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人支气管上皮细胞5-脂氧合酶表达与联苯胺的活化及细胞毒性的研究
目的 研究人支气管上皮(HBE)细胞内5-脂氧合酶(5-LOX)对联苯胺(BZD)的氧化代谢,为LOX作为细胞色素P450氧化代谢外源化合物的替代途径提供进一步的依据.方法 体外酶系统实验:BZD在含有大豆脂氧合酶(SLO)的酶体系中反应,用分光光度法检测体系中反应产物.细胞实验:HBE细胞染毒24h(BZO剂量分别为100、200、500μmol/L,AA861剂量分别为0.3、3.0、30.0 μmol/L),用Western-blot检测5-LOX蛋白表达;用单细胞凝胶电泳检测DNA损伤.同时,检测特异性5-LOX抑制剂(AA861)对5-LOX蛋白表达和对DNA损伤的影响.结果 在过氧化氢参与下,SLO可以介导BZD氧化生成二亚胺联苯胺.大反应速度(Vmax)值为1.42 nmol/(min·nmol)SLO,BZD的米氏常数(Km)值为1.48 mmol/L.LOX抑制剂上甲二氢愈创木酸可抑制该协同氧化作用.BZD可以使HBE细胞5-LOX蛋白表达增加,AA861对5-LOX蛋白表达无影响;BZO可以使HBE细胞产生明显的DNA损伤,AA861可以明显抑制BZD所致的DNA损伤,且有剂量-效应关系.结论 5-LOX在HBE细胞内的蛋白表达可以受BZD的影响.HBE细胞的5-LOX可能通过介导BZD协同氧化,产生亲电子白南基,而与DNA结合,使HBE细胞产生DNA损伤,这可能是BZD致癌的机制之一;AA861可以明显抑制这种作用.
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雷公藤内酯醇调节5-脂氧合酶对胰腺癌细胞增殖的影响
目的:探讨雷公藤内酯醇(Triptolide,TL)在胰腺癌细胞中5-脂氧合酶(5-LOX)蛋白的表达及对癌细胞生长的影响.方法:应用免疫细胞化学法检测胰腺癌细胞株SW1990和Capan2中5-LOX蛋白的表达,同时检测TL对胰腺癌细胞株SW1990 5-LOX蛋白表达的影响,采用MTT法和流式细胞术分别检测胰腺癌细胞SW1990的增殖和凋亡.结果:胰腺癌细胞株SW1990和Capan2中均表达5-LOX,并与细胞分化程度有关;TL抑制SW1990中5-LOX蛋白的表达,并抑制胰腺癌细胞SW1990增殖和促进细胞的凋亡,作用随浓度的增加而增强(P＜0.01);细胞的增殖和凋亡与5-LOX蛋白的表达相关(P＜0.01).结论:TL抑制胰腺癌细胞SW1990中5-LOX的表达,并抑制胰腺癌细胞增殖和诱导凋亡,5-LOX代谢途径在胰腺癌细胞的生长中发挥重要作用.
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戒烟对吸烟致敏大鼠气道5-脂氧合酶及其mRNA表达的影响
目的 通过研究戒烟对吸烟致敏大鼠气道5-脂氧合酶(5-LO)及其mRNA表达的影响,探讨吸烟及戒烟对支气管哮喘(简称哮喘)气道炎症的影响,为吸烟哮喘患者戒烟及治疗提供依据.方法 雄性Wistar大鼠40只,随机分为对照组、致敏组、吸烟组及戒烟组,每组10只.后3组应用卵白蛋白(OVA)致敏并长期(8周)吸入激发,制备哮喘模型;在激发第3周开始,将吸烟致敏组及戒烟致敏组大鼠置于自制熏箱内进行被动吸烟,吸烟时间为20周,戒烟时间为10周.采用免疫组织化学及原位杂交法检测各组大鼠气道5-LO蛋白及其mRNA的表达.结果 ①吸烟组气道5-LO蛋白的表达(32.58±2.78)及戒烟组气道5-LO蛋白的表达(26.36±2.34)明显高于致敏组(21.65±2.12)和对照组(15.38±1.68),差异有统计学意义(P值均＜0.01);戒烟组较吸烟组表达降低,差异有统计学意义(P＜0.01);致敏组高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).②吸烟组气道5-LO mRNA的表达(34.68±2.90)及戒烟组气道5-LO mRNA的表达(27.16±2.38)均高于致敏组(23.55±2.28)和对照组(15.78±1.72),差异有统计学意义(P值均＜0.01);戒烟组较吸烟组表达降低,差异有统计学意义(P＜0.01);致敏组高于对照组,差异有统计学意义(P ＜0.01).结论 吸烟可使致敏大鼠气道5-LO及mRNA表达增多,加重气道炎症.戒烟后其表达均有所下降,提示戒烟可减轻气道炎症,是防止哮喘发作的有效措施.
