-UCA1+inhibitor组.Western blot验证体系中增殖、凋亡和自噬相关分子表达;qRT-PCR鉴定体系中lncRNAUCA1和miR-185-5p的表达;生物信息学软件和荧光素酶实验检测lncRNA UCA1和miR-185-5p之间结合性.BrdU染色鉴定细胞增殖,免疫荧光染色检测细胞中LC3+细胞含量.结果 在A549细胞中,lncRNA UCA1干扰后,UCA1表达量显著下降并促进miR-185-5p表达,有效抑制肺癌细胞增殖和自噬,促进凋亡发生(P＜0.01);经生物信息学和双荧光素酶报告系统验证lncRNA UCA1和miR-185-5p有较强结合性;并进一步验证lncRNAUCA1可以有效抑制β-Catenin/TCF-4及Beclin 1和LC3Ⅱ表达,降低miR-185-5p对肺癌细胞增殖和自噬效果,减少细胞内LC3含量(P＜0.01).结论 lncRNA UCA1干扰后,可以有效降低UCA1对miR-185-5p的抑制效果,进而解除β-Catenin/TCF-4、Beclin 1和LC3Ⅱ受到的抑制作用,从而减少肺癌细胞自噬发生和减缓增殖.
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缺氧诱导因子-1α对肺癌脑转移的作用及其机制的研究
目的 探讨缺氧与肺癌细胞释放缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的关系,揭示肺癌脑转移的可能机制.方法 建立A549肺癌细胞缺氧模型,缺氧培养A549细胞0.5、2、4、8、12和24 h(设同时点常氧培养为对照组)后,ELISA法测定A549细胞培养液内HIF-1α质量浓度.Transwell小室构建体外血脑屏障模型,A549细胞培养液缺氧不同时间后,检测体外血脑屏障模型的跨内皮阻抗(TER)变化,以反映体外血脑屏障通透性的改变;计数Transwell下室培养液中的A549细胞数.将缺氧不同时间的A549细胞培养液经尾静脉注入Wistar大鼠,伊文思兰检测动物血脑屏障通透性改变;Western blot法测定紧密连接相关蛋白Claudin-5在大鼠脑组织中的表达变化.结果 与对照组比较,A549细胞缺氧培养2h后,其细胞培养液内HIF-1α质量浓度增高,体外血脑屏障模型TER减小,穿过Transwell进入下室的缺氧A549细胞数增多(P均＜0.05),以缺氧8h时上述作用明显(P＜0.01),24 h恢复至对照组水平.在大鼠体内实验中,与同时点对照组比较,尾静脉注入缺氧2h的A549细胞培养液后,大鼠脑组织中伊文思兰质量百分比增加,大鼠脑组织中Claudin-5蛋白表达降低(P均＜0.05),并且以注入缺氧8h的A549细胞培养液作用明显(P＜0.01),注入缺氧24 h的A549细胞培养液则与同时点对照组水平相当.结论 缺氧可引起肺癌细胞释放HIF-1α增多.增多的HIF-1α导致血脑屏障紧密连接蛋白Claudin-5表达减少,血脑屏障通透性增大,肺癌细胞转移入脑.
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ILO与LLO协助李斯特菌黏附、侵袭细胞及胞内增殖的比较研究
目的 研究李斯特菌溶血素的主要功能,比较两种李斯特菌——绵羊李斯特菌(Listeria ivanovii,LI)和单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)的溶血素对细菌黏附细胞等作用的强弱.方法 构建含有LIi-hly基因上、下游同源序列和lacZ基因或hly基因的打靶质粒,利用基因重组技术构建LI溶血素(ILO)缺陷的LI重组菌株LI△i-hly∷lacZ和回补表达LM溶血素(LLO)的重组菌株LI△i-hly∷hly;比较2株重组菌与野生LI对人肝癌HepG2细胞的黏附、侵袭能力;比较3株菌在巨噬细胞RAW264.7内的增殖能力.结果 重组菌株LI△i-hly∷lacZ和LI△i-hly∷hly的基因序列与预期相符;LI△i-hly∷hly、LI和LI△i-hly∷lacZ对HepG2细胞的黏附率分别为(3.43±0.82)％、(3.43±1.59)％和(3.41±1.12)％,侵袭率分别为(1.74±0.46)％、(1.22±0.75)％和(1.39±0.46)％,差异均无统计学意义;胞内增殖实验结果表明,与野生株相比,ILO缺陷株LI△i-hly∷lacZ在巨噬细胞内的增殖量降低,LI△i-hly∷hly的增殖量升高.结论 LI在细胞内的增殖水平与ILO有关,ILO缺失抑制了LI在细胞内的增殖能力,LM溶血素LLO协助细菌逃离吞噬泡进入宿主细胞质的能力强于LI溶血素ILO.
