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烟草暴露对机体氧化损伤及C-反应蛋白水平的影响
目的 通过测定吸烟和非吸烟的健康成年男性体内相关指标,探讨香烟烟雾中的有害物引起8-羟基鸟苷(8-oxoguanine,8-OHdG)、8-羟基鸟嘌DNA糖苷酶(human 8-hydroxyguanine deoxyribonucleic acid glycosidase,HOGG1)及其C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)的变化.方法 采用整群抽样的方法对河南省某一地区246名18 ～ 55 (42.78±9.54)岁健康成年男性的清晨空腹静脉血进行实验室调查.采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中的可替宁、8-OHdG、HOGG1和CRP的浓度,可替宁的浓度作为内暴露指标,测定的可替宁浓度按四分位数间距将样本分成1组(～2.253 μg/ml)、2组(2.252 ～ 3.159 μg/ml)、3组(3.359 ～4.211 μg/ml)和4组(4.211 μg/ml ～),测定各组内8-OHdG、HOGG1和CRP的浓度.结果 采用非参数检验比较各组血清HOGG1的浓度日=188.305,P＜0.05,即各组血清HOGG1的浓度总体分布不全相等,两两比较结果显示P值均小于0.05,且各组HOGG1的含量随着可替宁浓度的增高而增高.采用方差分析比较各组血清8-OHdG的浓度F=25.454,P＜0.05,即各组血清8-OHdG的浓度均数不全相等,两两比较结果显示,除2组和3组、3组和4组外,P＜ 0.05差异有统计学意义.采用方差分析比较各组血清CRP的浓度F=84.635,P＜0.05,即各组血清CRP的浓度均数不全相等,两两比较结果显示P值均小于0.05,且各组CRP的含量随着可替宁浓度的增高而增高.结论 体内的CRP增高,说明烟草暴露可以引起机体的炎症反应;体内8-OHdG和HOGG1水平增高,说明烟草暴露可以引起机体氧化损伤.
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关木通对肾上腺毒性及其机制
目的探讨关木通(AMK)对大鼠肾上腺的毒性作用和相关机制.方法测定自制关木通水煎剂中马兜铃酸(aristolochic acid,AA)含量.
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镉所致肾毒性及氧化性损害机制
目的用N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)为干预物,探讨氯化镉(CdCl2)引起肾脏毒性的氧化性损害机制,为防制镉危害提供依据.
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高效液相色谱-电喷雾串联质谱测定DNA氧化损伤标志物8-羟基-2'-脱氧鸟苷
8-羟基-2'-脱氧鸟苷(8-hydroxy-2'-deoxyguanosine,8-OHdG)是活性氧自由基(ROS)引起DNA氧化损伤修饰产物之一.8-OHdG可被机体特异性DNA修复酶剪切清除并经肾脏随尿排泄,其含量反映机体氧化损伤程度[1-4].因此测定机体8-OHdG含量可评估体内氧化损伤和修复程度,对研究衰老机制、癌发生机制、环境毒物等均有重要的意义.
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幽门螺杆菌致胃上皮细胞株GES-1和胃癌细胞株SGC-7901的氧化性损伤
目的: 探讨H pylori对人正常胃黏膜上皮细胞永生细胞株GES-1和人淋巴结转移胃腺癌细胞株SGC-7901的氧化性DNA损伤作用.方法: 采用细菌-细胞共培养的方法, 比较H pylori作用前后GES-1和SGC-7901细胞株的形态学变化;采用激光扫描共聚焦显微镜方法, 比较H pylori作用前后GES-1和SGC-7901细胞株8-羟基脱氧鸟苷(8-OhdG)的表达.结果: H pylori对GES-1和SGC-7901细胞株均具有损伤作用;8-OHdG表达升高, 加菌组与对照组相比差别具有统计学意义(64.9396±17.8142 vs 32.3010±7.3620;102.8344±30.2632 vs 77.1336±32.3223, 均P = 0.000);而且8-OHdG表达的变化程度GES-1细胞显著高于SGC-7901细胞.结论: H pylori能够诱导GES-1和SGC-7901细胞DNA氧化性损伤显著增加;在H pylori氧化损伤的相关研究中, 更适宜选择对损伤作用敏感的GES-1细胞株作为研究对象.
