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咪唑斯汀抑制多形核白细胞白三烯LTB4合成的实验研究
目的:研究咪唑斯汀的抗炎机制.方法:采用皮下植入0.5%花生四烯酸浸泡的海绵做为抗原刺激剂的方法.各组分别在植入前、后2h灌胃给药地塞米松(0.1 mg/g)、咪唑斯汀高剂量(0.3mg/kg)、咪唑斯汀低剂量(0.1 mg/g)、氯雷他定(0.3 mg/kg),结合高效液相的分析方法,定量检测炎症关键产物--白三烯LTB4的生成量.结果:与模型对照组比较,地塞米松组、咪唑斯汀高剂量组有较强的抑制作用(P＜0.01)、咪唑斯汀低剂量组显示出抑制作用(P＜0.05)、而氯雷他定组无抑制作用(P＞0.01).结论:咪唑斯汀可有效抑制多形核白细胞合成LTB4,咪唑斯汀的抗炎作用机制可能主要通过抑制5-脂氧合酶活性发挥作用.
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3种抗组胺药抗花生四烯酸致炎性的比较
目的:观察不同抗组胺药是否具有抗炎作用.方法:给大鼠鼠爪皮下注射花生四烯酸(1.0 g/L,0.1 mL)构建鼠爪水肿炎性模型,在注射花生四烯酸2 h前分别灌胃给予咪唑斯汀、地氯雷他定、依巴斯汀3种抗组胺药(0.3 mg/kg),注射后1、2、3、4h,应用体积测量仪分别测定给药后鼠爪体积的改变.结果:咪唑斯汀(0.3 mg/kg)显著抑制花生四烯酸诱导的鼠爪水肿(P＜0.05),地氯雷他定、依巴斯汀对花生四烯酸诱导的鼠爪水肿均无抑制作用(P＞0.05).结论:0.3 mg/kg的咪唑斯汀在体内具有抗炎作用,相同剂量的地氯雷他定、依巴斯汀无抗炎作用.
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咪唑斯汀抗炎活性的动物实验研究
目的:评价抗组胺剂量下咪唑斯汀的抗炎强度,探讨咪唑斯汀抗炎活性的产生机制.方法:给大鼠鼠爪皮下注射花生四烯酸0.1 mL(1.0g/L)或1%角叉菜胶0.15 mL致炎剂,分别构建鼠爪水肿炎性模型,并在注射致炎剂2h前分别给予咪唑斯汀(03mg/kg)和西替利嗪(03mg/kg)灌胃,注射致炎剂后1、2、3、4 h,应用体积测量仪测定给药后鼠爪体积的改变.结果:咪唑斯汀显著抑制花生四烯酸诱导的鼠爪水肿(P＜0.05),对角叉菜胶诱导的鼠爪水肿无抑制作用(P＞0.05);西替利嗪(0.3 mg/kg)对两种致炎剂诱导的鼠爪水肿均无抑制作用(P＞0.05).结论:抗组胺剂量的咪唑斯汀在动物体内具有较高的抗炎活性,咪唑斯汀可能通过抑制5-脂氧合酶活性的途径发挥其抗炎活性.
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环孢素A、雷公藤内酯醇及红霉素与5-脂氧合酶产物的关系`
目的探索环孢素A、雷公藤内酯醇及红霉素对5-脂氧合酶的影响及建立相应的药效学方法。方法采用反相高效液相色谱法检测5-脂氧合酶产物——白三烯B4和5-羟花生四烯酸量的变化来反映该酶活性的改变。结果环孢素A可抑制白三烯B4和5-羟花生四烯酸的生成，呈剂量依赖性，IC50值分别为38.0和0.96μg/mL。雷公藤内酯醇（T0）可抑制白三烯B4和5-羟花生四烯酸的生成，呈剂量依赖性，IC50值分别为2.3×10-6和1.14×10-6μg/mL。红霉素无剂量依赖性。结论雷公藤的抗炎作用与抑制5-脂氧合酶活性有关，环孢素A的抑制浓度超出了其药理浓度，无实际意义，红霉素对5-脂氧合酶活性无影响。
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厚朴酚对大鼠中性白细胞花生四烯酸代谢酶的影响
目的:研究厚朴酚对花生四烯酸代谢酶活性的影响,以阐明其抗炎机理.方法:以大鼠胸腔白细胞为材料,分别用高效液相色谱法和放免方法测定白三烯B4(LTB4)、5-羟二十碳四烯酸(5-HETE)和6-酮前列腺素1α的生物合成.结果:在5.5～13.5 μmol/L的浓度范围内,厚朴酚可剂量依赖性地抑制完整中性白细胞中LTB4的生物合成,在10～20 μmol/L的浓度下可以抑制破碎细胞中5-脂氧合酶(5-LO)的酶活性.在浓度低于10 μmol/L时,厚朴酚对破碎细胞中白三烯A4水解酶(LTA4-H)的活性没有明显的影响,但增加其浓度,则可以明显地抑制LTA4-H的活性.同时,厚朴酚在较高浓度下可以抑制破碎细胞中环氧化酶的活性.结论:厚朴酚可以抑制花生四烯酸的5-LO和环氧化酶代谢通路,这可能与其抗炎作用机理有关.
