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5-脂氧合酶与肿瘤的关系研究进展
脂氧合酶(LOX)是一类非血红素铁蛋白,可催化具有顺,顺-1、4戊二烯结构的多不饱和脂肪酸(PUFA)转化为氢过氧化物,继而将该反应产物还原为羟基脂肪酸等物质.
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5-脂氧合酶在中枢神经系统的作用
5-脂氧合酶(5LO)是机体催化花生四烯酸生成生物活性分子白三烯的关键酶.中枢神经系统神经元有5LO的显著表达,海马和小脑表达水平高.5LO在体外神经元发育、老化及多种脑损伤过程中表达增高.5LO可能通过酶和非酶功能在中枢神经系统的生理和病理机制中发挥作用.糖皮质激素、褪黑素等参与5LO的转录调节.
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5-脂氧合酶抑制TNF-α诱导的胰腺癌细胞凋亡
目的:检测胰腺癌细胞中5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)及其代谢产物的表达情况,分析高表达5-LOX及LTB4对胰腺癌细胞生长凋亡的影响.方法:体外培养人胰腺癌细胞株ASPC-1,PANC-1和SW1990,并构建5-LOX基因稳定转染细胞株.用RT-PCR和Western blot检测细胞5-LOX mRNA和蛋白的表达,ELISA检测细胞培养上清中LTB4的含量,采用流式细胞仪、Annexin V/PI双染法检测TNF-α诱导细胞的细胞凋亡.结果:三种胰腺癌细胞株均表达5-LOXmRNA和蛋白,细胞上清中也都检测到一定量LTB4分泌.5-LOX基因稳定转染细胞株表达5-LOX和LTB4的水平上升.TNF-α(20 μg/L)处理野生型SW1990细胞,12和24 h后凋亡率分别为25.4%±3.65%和43.5%±5.23%,但该效应在高表达5-LOX的细胞株中明显减弱,分别为13.2%±2.01%和21.7%±3.65%.在野生型SW1990细胞培养中加入外源性LTB4(10nmol/L)能抑制TNF-α诱导的细胞凋亡,野生型与处理组细胞24 h后凋亡率有显著性差异(47.6%±5.32% vs 18.5%±5.69%,P＜0.01).用LTB4受体阻断剂处理5-LOX高表达细胞株,能恢复其对凋亡诱导的敏感性.结论:胰腺癌细胞均能表达5-LOX并产生LTB4,高表达5-LOX能抑制TNF-α诱导的胰腺癌细胞凋亡.
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靶向5-LOX的siRNA诱导胰腺癌细胞的凋亡
目的:采用RNA干扰技术(siRNA)阻断5-LOX基因的表达,观察其抑制人胰腺癌细胞增殖及诱导细胞凋亡的作用.方法:构建靶向5-LOx的siRNA质粒表达载体,采用Lipofectamine-2000转染人胰腺癌细胞株SW1990,采用RT-PCR检测RNA干扰后5-LOX mRNA表达,MTT法检测细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:靶向5-LOX序列特异性的三条siRNA(组1、组2、组3)可以有效地抑制SW1990细胞5-LOX基因表达,其表达抑制率分别为19.6%±1.9%、55.4%±2.6%和55.2%±2.7%.转染靶向5-LOX siRNA的三个质粒表达载体可以显著抑制SW1990细胞的增殖, 细胞接种24 h后,三组增殖抑制率分别为5.37%±1.19%、11.63%±1.25%和13.67%±1.04%:48 h后其增殖抑制率分别为16.13%±1.5%、26.63%±1.22%和25.47%±1.67%, 各siRNA组增殖抑制率高于空白组和阴性对照组(均P<0.05),转染后24 h和48 h三组细胞凋亡率分别为5.56%±1.05%、11.45%±1.44%、12.13%±1.36%和7.37%±1.23%、18.75%±1.5%和22.02%±1.45%,均高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05).结论:所构建的靶向5-LOX的siRNA质粒表达载体可以有效阻断SW1990细胞5-LOX基因表达,显著地抑制SW1990细胞增殖,并在一定程度上诱导其凋亡.