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胃癌高低发区差异基因型幽门螺杆菌菌株对人胃上皮细胞系GES-1的损伤作用
目的:研究胃癌高、低发区差异基因型幽门螺杆菌(H pylori)菌株对永生化的非肿瘤胃上皮细胞GES-1的损伤作用;并阐明H pylori致细胞损伤的分子机制.方法:通过常规HE染色、Gimsa染色、W-S银染色鉴定Hpylori菌株,采用蛋白酶K及酚-氯仿抽提法提取DNA,PCR法扩增cagA、vacAs1、s2、m1a、m1b、m2基因,对H pylori基因亚型进行检测.利用细胞和幽门螺杆菌共培养技术,观察胃癌高低发区差异基因亚型H pylori以及其他两种非差异基因型H pylori对胃上皮细胞系GES-1的损伤作用,并通过免疫细胞化学方法检测GES-1细胞8-OHdG的表达.结果:幽门螺杆菌对GES-1细胞具有损伤作用,随着作用时间的延长,GES-1细胞形态由贴壁的梭形变为圆形,细胞核染色质浓缩,呈新月形聚集于核缘,细胞质浓缩,可见空泡变性,死亡细胞逐渐增多.差异基因型H pylori对GES-1细胞的损伤程度比非差异基因型的损伤作用重.正常对照组8-OHdG表达基本阴性(0.5%),而H pylori处理组GES-1细胞8-OHdG表达阳性达98.5%,二者差异显著(P＜0.01),有统计学意义.结论:胃癌高发区差异基因型H pylori即cagA+,vacAs1+/m1b+对胃上皮细胞GES-1具有更强损伤作用,其损伤具有时间依赖关系;H pylori可能通过增加胃上皮细胞8-OhdG表达而导致正常胃黏膜上皮细胞恶性转化.
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8-羟基脱氧鸟苷酸和血管内皮生长因子与糖尿病肾病的关系
目的 探讨DNA氧化损伤标志物血清8-羟基脱氧鸟苷酸(8-OHdG)和血管内皮生长因子(VEGF)与糖尿病肾病(DN)的关系. 方法 随机检测71例DN患者,73例糖尿病患者及健康对照者47名,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定其血清8-OHdG、VEGF水平24 h微量白蛋白,并与47名健康对照者进行比较. 结果 8-OHdG和VEGF水平DN组显著高于糖尿病组(P＜0.01),糖尿病组高于正常对照组(P＜0.05).大量蛋白尿组明显高于微量蛋白尿组(P＜0.05).HbA1c＞10％组明显高于糖化血红蛋白＜9％组(P＜0.05). 结论 DN与血清8-OHdG、VEGF有关,氧化应激和VEGF参与DN发生发展过程.
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Akt和8－OHdG在铁过载肝细胞中的表达
目的：铁过载可以促进肝细胞增生甚至肝的纤维化，但其中的确切机制尚不清楚。本文通过喂食大鼠羰基铁致铁过载，后行大部分肝切除建立动物模型，检测不同时间点的目标蛋白来研究铁过载对肝细胞增殖影响的机制。方法：通过免疫组织化学方法分别检测了Akt和8－OHdG水平。结果：正常组0小时肝实质细胞的核中8－OHdG的表达。24小时8－OHdG的表达显著增加并且达到顶峰。实验组同样在细胞核中有表达，12小时8－OHdG的表达显著增加并且达到顶峰，在这之后这种表达逐渐减弱（图1F）。正常组肝实质细胞细胞质中Akt有表达，在36小时Akt表达强。在实验组0小时同样检测出 Akt表达，到24小时这种表达为显著。结论：铁过载的肝细胞通过 PI3K／AKt信号通路引起了肝细胞的再生。
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早期听觉衰老小鼠在110dB白噪声暴露下听力损害特征及机制研究
目的 观察6月龄和2月龄C57BL/6J小鼠经中等偏强的白噪声暴露后的听力学、耳蜗带状突触及毛细胞线粒体的变化.方法 16只听力正常的6月龄C57BL/6J小鼠随机分为4组,其中3组为实验组,分别为噪声暴露后1天组(P1)、噪声暴露后7天组(P7)、噪声暴露后14天组(P14),另外1组未经噪声暴露,设为对照组.每组4只小鼠(8只耳蜗),实验组小鼠用110dB SPL白噪声暴露2小时,在噪声暴露后1天、7天和14天分别检测小鼠ABR阈值.之后处死动物取耳蜗器官行免疫荧光染色,观察各组小鼠内外毛细胞、带状突触及线粒体DNA氧化损伤产物8-羟基-2-脱氧鸟苷(8-OHdG)变化.另取16只听力正常的2月龄同品系小鼠,实验分组及方法同上.结果 1)听力学结果:6月龄小鼠P1时各频率阈值与对照组相比均显著提高(P<0.05);P7时小鼠听阈与P1相比有所恢复,P14时小鼠听阈仍显著高于对照组(P<0.05).2月龄小鼠经同等条件噪声暴露后,其听力在P7时基本恢复,P14时则与对照组无显著性差异(P>0.05).2)形态学结果:6月和2月龄小鼠在P1时耳蜗带状突触数量均明显减少,但2月龄小鼠突触数量在P7时明显恢复,P14时则完全恢复,与对照组无明显差异(P>0.05);而6月龄小鼠P14时突触数量仅有部分恢复,其数量仍显著少于对照组(P<0.05).6月龄小鼠经中等强度噪声暴露后中回区域内外毛细胞及纤毛大体上无明显缺失.但是在噪声暴露后各时间点,6月龄小鼠耳蜗毛细胞均可见8-OHdG明显表达.结论 噪声暴露可与听觉老化作用相互叠加,使听力损害程度显著加重,其机制可能与毛细胞内线粒体损伤和带状突触受损有关.