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5-脂氧合酶基因在胃癌组织中的表达及其临床意义
目的:检测5-脂氧合酶(5-1ipoxygenase,5-LOX)在胃癌组织中的表达,并探讨其临床意义.方法:采用半定量RT-PCR法检测42例胃癌组织及22例浅表性胃炎组织中5-LOX的表达.结果:5-LOX mRNA在胃癌组织中的表达阳性率(81.0％)及相对表达量(1.039±0.240)均明显高于浅表性胃炎组织,差异有统计学意义(P＜0.05)；5-LOXmRNA表达阳性率及相对表达量与胃癌的分化程度有关,分化程度越低,阳性率及相对表达量越高,低分化胃癌与高分化胃癌间差异有统计学意义(P＜0.05).结论:5-LOX基因在胃癌中的表达与肿瘤分化程度有关,且表达阳性率及相对表达量高于浅表性胃炎组织,提示5-LOX基因的高表达可作为判断预后及分化程度的指标.
关键词： 胃癌 5-脂氧合酶 半定量逆转录聚合酶链反应 -
5-脂氧合酶抑制剂MK886对结肠癌HT-29细胞干性的影响
目的 目前有关5-脂氧合酶(5-LOX)与结肠癌干细胞的关系尚无明确结论.文中旨在探讨5-LOX抑制剂MK886对人结肠癌HT-29细胞株干性的影响. 方法 采用CCK-8法检测不同浓度MK886(12.5、25、50、75、100、200μmol/L)对体外培养的HT-29细胞生长增殖的抑制情况,并计算出半数抑制浓度(IC50);采用克隆形成和干细胞球形成实验观察MK886 IC50对细胞克隆形成和球形成能力的影响;采用实时定量PCR (real-time PCR)法检测MK886 IC50作用HT-29细胞24、48h后干性标记物(CD133、Lgr5、Oct4和Ascl2) mRNA的表达变化;采用Western blot法检测MK886 IC50作用24、48h及72h后上述标记物蛋白质的表达情况. 结果 与对照组24、48h细胞增殖抑制率比较(0％、0％),25μmol/L药物组[(20.46±1.14)％、(34.97±6.02)％]明显升高,50、75、100、200μmol/L药物组亦明显升高(P<0.05). MK886组克隆形成能力、细胞球数量明显低于对照组[(10.60±1.71)％ vs (44.67±3.21)％、(6.00±1.60)个 vs (19.07±2.89)个],差异有统计学意义(P<0.05).MK886组干预HT-29细胞后24、48h CD133mRNA相对表达量[(0.72±0.10)、(0.39±0.07)]与0h(1.66±0.33)比较显著降低,Lgr5、Oct4、Ascl2 mRNA亦显著降低(P<0.05). 结论 5-LOX抑制剂MK886可抑制HT-29细胞的增殖、克隆形成和球形成能力,可能与其下调干性标记物的表达水平,从而抑制结肠癌干细胞"干性"相关.
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5-脂氧合酶抑制剂齐留通对N-甲基-D-门冬氨酸诱导的小鼠脑损伤的保护作用
[目的]观察5-脂氧合酶(5-LOX)抑制剂齐留通对N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)皮层注射诱导的小鼠脑损伤的影响.[方法]NMDA(100 nmoL)皮层直接注射建立脑损伤模型,用干湿重法评价脑水肿,脑切片TTC染色检测梗死体积,甲苯胺蓝染色法评价神经元的损伤.以NMDA拮抗剂氯胺酮(30mg· kg-1)为阳性对照药,3、10、30 mg· kg-1齐留通在NMDA皮层注射前30 min腹腔注射给药1次,NMDA注射后24 h评价上述指标.[结果]干湿重法显示皮层注射NMDA并未引起脑水含量的变化,齐留通对脑水含量没有影响;NMDA(100nmoL)皮层注射能诱导大面积脑梗死,中、高剂量的齐留通(10、30mg· kg1)和氯胺酮(30 mg· kg-1)能明显降低梗死灶体积;NMDA诱导神经元变性,中、高剂量的齐留通和氯胺酮减轻神经元变性,增加损伤区神经元数量.[结论]5 -LOX抑制剂齐留通对NMDA皮层注射诱导的小鼠脑损伤有保护作用.
