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三氯乙烯变态反应皮炎病人外周血肝代谢酶基因表达水平研究
目的 探讨三氯乙烯(TCE)变态反应皮炎病人外周血肝代谢酶基因(CYP1A2、CYP2A6、CYP2C9、CYP2E1、CYP3A4) mRNA表达变化情况.方法 抽取健康人(对照组)与4例三氯乙烯变态反应皮炎病人(病例组)抗凝外周血并提取RNA,采用实时荧光定量PCR( Real-time quantitative PCR)技术检测外周血中CYP1A2、CYP2A6、CYP2C9、CYP2E1、CYP3A4的mRNA表达水平.结果 3例男性病人和1例女性病人CYP基因改变比较接近,无明显性别差异；4例病人CYP基因表达数据合并后结果显示:病例组CYP1A2的mRNA表达水平比对照组增加8.23倍(P＜0.01),CYP2C9、CYP2E1、CYP3A4比对照组分别增加3.16、4.18和4.85倍(P＜0.01或P＜0.05),CYP2A6表达水平和对照组比较差异无统计学意义.结论 三氯乙烯可引起肝代谢酶基因表达水平改变,提示肝代谢酶基因在TCE的毒性作用中发挥重要作用.
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LC-ESI-MS-MS法同时测定大鼠血浆中甲苯磺丁脲/4-羟基甲苯磺丁脲、氯唑沙宗及其药代动力学研究
目的:建立灵敏、快速、稳定的测定大鼠血浆中“Cocktail”探针药物甲苯磺丁脲及其代谢产物4-羟基甲苯磺丁脲、氯唑沙宗的液相色谱-电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS-MS)方法.方法:100 μL血浆样品加入内标格列齐特及乙酸铵,以乙酸乙酯进行液液萃取,离心取上清挥干复溶,LC-ESI-MS-MS检测.选用Agelient Eclipse Plus-C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,3.5 μm),乙腈和0.01％甲酸(1 mmol· L-1甲酸铵)作为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min-1,进样量10 μL.采用电喷雾电离源(ESI),扫描方式为多反应离子监测模式(MRM),甲苯磺丁脲m/z 269.1/170.0；4-羟基甲苯磺丁脲m/z 285.1/186.0；氯唑沙宗m/z 168.1/132.1；格列齐特m/z 322.3/170.2.结果:甲苯磺丁脲、4-羟基甲苯磺丁脲和氯唑沙宗的线性范围分别为0.98 ～4 000,0.25 ～ 125,0.98～2 000 μg·L-1.提取回收率均＞70％,稳定性RSD＜ 11％且无基质效应.结论:该方法快速、灵敏、重复性好,可用于血浆中探针药物甲苯磺丁脲、4-羟基甲苯磺丁脲、氯唑沙宗浓度的测定,有助于深入进行代谢酶CYP2C9和CYP2E1的研究.
关键词： 鸡尾酒探针法 甲苯磺丁脲 氯唑沙宗 液相色谱-电喷雾串联质谱 肝代谢酶 -
LC-MS/MS 法研究 Cocktail 探针药物咖啡因、右美沙芬、奥美拉唑、咪达唑仑及其代谢产物在大鼠血浆中的药代动力学
目的：建立灵敏、快速、稳定的测定大鼠血浆中CYP450探针药物／代谢产物，咖啡因／副黄嘌呤、奥美拉唑／5-羟基奥美拉唑、右美沙芬／右啡烷、咪达唑仑／1′-羟基咪达唑仑的 LC-MS ／MS 方法，并用于其在大鼠体内的药代动力学研究。方法100μL 血浆样品加入内标地西泮及乙酸铵溶液，乙酸乙酯进行液液萃取，离心取上清挥干复溶，LC-MS ／MS 检测。选用 Agilent Eclipse Plus-C18色谱柱（50 mm ×2.1 mm，3.5μm），乙腈和0.01％甲酸（1 mmol·L －1甲酸铵）作为流动相，梯度洗脱，流速为0.3 mL·min －1，进样量10μL。采用电喷雾电离源（ESI），扫描方式为多反应正离子监测模式（MRM＋），咖啡因 m／z：195.0／138.1；副黄嘌呤 m／z：181.1／124.1；奥美拉唑 m／z：346.1／198.1；5-羟基奥美拉唑m／z：362.1／214.1；右美沙芬 m／z：272.2／147.1；右啡烷 m／z：258.1／157.1；咪达唑仑 m／z：326.1／291.1；1′-羟基咪达唑仑m／z：342.1／324.1；内标地西泮 m／z：285.1／154.0。结果咖啡因、副黄嘌呤、奥美拉唑、5-羟基奥美拉唑、右美沙芬、右啡烷、咪达唑仑和1′-羟基咪达唑仑的线性范围分别为1.95～2000、0.98～250、0.48～2000、0.98～250、0.98～2000、0.48～125、1.95～2000和1.95～250μg·L －1。RSD ＜15％且无基质效应。结论该方法快速、灵敏、重现性好，可用于血浆中上述探针药物／代谢产物浓度的测定，便于深入进行代谢酶 CYP1 A2、CYP2C19、CYP2D6和 CYP3A4的代谢相关研究。