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联合抑制环氧合酶-2与5-脂氧合酶对胃癌细胞增殖凋亡的影响
目的:通过单独及联合应用选择性COX-2抑制剂尼美舒利和5-LOX抑制剂AA861处理胃癌细胞系AGS,比较各实验组的增殖凋亡率,探讨联合抑制COX-2和5-LOX两条通路对胃癌细胞系AGS增殖凋亡的影响.方法:AGS细胞在含100 mL/L小牛血清+100kU/L青、链霉素的RPMI1640培养基中培养,取对数生长期细胞做为实验组.以相差显微镜观察药物处理前后的细胞形态改变;设立AA861(25,50,100 μmol/L)组,尼美舒利(50,100,200 μmol/L)组,及AA861联合尼美舒利处理组(50 μmol/L AA861+100 μmol/L尼美舒利),用四氮唑蓝(MTT)法在24,48,72 h测量细胞吸光度,以此检测单用及联用AA861与尼美舒利对细胞生长增殖的影响;实验通过脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色法检测细胞凋亡率,以DNA-LADDER法观察凋亡.结果:相差显微镜观察,药物处理组细胞与对照组相比,形态发生明显改变.MTT显示,除尼美舒利200μmol/L的24,48 h处理组及AA861 25 μmol/L的24 h处理组外,尼美舒利和AA861基本呈时间、剂量依赖性抑制AGS细胞增殖.TUNEL染色法表明,尼美舒利或AA861处理组的细胞凋亡率随着剂量的增加而升高.药物处理48 h后,MTT法表明,细胞增殖在AA861组和尼美舒利组与两药联用组间相比差异显著(0.240±0.002 vs 0.207±0.001,P＜0.01;0.211±0.002 vs 0.207±0.001,P＜0.05);TUNEL染色法表明,单药组与两药联用组细胞凋亡率相比差异明显(AA861组:1 8.67%±0.03%,尼美舒利组:20.94%±0.48%vs两药联用组:23.76%±0.92%,P＜0.01);AO/EB染色法也同时表明,细胞凋亡单药组与两药联用组相比差异明显(AA861组:18.17%±0.28%、尼美舒利组:19.35%±0.74% vs两药联用组:23.78%±0.04%,P＜0.01).DNA琼脂糖凝胶电泳法显示,两药联合处理AGS细胞组与单药处理组比较,癌细胞增殖被抑制,凋亡明显增加.结论:COX-2抑制剂尼美舒利和5-LOX抑制剂AA861对胃癌AGS细胞的增殖抑制以及促凋亡作用基本呈时间浓度依赖性.联用尼美舒利和AA861抑制COX-2与5-LOX两条通路,与单独抑制其中一条通路比较,能更有效抑制胃癌细胞增殖,促进凋亡.
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5-脂氧合酶在大鼠急性坏死性胰腺炎组织中的表达
目的:研究5-脂氧合酶(5-lipoxygenase, 5-LOX)在急性坏死性胰腺炎(ANP)病程中的表达.方法:将SD大鼠54只随机分为3组:假手术组、ANP组和齐留通组. 经十二指肠行胆胰管逆行加压注射50 g/L牛磺胆酸钠, 诱导大鼠ANP模型. 各组大鼠分别于6、12、24 h处死. 用RTPCR、免疫组化和Western blot免疫印迹法检测胰腺组织5-LOX mRNA及相应蛋白的表达.ELISA方法检测血清LTB4水平. 应用全自动生化分析仪检测各组大鼠血清淀粉酶水平.结果:与ANP组相比较, 齐留通组各个时点5-LOX蛋白及mRNA表达均显著降低, 差异具有统计学意义(1.333%±0.516% vs 2.667%±0.516%, 3.000%±0.632% vs 4.500%±0.548%,3.833%±0.753% vs 5.833%±0.408%; 0.285%±0.005% vs 0.366%±0.004%, 0.608%±0.005% vs 0.949%±0.013%, 0.297%±0.002%vs 0.400%±0.006%, 均P<0.05). 假手术组血清淀粉酶、LTB4水平很低, ANP组和齐留通组水平都明显升高, 且齐留通组每个时点都较ANP组水平降低, 差异有统计学意义(血清淀粉酶:1967.50±41.21 IU/L vs 2123.50±49.11IU/L, 3242.33±87.76 IU/L vs 3531.17±74.14IU/L, 2286.83±93.91 IU/L vs 2903.33±90.90IU/L, 均P<0.05).结论:急性胰腺炎时, 5-LOX表达明显增加, 使用齐留通后, 5-LOX表达明显减少.