关键词： 脑损伤 5-脂氧合酶 齐留通 N-甲基-D-门冬氨酸 -
5-脂氧合酶在小鼠恶唑酮溃疡性结肠炎中的表达研究
目的 研究5-脂氧合酶(5-LOX)在恶唑酮诱导溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠黏膜中的表达情况,探讨其在UC发病机制中的作用及其与炎症程度的关系.方法 50只Balb/c小鼠分为正常对照组10只和模型组40只.模型组用3％恶唑酮致敏2d,第5天用0.5％恶唑酮灌肠.第8天用颈椎脱臼法处死所有小鼠.实验期间观察小鼠疾病活动指数(DAI),处死小鼠后行结肠组织学病理评分(HPS).RT-PCR法检测结肠黏膜5-LOXmRNA的表达,免疫组织化学方法检测结肠黏膜5-LOX的蛋白表达情况.结果 模型组DAI和HPS均高于对照组,5-LOXmRNA和蛋白表达也明显高于对照组(均P＜0.01),并随炎症程度加重,表达水平明显增高.结论 5-LOX在UC中表达水平明显升高,并参与了UC的发生和发展,在一定程度上可反应疾病的活动度,并且可能作为药物治疗的潜在靶点.
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5-LOXsiRNA抑制人肝癌HepG-2细胞裸鼠移植瘤的生长并诱导细胞凋亡
目的 探讨5-脂氧合酶(5-LOX) siRNA转染的人肝癌HepG-2细胞株裸鼠皮下移植瘤生长的影响及可能的作用机制.方法 选取裸鼠18只,将其随机进行分三组:1、对照组(接种正常人肝癌HepG-2细胞株).2、转染组(接种转染5-LOX-siRNA的人肝癌HepG-2细胞株).3、空载体组(接种转染空质粒的人肝癌HepG-2细胞株).观察载瘤小鼠皮下移植瘤生长及小鼠的生存情况,并于接种移植瘤3周后处死载瘤小鼠,记录各组移植瘤体积Ⅴ及计算肿瘤衰退率,经Western和RT-PCR检测通路信号蛋白ERK1/2、MEK1/2及caspase3、bcl-2等凋亡调节因子等表达情况.结果 转染组肿瘤平均体积与转染空载体组、正常对照组比较明显减小(P＜0.01),Western及RT-PCR检测发现转染组caspase3表达量明显增强,ERK1/2、MEK1/2及bcl-2等表达量明显下降(P＜0.01).结论 抑制5-脂氧合酶的表达可显著抑制肝癌移植瘤的生长,其机制可能与5-LOX通过MEK/ERK途径调节凋亡基因bcl-2 caspase3的表达有关.
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砒石对哮喘小鼠白三烯B4及5-脂氧合酶基因表达的影响
目的:探讨白三烯B4(LTB4)水平、5-脂氧合酶(5-LO)基因表达在小鼠哮喘发病中的作用以及砒石(arsenolite, As)对哮喘的治疗作用与LTB4水平及5-LO基因表达的关系.方法:建立小鼠卵蛋白哮喘模型,灌胃给予砒石等药,用ELISA的方法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)LTB4含量;用RT-PCR的方法检测肺组织中5-LO mRNA表达的变化.结果:哮喘小鼠BALF中LTB4水平、肺组织5-LO基因表达水平较正常对照组显著升高.4种剂量的砒石均可抑制哮喘小鼠BALF中LTB4的水平,均能降低哮喘小鼠5-LO mRNA表达的量.其中砒石 5.00 mg·kg-1剂量的效果优于砒石 0.625 mg·kg-1剂量的效果.结论:LTB4在气道中的高水平,5-LO基因表达的上调在OVA致敏小鼠的哮喘发病中起重要作用.砒石可显著降低哮喘小鼠BALF中LTB4水平,抑制哮喘小鼠肺组织中5-LO基因的表达,从而表现出抗哮喘的活性.