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抗氧化蛋白Prx1在口腔黏膜白斑中的表达
目的 检测抗氧化蛋白Prx1和DNA氧化损伤标记物8-OHdG在口腔黏膜白斑中的表达,探讨Prx1在口腔黏膜白斑中的作用.方法 选择40例口腔黏膜白斑,包括单纯增生10例,白斑伴上皮轻度异常增生15例,白斑伴上皮中度异常增生15例,正常口腔黏膜10例.采用免疫组织化学染色方法,分别检测Prx1、8-OHdG在黏膜中的表达.结果 口腔黏膜白斑伴上皮中度异常增生组Prx1和8-OHdG染色的MOD值均高于正常组、白斑单纯增生组、白斑伴上皮轻度异常增生组,且差异有统计学意义(P<0.01).结论 Prx1与口腔黏膜白斑的发病有关,口腔黏膜白斑的发生可能与氧化损伤有关.
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8-羟基脱氧鸟苷在酒精相关性口腔黏膜癌变中的表达及意义
目的 通过检测8-OHdG的含量,探讨DNA氧化损伤与酒精相关性口腔癌发生的相关性.方法 将100只小鼠(B6.129SF2/J)分3组,阴性对照组不做任何处理;4NQO处理组饮用50μg/ml 4NQO水溶液16周,然后饮用纯净水8周;4NQO+酒精处理组,饮用50μg/ml 4NQO水溶液16周,然后饮用8%酒精溶液8周.实验第24周末处死全部动物,取舌组织行组织病理学观察和BrdU、8-OHdG免疫组化染色.结果 阴性对照组未发现上皮异常增生或癌变;4NQO处理组和4NQO+酒精处理组小鼠口腔鳞癌发生率分别为22.7%和50.0%(P<0.01).在鳞癌的病变中,与4NQO处理组(13.46±6.11)%相比,4NQO+酒精处理组BrdU阳性率(18.65±10.50)%显著升高 (P<0.01).在异常增生和癌组织中,4NQO+酒精处理组8-OHdG染色的IOD值均高于4NQO处理组(P<0.05).结论 长期酒精摄入能够促进口腔癌的发生,其机制可能与在一定程度上引起DNA的氧化损伤有关.
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尿8-OHdG检测在糖尿病肾病患者中的临床价值
目的：通过检测糖尿病肾病(DN)患者尿中DNA氧化损伤的主要的标记物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG),评价2型糖尿病患者早期肾脏病变与氧化应激的关系并探讨其临床意义。方法：选取DN患者90例,分为正常蛋白尿组,微量蛋白尿组、大量蛋白尿组各30例,检测尿8-OHdG,尿微量白蛋白、NAG等指标。结果：糖尿病组的尿8-OHdG水平显著高于正常对照组[(16.5±0.3) vs (10.8±0.5)ng/mg Cr,P<0.01]；微量蛋白尿组和大量蛋白尿组的尿8-OHdG水平明显高于正常蛋白尿组(P<0.01),大量蛋白尿组的尿8-OHdG水平显著高于微量蛋白尿组(P<0.01)。 DN患者尿8-OHdG水平与总胆固醇、低密度脂蛋白呈正相关,与BMI及eGFR呈负相关。尿8-OHdG水平与尿微量白蛋白、尿NAG、α2-MG、FDP呈显著正相关。结论：DN 患者随着蛋白尿的增多及肾功能的进展其氧化应激水平增强,氧化应激的重要标志物8-OHdG作为重要因素参与DN的发生与发展。
关键词： DN 氧化应激 线粒体DNA氧化损伤 8-OHdG -
维格列汀对T2DM患者抗氧化应激作用的研究
目的：观察维格列汀对2型糖尿病（T2DM）患者血清丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和8-羟基脱氧尿苷（8-hydroxy-deoxyguanosine，8-OHdG）水平的影响，了解其抗氧化应激作用。方法：30例血糖控制欠佳的T2DM患者在常规治疗基础上加用维格列汀治疗，24周后观察治疗前后检测血清MDA、SOD和8-OhdG水平变化。结果：治疗24周后，治疗组MDA和8-OHdG水平较治疗前明显下降（P＜0.05），差异显著；SOD水平较治疗前上升（P＜0.05），差异显著。结论：维格列汀能降低T2DM患者MDA、8-O－HdG和升高SOD水平，减轻T2DM患者的体内氧化应激。