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被动吸烟对致敏大鼠气道5-脂氧合酶及其mRNA表达的影响
目的 通过研究吸烟对致敏大鼠气道5-脂氧合酶及其mRNA表达的影响,探讨吸烟对支气管哮喘(简称哮喘)气道炎症的影响,从而为临床上治疗吸烟哮喘提出实验依据.方法 雄性Wistar 大鼠30只,随机分为对照组、致敏组和吸烟致敏组.每组10只.后两组应用卵白蛋白致敏并长期(8周)吸人激发,制备哮喘模型;在激发第3周开始,将吸烟致敏组大鼠置于自制熏箱内进行被动吸烟.采用免疫组织化学及原位杂交法检测各组大鼠气道5-脂氧合酶蛋白及其mRNA的表达.结果 ①吸烟致敏组气道5-脂氧合酶蛋白的表达(32.58±2.78)明显高于致敏组(21.65±2.12)和对照组(15.38±1.68),差异有统计学意义(P值均＜0.01);致敏组高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);②吸烟致敏组气道5-脂氧合酶mRNA的表达(34.68±2.90)高于致敏组(23.55±2.28)和对照组(15.78±1.72),差异有统计学意义(P值均＜0.01);致敏组高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 吸烟可使致敏大鼠气道5-脂氧合酶及其mRNA表达增多,加重气道炎症.
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5-脂氧合酶与阿尔茨海默病
5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)是催化花生四烯酸(arachidonic acid,AA)生成5-羟基-6,8,11,14-二十碳四烯酸(5-hydroperoxy-6,8,11,14-eicosatetraenoic acid,5-HPETE)和各种白三烯(leukotrienes,LTs)类物质的关键酶.近年来研究显示,5-LOX参与阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的病理生理过程.抑制5-LOX可以降低β淀粉样蛋白(β-amyloid peptide,Aβ)的沉积、tau蛋白磷酸化、减轻神经炎症反应和调节突触功能,改善AD的认知功能障碍.该文就5-LOX与AD相关性研究进展进行综述.
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5-脂氧合酶抑制剂齐留通对胰腺癌细胞SW1990的生长抑制作用
目的 观察5-脂氧合酶(5-LOX)在胰腺癌细胞SW1990中蛋白、mRNA水平的表达,探讨5-LOX特异性抑制剂齐留通对胰腺癌细胞SW1990增殖和凋亡的影响及可能机制.方法 2003-05-10-2004-05-25,南通大学附属医院消化实验室采用半定量反转录-聚和酶链反应(RT-PCR)法和免疫细胞化学方法检测5-LOX在胰腺癌细胞SW1990中的表达,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪检测齐留通对细胞的生长抑制作用.结果 胰腺癌细胞SW1990中5-LOX mRNA及蛋白表达阳性,齐留通明显抑制胰腺癌细胞生长,并呈时间、浓度依赖性.结论 5-LOX特异性抑制剂齐留通对胰腺癌细胞有显著的生长抑制作用,为胰腺癌的防治提供了一个新的实验依据.
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上皮性卵巢癌中5-脂氧合酶表达及临床意义
目的 探讨5-脂氧合酶(5 -LOX)在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学Envision二步法,对浙江大学医学院附属妇产科医院2004年6月至2009年6月收治的卵巢上皮性肿瘤患者96例(恶性46例、交界性30例、良性20例)、正常卵巢组织10例中的5-LOX的表达进行检测.结果 5-LOX在46例卵巢癌组织和30例交界性上皮性卵巢肿瘤组织中的表达均阳性,在卵巢良性上皮性肿瘤中阳性率为10％,在正常卵巢组织中不表达.5 -LOX在卵巢癌和交界性上皮性卵巢肿瘤组织中的表达明显高于正常卵巢和卵巢良性上皮性肿瘤,差异有显著性(P ＜0.001)；5-LOX的表达强度与卵巢癌的FIGO分期、病理分级有关(P ＜0.001).结论 5-LOX在卵巢上皮性癌中高表达,且与分期分级等预后指标有关,5-LOX检测有助于卵巢癌的鉴别诊断,尤其是对预后判断具有临床应用价值.