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齐留通通过激活ERK1/2信号通路减轻大鼠脑缺血炎症反应和缺血性脑损伤
目的：研究5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)抑制剂齐留通( zileuton)是否通过激活ERK1/2信号通路减轻大鼠脑缺血诱导的炎症反应和缺血性脑损伤。方法制备大鼠脑缺血模型,随机分为对照组、溶媒组、zileuton治疗组和PD98059干预组, zileuton (50 mg · kg-1)经口服给药, PD98059经脑室内给药。对大鼠神经功能损伤进行评分,测量大鼠脑梗死体积；分析大鼠缺血性脑水肿程度；检测脑组织髓过氧物酶的含量；Western blot法检测信号通路关键蛋白p-ERK1/2、t-ERK1/2的表达变化；ELISA 法检测血浆TNF-α的分泌。结果 Zileuton治疗组能明显减轻大鼠神经功能障碍、脑梗死体积、脑水肿、MPO活性及TNF-α含量,且zileuton的这种脑保护作用和抗炎症作用被PD98059抑制。Zileuton可上调p-ERK1/2的表达,同时也被PD98059抑制。结论5-LOX抑制剂zileuton通过激活ERK1/2信号通路,减轻脑缺血诱导的炎症反应和缺血性脑损伤。
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darbufelone对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响
目的 观察环氧合酶-2/5-脂氧合酶双重抑制剂darbufelone对胃癌SGC-7901细胞生长的影响.方法 MTT法测定darbufelone对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;TUNEL法检测细胞凋亡;RT-PCR法分析SGC-7901细胞中5-LOX和COX-2 mRNA的表达;免疫细胞化学法检测胃癌SGC-7901细胞中5-LOX和COX-2蛋白质的表达.结果 darbufelone以时间剂量依赖的方式抑制SGC-7901细胞增殖;1.5×10-5、1.0×10-5和5×10-6 mol·L-1 darbufelone作用72 h后,细胞凋亡率分别为(30.3±2.1)%、(23.0±2.0)%和(15.0±1.5)%,均高于对照组(0.6±0.1)%(P<0.01);1.5×10-5、1.0×10-5和5×10-6 mol·L-1 darbufelone处理胃癌SGC-7901细胞72 h后,5-LOX和COX-2 mRNA 及其蛋白质表达均减少(P<0.05).结果 环氧合酶-2/5-脂氧合酶双重抑制剂darbufelone对人胃癌SGC-7901细胞株有抑制增殖、诱导凋亡的作用.
关键词： SGC-7901细胞 环氧合酶-2 5-脂氧合酶 增殖 凋亡 -
同型半胱氨酸对实验性结肠炎模型中COX-2及5-LOX表达的影响
同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)是一种含巯基氨基酸,是甲硫氨酸去甲基化过程中的产物,可通过多种途径促发炎症反应,启动由细胞免疫所介导的局部和全身慢性炎症.研究发现[1],Hcy可激活核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB),导致多种炎症基因转录,参与炎症的发生.炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一种慢性非特异性肠道炎症性疾病,发病机制目前尚未完全明确.研究发现,IBD患者肠黏膜中,经由5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)代谢合成白三烯(leukotrienes,LTs)和环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)代谢合成前列腺素(prostaglandins,PGs)的量升高.
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不同病理类型结直肠息肉中5-LOX与PIGF的表达及意义
目的 探讨5-脂氧合酶(5-LOX)、胎盘生长因子(PlGF)及血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)在不同病理类型结直肠息肉组织中的表达及意义.方法 采用免疫组化法检测30例增生性息肉、30例结直肠腺瘤(15例高级别上皮内瘤变、15例低级别上皮内瘤变)、30例结肠癌及15例正常结肠黏膜中5-LOX、PlGF的表达情况,并采用ELISA法检测外周血SOD和MDA活性.结果 与正常结肠黏膜组织比较,5-LOX、PlGF在增生性息肉、低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变及结直肠癌中表达均显著增加,呈递增趋势(P＜0.05);与增生性息肉比较,低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变及结直肠癌之间差异有统计学意义.血清SOD活性显著降低,呈递减趋势(P＜0.05),而MDA活性显著增强,呈递增趋势(P＜0.05).结论 结直肠腺瘤性息肉向腺癌恶性转化过程中5-LOX、PlGF表达水平增加,呈递增趋势,可能是早期分子事件.
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涎腺黏液表皮样癌中5-脂氧合酶的表达及临床意义
目的:观察5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)在涎腺黏液表皮样癌(mucoepidermoid carcinoma,MEC)中的表达,探讨其作为诊治涎腺MEC生物学指标的可能性.方法:应用免疫组织化学EliVisionTM plus方法,检测5-LOX 在40例涎腺MEC、20例多形性腺瘤和20例癌旁正常组织中的表达并统计分析.结果:5-LOX在涎腺MEC中表达率为67.5%,显著高于多形性腺瘤0.0%和癌旁正常组织5.0%(P<0.01),5-LOX在高、中、低分化涎腺MEC中的阳性率分别为50.0%、6/9和100.0%,肿瘤分化程度间差异有统计学意义(P<0.05).结论:5-LOX可能是涎腺MEC诊断和判断分化程度的生物学参考指标之一.