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针刺足三里对COPD大鼠血浆多巴胺和肺功能的影响
目的 观察针刺足三里对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠的血浆多巴胺、炎症因子、肺功能及肺组织形态学的影响,探讨多巴胺在针刺调控COPD慢性炎症机制中的作用.方法 32只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、假针刺组、针刺组(n=8).后3组大鼠采用香烟烟熏和脂多糖复合法诱导8周制备COPD模型.自第7周起,烟熏前针刺组电针大鼠双侧足三里穴(ST 36)、假针刺组电针双侧足部非穴位处,30 min/次,1天1次,连续2周;正常对照组和模型组大鼠不做电针治疗.比较治疗后各组大鼠血浆多巴胺及炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β、6、8(IL-1β、IL-6、IL-8)]质量浓度,进行肺功能[肺容积(TLC)、功能残气量(FRC)、第50微秒及100微秒用力呼气量与用力肺活量之比(FEV50/FVC,FEV100/FVC)、总气道阻力(RL)和肺动态顺应性(Cdyn)]、肺泡总面积与肺组织面积之比(A/t)及肺泡灌洗液(BALF)内细胞数比较,并将上述指标进行Pearson相关分析.结果 针刺组炎症因子、肺功能、A/t及BALF内细胞数均有不同程度改善,而血浆多巴胺质量浓度高于其它组.与模型组相比,针刺组TNF-α和IL-1β质量浓度、A/t及BALF内细胞数、肺功能(FEV50/FVC,FEV100/FVC,RL,Cdyn)的差异有统计学意义(P＜0.05),且针刺组优于假针刺组.Pearson相关分析表明:肺功能FRC、RL、Cdyn与炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α及A/t均有关(P＜0.001),而TLC与炎症因子IL-8、IL-Iβ及A/t存在相关性(P＜0.05);多巴胺质量浓度与肺功能的FRC、TLC、FEV50/FVC,FEV100/FVC呈负相关(P＜0.05).结论 针刺能够缓解COPD大鼠炎症状态,改善肺功能,提高血浆多巴胺水平,且针刺对COPD大鼠肺功能的影响可能与降低炎症因子及提高多巴胺水平相关.
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地塞米松对阿霉素诱导的肾小球足细胞活动力的影响
目的 探讨地塞米松(dexamethasone,Dex)改善阿霉素(adriamycin,ADR)诱导的肾小球足细胞活性的机制.方法 将体外培养的小鼠肾小球足细胞分为3组:ADR组,Dex预处理组(Dex+ ADR)和空白对照组.采用划痕实验、Transwell实验、异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白(FITC-BSA)方法进行肾小球足细胞功能分析.另取SD雄性大鼠72只,随机分为ADR组(尾静脉注射ADR 7.5 mg/kg),Dex治疗组(ADR+ Dex,尾静脉注射ADR 7.5 mg/kg后24 h,再注射Dex 1 mg/kg)和对照组(尾静脉注射等量生理盐水),分别给药后7d、14d、21d和28 d收集24 h尿液,测定24 h尿蛋白.采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测nephrin表达变化.电镜下平均足突宽度(FWP)进行相关分析.结果 划痕实验和Transwell结果显示,与空白对照组相比,ADR诱导肾小球足细胞活性升高,而Dex预处理后,肾小球足细胞的活力明显下降,与ADR组的差异有统计学意义(P＜0.05).FITC-BSA结果显示,与空白对照组相比,ADR诱导肾病肾小球足细胞FITC-BSA滤过率升高(P＜0.05);与ADR组相比,Dex预处理组肾小球足细胞FITC-BSA滤过率降低(P＜0.05).实时荧光定量PCR和WesternBlot结果显示,与对照组大鼠比较,ADR诱导的肾病组肾小球足细胞nephrin表达升高(P＜0.05),而Dex预处理后,大鼠肾小球足细胞nephrin表达下调(P＜0.05).电镜下结果显示,ADR组大鼠FWP高于正常组(P＜0.01);与ADR组相比,Dex治疗组FWP降低(P＜0.01).与对照组相比,ADR注射14 d开始,大鼠24 h尿蛋白增多(P＜0.01),第28天达到峰值(P＜0.001).与ADR组相比,Dex治疗组大鼠第14、21和28天24 h尿蛋白下降(P＜0.001).结论 Dex下调nephrin表达,进而拮抗ADR诱导的体外肾小球足细胞活动力升高,参与缓解肾病大鼠的蛋白尿发生.
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hADMSCs影响TLR4-TRIF信号通路诱导小鼠小胶质细胞表型极化的实验研究
目的 研究人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADMSCs)对小胶质细胞表型极化的影响及机制.方法 取C57/BL6小鼠BV-2小胶质细胞,以hADMSCs+脂多糖(LPS)间接共培养,或以单纯LPS培养.倒置显微镜下观察细胞形态.CCK-8法检测小胶质细胞增殖能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测小胶质细胞M1/M2表型标记物的影响,Western blot检测小胶质细胞Toll样受体4(TLR4)-β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)信号通路相关蛋白的表达.结果 与单纯LPS培养相比,hADMSCs加入后,小胶质细胞镜下形态相似,细胞增殖活性被抑制(P＜0.05),M1表型标记物的基因表达减少(P＜0.05),M2表型标记物的基因表达增加(P＜0.05),TRIF、TLR4、干扰素调节因子3(IRF3)和磷酸化IRF3(P-IRF3)蛋白的表达水平降低(P＜0.05).结论 hADMSCs可抑制脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞M1促炎表型的极化,从而诱导其向保护型M2表型极化,此作用可能与其对TLR4-TRIF信号通路活化的抑制有关.