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RNA干涉5-脂氧合酶基因表达对结直肠癌细胞生长抑制及ROS含量、NF-κB通路的影响
目的 探讨RNA干扰5-脂氧合酶(LOX)基因表达对结直肠癌细胞增殖凋亡及活性氧(ROS)含量和核转录因子(NF)-κB信号通路的影响.方法 参照LipofectamineTM2000产品说明书将干扰5-LOX表达的siRNA(si-5-LOX组)瞬时转染结直肠癌HCT116细胞,转染无意义的siRNA序列(阴性对照组,NC组)和仅加入脂质体(对照组)为对照组,Western印迹检测转染48 h后各组细胞中5-LOX及NF-κB信号通路p-IκBα和下游靶蛋白cyclinD1、Bcl-2的表达;流式细胞术检测细胞凋亡率及ROS含量;CCK8法分别于转染的24、48、72 h检测各组细胞活力.结果 转染si-5-LOX的HCT116细胞5-LOX的蛋白表达显著低于对照组(P<0.05);与NC组比较,si-5-LOX组在24、48、72 h的细胞活力均显著降低,在48 h的细胞凋亡率及ROS含量均显著升高,p-IκBα的蛋白表达显著升高,cyclinD1、Bcl-2的蛋白表达均显著降低(均P<0.05).结论 抑制结直肠癌细胞5-LOX的表达可降低细胞活力及诱导细胞凋亡,其机制可能与降低细胞内ROS含量和下调NF-κB信号通路有关.
关键词： 结直肠癌 5-脂氧合酶 凋亡 活性氧 核转录因子(NF)-kB信号通路 -
白三烯在动脉粥样硬化形成中的作用
白三烯（ LT）作为体内重要的炎性介质，已发现与哮喘发病密切相关。近年来动物和人体实验结果表明LT在动脉粥样硬化（ AS）发生中发挥重要作用，主要包括增强炎性细胞黏附血管壁细胞，增加血管通透性，降解细胞外基质（ECM）、加剧血管炎性反应等多方面作用〔1〕。
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脂氧素A4抑制5-LOX合成对脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用
目的 探讨脂氧素A4(LXA4)在大鼠缺血再灌注脑损伤的保护作用中5脂氧合酶(5-LOX)途径的作用和机制.方法 SPF级雄性Wistar大鼠随机分成假手术组、大脑中动脉区局灶性脑缺血(MCAO)组、MCAO+LXA4组及MCAO+ LXA4+ Boc2组.通过TTC染色法评估脑梗死体积;WB法测定5-LOX、ERK1/2、p-ERK1/2、p38/p-p38、JNK/p-JNK蛋白表达;ELISA法测定5-LOX产物LTB4/LTC4的表达.结果 MCAO+ LXA4组动物的神经功能缺损评分、脑含水量、梗死体积百分比较MCAO组明显改善(P＜0.05),并被Boc2部分阻断抑制作用;并且MCAO+ LXA4组大鼠脑组织中5-LOX、ERK1/2/p-ERK1/2蛋白表达量及其调控产物LTB4/LTC4较MCAO组也明显降低(P＜0.05),LXA4的抑制作用被Boc2部分阻断.结论 脂氧素A4对大鼠缺血再灌注脑损伤的保护作用与其对5-LOX及其调控产物的抑制作用相关.
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黄芩苷通过抑制5-脂氧合酶活性减轻大鼠脑缺血炎症反应和脂质过氧化反应
目的:黄芩苷是否通过抑制5-脂氧合酶(5-LOX)活性减轻大鼠脑缺血损伤诱导的炎症反应和脂质过氧化反应.方法:以成年雄性SD大鼠为研究对象,线栓法阻塞大鼠大脑中动脉(MCAO)建立脑缺血模型,检测缺血脑组织髓过氧化物酶(MPO)的活性和丙二醛(MDA)的含量,免疫组织化学检测5-LOX的表达水平,免疫印迹检测NF-κB的转录活性,ELISA法检测血清5-LOX代谢物白三烯B4(LTB)和半胱氨酸白三烯(CysLT)的含量.结果:黄芩苷减轻炎症反应的浸润和脂质过氧化反应,降低5-LOX和NF-κB的表达,减少LTB4和CysLT的产生.结论:黄芩苷可减轻脑缺血炎症和脂质过氧化反应,可能是通过抑制5-LOX活性而起作用的.