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5-LOX、VEGF在结肠癌中的表达及与预后的关系
目的结合临床病理探讨5-LOX和VEGF在结肠癌中的表达情况,分析5-LOX在结肠癌血管生成方面的作用及其对结肠癌预后判断的临床意义.方法对99例结肠癌患者进行预后随访,用S-P免疫组化法检测结肠癌组织及14例结肠腺瘤和35例正常结肠黏膜组织中的5-LOX和VEGF蛋白的表达情况及计数MVD.结果(1)结肠癌的术后生存时间与结肠癌的Duke分期、有无转移和术后化疗关系密切(P＜0.05).(2)5-LOX和VEGF在结肠癌组织中的阳性表达率及MVD计数显著高于正常结肠黏膜组织(P＜0.05);5-LOX阳性表达与结肠癌的Duke分期、浸润深度和有无转移关系密切(P＜0.05);VEGF阳性表达与结肠癌的Duke分期和有无转移显著相关(P＜0.01).(3)结肠癌组织中5-LOX阳性表达率和VEGF阳性表达率显著相关;5-LOX、VEGF阳性表达率与结肠癌中MVD计数显著相关(P＜0.05).(4)5-LOX和VEGF表达与结肠癌术后生存时间无关(P＞0.05).(5)在多因素分析中肿瘤转移情况是唯一影响结肠癌预后的独立因素.结论5-LOX和VEGF在结肠癌组织中过度表达,5-LOX与结肠癌的Duke分期、浸润深度和有无转移关系密切,并与结肠癌的血管形成相关,可作为反映结肠癌生物学行为和判断预后的有效指标.
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5-脂氧合酶与肿瘤增殖和凋亡关系的研究进展
近年来研究发现在多种恶性肿瘤中5-脂氧合酶(5-ipoxygenase,5-LOX)表达都明显增高,而抑制5-LOX可抑制肿瘤的增殖与生长,这表明5-LOX在肿瘤的发生发展过程中可能起着重要作用,对发现肿瘤的增殖与凋亡以及治疗可能有重要的意义,本文就5-LOX与肿瘤的增殖和凋亡的关系做一综述.
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十二指肠腺癌组织中的5-LOX、c-myc蛋白的表达及临床意义
目的 检测十二指肠腺癌组织中5-脂氧合酶(5-LOX)和c-myc蛋白的表达情况并探讨其临床意义.方法 采用免疫组化SP法检测60例十二指肠腺癌及30例癌旁正常组织中5-LOX与c-myc蛋白的表达情况.结果 十二指肠腺癌组织中5-LOX和c-myc蛋白阳性率均明显高于癌旁正常组织,差异有显著性(P＜0.01);十二指肠腺癌组织中5-LOX的阳性表达情况与浸润深度、分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05);c-myc蛋白在癌组织中的阳性表达与浸润深度及淋巴结转移有关(P<0.05);二者在十二指腺癌表达存在明显的相关性(P=0.001).结论 5-LOX及c-myc蛋白表达异常与十二指肠腺癌的生物学行为密切相关,可作为反映十二指肠腺癌浸润、转移及判断预后的重要指标.
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5-氨基水杨酸抗HT-29细胞增殖作用及部分机制
目的 观察5-氨基水杨酸(5-aminosalicylic acid,5.ASA)对人结肠癌HT-29细胞增殖抑制作用及可能机制.方法 采用MIT法测定5-ASA抗HT-29细胞增殖的量效和时效关系,采用TUNEL法和免疫细胞化学法探讨作用机制.结果 模型对照组HT-29细胞增殖明显,不同剂量5-ASA对体外培养的结肠癌HT-29细胞增殖均具有明显抑制作用,呈剂量和时间依赖性;5-ASA在10～500 μmol·L-1剂量下,均可使HT-29细胞凋亡率增加,增殖细胞核抗原(PCNA)表达减弱;5-脂氧化酶(5-lipoxygenase 5-LOX)和环氧化酶-2(cycloxygenase-2 COX-2)蛋白表达均逐渐降低,且5-LOX减弱程度大于COX-2.结论 5-ASA具有抗HT-29细胞增殖作用,机制可能与阻断COX-2和5-LOX通路有关.