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对脾阳虚状态下自由基损伤变化的探究
目的:探讨脾阳虚状态下模型大鼠体内自由基和体内氧化导致DNA损伤的程度,了解脾阳虚在中医脾病发展过程中的地位,为中医脾阳虚证提供现代科学依据,为中医脾虚衰老学说提供实验依据.方法:首先采用“饮食不节+疲劳过度”复合方法造模14天后,继而给大鼠以苦寒伤阳药灌胃10天复制脾阳虚大鼠模型,取大鼠后24h尿样测定8-OHdG的含量,取脑皮质和血清测定SOD、GSH-Px、T-AOC、MDA的含量.结果:脾阳虚模型组大鼠血清和脑皮质中SOD活性,GSH-Px活性,T-AOC和MDA含量与正常组相比均有显著差异(P＜0.05).模型组尿样中8-OHdG含量也有明显上调趋势(P＜0.05).结论:脾阳虚模型大鼠体内存在着明显的自由基攻击和氧化损伤,但脾阳虚状态处于脾病全程的何种阶段尚需结合前期脾气虚和脾阳虚实验数据,做进一步探究了解.
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脾气虚证自由基导致DNA损伤变化探析
目的:探讨脾气虚状态下模型大鼠体内DNA受到自由基攻击和氧化损伤的程度,了解脾气虚在中医脾病发展过程中的地位,进一步为脾气虚证提供实验学依据.方法:采用“饮食不节+疲劳过度”复合方法造模14天后,取大鼠后24 h尿样测定8-OHdG的含量,取脑皮质和血清测定SOD、GSH-Px、T-AOC、MDA的含量.结果:脾气虚模型组大鼠血清和脑皮质中SOD、GSH-Px、T-AOC和MDA含量与正常组相比均有显著差异(P＜0.05).模型组尿样中8-OHdG含量也有明显上调趋势(P＜0.05)结论:脾气虚模型大鼠体内存在着明显的自由基损伤和抗氧化酶活性的降低,但脾气虚状态处于脾病全程的何种阶段尚需深入研究了解.
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脾阴虚模型大鼠氧自由基损伤实验研究
目的:探讨脾阴虚状态下模型大鼠体内自由基损伤程度和体内抗氧化酶活性的变化,了解脾阴虚在中医脾病发展过程中的地位,为中医脾阴虚证提供现代科学依据,为中医延缓衰老提出新见解.方法:首先采用“饮食不节+疲劳过度”复合方法造模14 d后,继而给大鼠以温热伤阴药灌胃10d复制脾阴虚大鼠模型,取大鼠后24 h尿样测定8-OHdG的含量,取脑皮质和血清测定SOD、GSH-Px、T-AOC、MDA的含量.结果:脾阴虚模型组大鼠血清和脑皮质中SOD活性、GSH-Px活性、T-AOC和MDA含量与正常组相比均有显著差异(P＜0.05).模型组尿样中8-OHdG含量也有明显上调趋势(P＜0.05).结论:脾阴虚模型大鼠体内存在着明显的自由基攻击和氧化损伤,但脾阴虚状态处于脾病全程的何种阶段尚需结合前期脾气虚实验数据,并做进一步探究深入了解.
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稳定性冠心病患者血清8-OHdG水平变化情况分析
目的:探讨稳定性冠心病患者血清8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的变化情况,分析8-OhdG对稳定性冠心病患者的诊断价值.方法:选择2010年2月～2012年8月我院收治的稳定性冠心病患者60例为本次研究对象,排除合并其他心脏疾病的患者,所有患者均使用冠状动脉造影.选取同期在我院进行体检者60例为对照组.两组均检查8-OhdG,观察对比检测结果.结果:冠心病组患者的8-OhdG平均为0.41±0.08ng/ml,明显高于对照组,组间比较,p＜0.05,差异有统计学意义.结论:稳定性冠心病组患者的血清8-OhdG有明显升高,对此指标进行检查有助于辅助诊断.