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哮喘患者外周血单核细胞5-脂氧合酶及5-脂氧合酶激活蛋白基因表达的研究
白三烯类(LTs)是花生四烯酸经5-脂氧合酶(5-LO)途径,并在5-脂氧合酶激活蛋白(FLAP)参与下生成的一类代谢产物,可趋化炎性细胞(LTB4),引起气道收缩、气道粘膜分泌增加和气道高反应性(LTD4、LTE4、LTC4),在哮喘的发病中起重要作用.有研究表明,哮喘患者稳定期及发作期LTs水平均较正常人高,因此,本研究用逆转录PCR方法检测了38例过敏性哮喘患者外周血单核细胞5-LO及FLAPmRNA的含量,并以20例正常人作对照,以探讨LTs增高的机制,并为通过该途径治疗哮喘提供资料.
关键词： 哮喘 5-脂氧合酶 5-脂氧合酶激活蛋白 -
5-脂氧合酶在体外培养的大鼠腹腔巨噬细胞中的表达
目的探讨5-脂氧合酶(5-LO)在体外培养的大鼠腹腔巨噬细胞中的表达.方法分离大鼠腹腔巨噬细胞培养一定时间,用高效液相色谱、Western blot和RT-PCR分别观察5-LO催化的代谢产物的生物合成、5-LO和5-脂氧合酶激活蛋白(FLAP)表达的变化,并用毛细管电泳定量分析RT-PCR产物.结果体外培养24 h对5-LO以及FLAP的表达没有明显影响,5-LO酶活性没有明显的变化;培养到第72小时,5-LO mRNA和蛋白表达没有明显的影响,但FLAP几乎检测不到,mRNA的量明显降低,检测不到白三烯B4(LTB4)和5-羟二十碳四烯酸(5-HETE).进一步培养到第120小时,5-LO的mRNA和蛋白表达明显下降,FLAP的mRNA和蛋白检测不到.毛细管电泳定量分析结果显示,培养1、24和72 h,5-LO的相对表达量没有明显变化,培养到120 h则下降了约80%.结论 5-LO可以在体外培养的大鼠腹腔巨噬细胞中稳定表达72 h.
关键词： 5-脂氧合酶 5-脂氧合酶激活蛋白 腹腔巨噬细胞 毛细管电泳 基因表达 -
5-脂氧合酶在大鼠外科脑损伤模型脑组织中的表达及作用
目的 研究大鼠外科脑损伤(SBI)模型脑组织中5-脂氧合酶(5-LOX)表达的空间分布、细胞定位和随时间变化的规律,并探讨其在SBI发病中的可能作用机制.方法 将72只健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术(Sham)组及SBI术后1 d(SBI-1d)组、3 d(SBI-3d)组、7 d(SBI-7d)组,每组18只.对SBI-1d、SBI-3d和SBI-7d组大鼠采用右侧额叶切除法建立SBI模型,Sham组大鼠只移除相应部位的颅骨,不伤及硬脑膜.采用干湿质量法测量损伤同侧、对侧脑组织的含水量;Garcia评分和杠杆平衡评分评估各组大鼠的神经行为学功能;免疫荧光化学染色确定5-LOX的空间分布及细胞定位;蛋白质印迹法检测5-LOX和核转录因子(NF)-κB的蛋白表达;生物化学法测定损伤区周围脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量.结果 (1)与Sham组相比,SBI-1d和SBI-3d组大鼠损伤侧脑组织含水量增加(P＜0.05);SBI-1d、SBI-3d和SBI-Td组大鼠出现神经功能障碍(P＜0.01),SBI-Td组大鼠的Garcia评分较SBI-1d、SBI-3d组改善(P＜0.05).(2)5-LOX主要分布在损伤区周围的脑组织中,其中以神经元表达为主,星形胶质细胞和小胶质细胞也有表达.(3)与Sham组相比,SBI-1d和SBI-3d组大鼠损伤区周围脑组织中5-LOX、NF-κB表达增加(P＜0.05),而SBI-7d组两者表达低于SBI-1d和SBI-3d组(P＜0.05),其中5-LOX表达增加在SBI术后第1天明显.(4)与Sham组相比,SBI-1d、SBI-3d和SBI-7d组大鼠损伤区周围脑组织中SOD活性降低(P＜0.05),SBI-1d和SBI-3d组MDA含量增加(P＜0.05).结论 SBI后,5-LOX主要表达于损伤区周围神经元,星形胶质细胞和小胶质细胞也有表达;且在SBI术后1d表达多.5-LOX加重脑损伤可能与NF-κB表达增多以及氧化应激增加有关.
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5-脂氧合酶的分子生物学研究
5-脂氧合酶是合成白三烯的关键酶,白三烯是体内一种重要的炎症和过敏介质.采用同源重组方式敲除胚胎干细胞中的5-脂氧合酶基因,小鼠能正常生长和发育,但对某些炎症损伤的反应性与正常小鼠不同.5-脂氧合酶在不同的细胞中表现出不同的亚细胞定位,分布于胞质或胞核,或两者都有.在一定条件下,5-脂氧合酶发生胞核内外的穿梭,提示5-脂氧合酶可能还具有传统酶催化作用以外的其他功能.