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乌芪通络胶囊对糖尿病实验性大鼠 ERK1／2蛋白及8－OHdG含量的影响
目的：观察乌芪通络胶囊对糖尿病实验性大鼠背根神经节ERK1／2蛋白及8－OHdG含量的影响，初步探讨乌芪通络胶囊治疗糖尿病周围神经病变的机制。方法：雄性SD大鼠80只，造模前随机选择14只为正常对照组，造模组66只。后者经腹腔注射链尿佐菌素（ STZ），3天后将血糖值大于及等于16．7 mmol／L的大鼠继续正常饲养10周后检测，将神经传导变慢、轴突萎缩、结周脱髓鞘的大鼠归入糖尿病周围神经病变（ DPN）模型组，得到51只大鼠模型，将造模成功动物随机分为3组，即模型组、弥可保组、乌芪通络胶囊组，给药8周后进行取材，取相关背根神经节，采用Western 杂交测定法检测背根神经节组织中ERK1／2蛋白表达强度，用免疫组化法测定背根神经节组织中8－OHdG的含量，各组间进行比较。结果：模型组ERK1／2蛋白、8－OHdG较正常组显著升高（ P＜0．05），中药组和西药组ERK1／2蛋白含量及8－OHdG的含量较模型组显著减低（ P＜0．05）。结论：乌芪通络胶囊可以使模型大鼠背根神经节中ERK1／2蛋白表达下调，使背根神经节中8－OHdG的含量减少，这可能是该药重要作用机制之一。
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慢性氟中毒仔鼠神经组织中4-HNE、NTY、8-OHdG表达
目的 观察DNA、脂质及蛋白质氧化损伤产物在慢性氟中毒大鼠仔代神经组织中的表达.方法 SD大鼠60只,随机分成氟中毒组与对照组.氟中毒组饮用含氟量为100 mg/L的自来水,对照组饮用正常自来水(含氟量不足0.5 mg/L),饲养6个月后自由交配产仔,每组选取20只一月龄仔鼠取材脑组织,检测仔代神经组织中8羟基脱氧鸟苷(8 -hydroxy-2 -deox-yguanosine,8-OHdG)、4羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)以及硝基酪氨酸(nitrotyrosine, NTY)的表达变化情况.结果 氟中毒组大鼠仔代神经组织中4-HNE、NTY与8-OHdG的相对灰度值(0.271 ± 0.121、0.301 ± 0.412、0.155 ± 0.012)明显高于对照组(0.131 ± 0.012、0.113 ± 0.008、0.127 ± 0.002).结论 慢性氟中毒会在仔代神经组织中形成积聚效应,仔代神经组织中4-HNE、NTY、8-OHdG蛋白产生增多,对仔代中枢神经系统造成氧化应激损伤.
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人外周血淋巴细胞体外乙酸铅染毒后氧化应激损伤研究
[目的]研究乙酸铅染毒人外周血淋巴细胞致氧化应激与DNA氧化损伤情况.[方法]分别用浓度为0μmol/L、20 μmol/L、40μmol/L和80 μmol/L的乙酸铅染毒人外周血淋巴细胞6h、12h、24 h,应用2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色分析和流式细胞仪检测染毒后细胞内活性氧类(ROS)水平,高度水溶性四唑盐(WST-1)法检测染毒后细胞内总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性,酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒检测染毒后细胞8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平,并对ROS、T-SOD、8-OHdG三指标间的关系进行相关性分析.[结果]乙酸铅染毒6h后,各染毒组人外周血淋巴细胞ROS水平均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);20 μmol/L染毒组人外周血淋巴细胞T-SOD和8-OHdG水平与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05),而40 μmol/L和80 μmol/L染毒组人外周血淋巴细胞T-SOD和8-OHdG水平均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).乙酸铅染毒12 h和24 h后,各染毒组人外周血淋巴细胞ROS、T-SOD和8-OHdG水平均高于对照组,差异有统计学意义(P＜ 0.01).相关性分析显示,细胞内ROS含量与T-SOD活性呈负相关(r6 h=-0.865、r12 h=-0.890、r24 h=-0.801,P＜0.01),与8-OHdG含量呈正相关(r6h=0.840、r12 h=0.829、r24 h=0.866,P＜0.01).[结论]乙酸铅染毒人外周血淋巴细胞后会诱导细胞ROS生成,抑制细胞内抗氧化酶SOD活性,造成人外周血淋巴细胞氧化应激状态增强和DNA氧化性损伤.