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5-脂氧合酶诱导表达系统的建立
为建立5-脂氧合酶(5LO)诱导表达系统,深入研究5LO功能、信号转导机制及药物筛选,采用PCR扩增含HindⅢ酶切位点的2 kb长的5LO cDNA基因片段并将其克隆入质粒pBI-G中构建重组表达载体pBI-5LO.pBI-5LO/pTK-Hyg共转染Tet-HeLa细胞.多西环素与转染细胞孵育48 h诱导目的基因表达.对构建的重组载体pBI-5LO进行序列测定,证实克隆的目的基因片段是5LO基因片段,且阅读框架正确.X-gal染色证实多西环素能诱导目的基因表达,阳性细胞的细胞核被染为蓝色.提示5LO诱导表达系统建立成功,证实其在细胞模型上系统工作.
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替泊沙林对裸鼠结肠癌移植瘤的抑制作用
目的 通过动物体内实验研究环氧合酶-2/5-脂氧合酶双重抑制剂(替泊沙林)对人结肠癌的抑制作用.方法10只裸鼠皮下接种HT-29人结肠癌细胞建立人结肠癌模型,随机分为治疗组和对照组.治疗组以替泊沙林与5％羧甲基纤维素钠溶液制成的混悬液给药,对照组不作任何治疗.治疗期间观察裸鼠皮下瘤体的生长情况,测算肿瘤体积.治疗结束后处死裸鼠并取瘤,测量肿瘤质量,检测环氧合酶-2/5-脂氧合酶在肿瘤组织中的表达,用免疫组化方法检测肿瘤微血管密度,用脱氧核糖核苷酸末端转移法酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡情况.结果 10只裸鼠全部成瘤,实验过程中无裸鼠死亡.实验结果显示:替泊沙林可抑制HT-29人结肠癌细胞的生长,可降低环氧合酶-2/5-脂氧合酶在人结肠癌细胞所致肿瘤组织中的表达水平,对诱导人结肠癌细胞诱导的裸鼠皮下移植瘤具有促进肿瘤细胞凋亡及抑制肿瘤微血管生成作用.结论环氧合酶-2/5 -脂氧合酶双重抑制剂替泊沙林可能通过促进结肠癌细胞的凋亡、抑制肿瘤微血管生成,从而抑制结肠肿瘤的生长.
关键词： 替泊沙林 环氧合酶-2 5-脂氧合酶 HT-29人结肠癌细胞 -
5-LO/FLAP与冠心病相关性的研究进展
冠心病(CAD)是当今世界上严重威胁人类健康的心血管疾病之一.CAD的发病机制复杂,其中CAD是一种慢性炎症反应的观点已为广大学者所认同.白三烯(LTs)是重要的炎症介质,具有强烈的促炎作用.5-脂氧合酶(5-LO)是催化花生四烯酸(AA)生成LTs的关键酶,5-脂氧酶激活蛋白(FLAP)是5-LO氧化生成LTs过程中所必需的蛋白质.近年研究发现,5-LO/FLAP级联,在CAD 的发病中具有重要作用.本文结合国内外文献,对5-LO/FLAP与冠心病的相关性研究做一综述.
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5-脂氧合酶在三阴性乳腺癌中的表达及其临床意义
目的 探讨5-脂氧合酶(5-LOX)在三阴性乳腺癌(TNBC)中的表达及其临床意义.方法 免疫组化法检测178例TNBC组织中5-LOX的表达情况,分析其与临床病理特征的相关性,并通过随访,分析不同表达组的生存情况.结果 TNBC组织中5-LOX阳性表达率70.22％ (125/178),其阳性表达与组织学分级、淋巴结转移呈正相关(P＜0.05).随访显示5-LOX阴性表达组5年无复发生存率和总生存率明显高于阳性表达组(43％∶13％,96％∶91％).结论 5-LOX的阳性表达与TNBC的不良预后相关,可能成为TNBC治疗的新靶点.
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5-脂氧合酶与脑缺血再灌注
5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LO)是催化花生四烯酸转化为白三烯的关键酶.研究表明,5-LO参与了Alzheimer病、脑血管病、癫癎和脑肿瘤等多种神经系统疾病的发生和演变过程.脑缺血再灌注时,5-LO的表达增加可能促进了神经细胞死亡.