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雷公藤内酯醇对5-LOX代谢通路和胰腺癌细胞凋亡的影响
目的:探讨雷公藤内酯醇(triptolide,TL)通过抑制5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)代谢通路对胰腺癌细胞生长增殖及凋亡的影响.方法:台盼蓝染色检测TL对胰腺癌细胞PANC-1、ASPC-1和SW1990的杀伤作用;流式细胞术分析凋亡率;Real-time PCR和Western blot检测TL对5-LOX表达的影响;ELISA检测5-LOX下游产物LTB4的含量.构建5-LOX表达质粒,筛选稳定转染的Sw1990细胞株(SW1990/5-LoX),western blot检测野生型、转染空质粒、转染5-LOX基因的SW1990细胞5-LOX蛋白表达水平,并检测胰腺癌细胞高表达5-LOX对TL诱导凋亡的影响.结果:TL能诱导胰腺癌细胞凋亡,TL 50 μg/L作用24 h后活细胞比例为PANC-1 70.5%±6.8%,ASPC-1 61.2%±5.6%,SW1990 52.8%±5.3%,比对照组显著减少(P<0.05);凋亡细胞数12 h组与对照组相比,有差异(24.2±3.23vs 9.5±2.18,P<0.05).TL能显著抑制5-LOX表达及LTB4生成.稳定转染后,细胞内5-LOX蛋白表达量是Wt组的4倍左右,培养上清中LTB4表达水平也显著高于Wt组(P<0.01).过表达5-LOX使SW1990细胞增强了对TL诱导凋亡的抵抗作用,细胞死亡和凋亡率均明显低于对照组(P<0.01或0.05).结论:TL可以在体外诱导胰腺癌细胞增殖抑制和细胞凋亡,该效应与TL抑制5-LOX代谢通路的活性可能有直接关系,提示TL可能开发成临床治疗胰腺癌的有效药物.
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5-脂氧合酶促癌机制研究进展
5-脂氧合酶蛋白是花生四烯酸代谢途径中的一种关键酶,在恶性肿瘤的发生、发展过程中起了重要作用.抑制5-脂氧合酶及其产物的表达有可能预防和逆转恶性肿瘤的发生,本文结合国内外文献,就5-脂氧合酶分子生物学特征及促癌机制的研究进展作一综述.
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胃癌组织中5-脂氧合酶的表达及其与磷酸化Akt相的关性
目的: 检测5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)在胃癌组织中的表达,并探讨5-LOX对磷酸化Akt(phosphorylatedAkt,p-Akt)表达的影响.方法: 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测30例新鲜胃癌及癌旁正常组织标本中5-LOX mRNA表达水平;免疫印迹法(Westernblot)检测5-LOX和p-Akt蛋白的表达水平.结果: 5-LOX在胃癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织(76.7% vs 40%,P＜0.05,mRNA水平;56.7%vs30%,P＜0.05,蛋白水平).p-Akt蛋白在胃癌组织中的表达也显著高于癌旁正常组织(56.7%vs26.7%,P＜0.05).相关性分析表明,胃癌组织中5-LOX蛋白表达和p-Akt水平间无明显相关性(r=0.186,P＞0.05).结论: 5-LOX蛋白对胃癌的发生、发展有一定促进作用,但与PI3-K/Akt信号通路无关.
关键词： 胃肿瘤 5-脂氧合酶 磷酸化Akt 逆转录-聚合酶链反应 免疫印迹 -
MK886和Celecoxib抑制胰腺癌SW1990细胞生长及血管生成的实验研究
目的 观察5-脂氧合酶拮抗剂MK886、环氧化酶2拮抗剂Celeeoxib干预SW1990细胞后对细胞增殖及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响.方法 应用不同浓度的MK886、Celecoxib 以及两者联合处理SW1990细胞,采用胆囊收缩素(CCK-8)法检测细胞的增殖,RT-PCR法检测细胞白三烯B4受体1(BLT1) mRNA、前列腺素2(PGE2) mRNA、VEGF mRNA的表达.结果 10μmol/LMK886或20 mmol/L Celecoxib处理24h后,SW1990细胞的增殖受到明显抑制(1.80±0.06比1.65±0.10;2.04 ±0.03比1.86 ±0.02,P＜0.05),且随药物浓度的增加,细胞的增殖抑制更明显.两拮抗剂联合干预12h后,SW1990细胞的增殖即受到非常明显的抑制(1.72±0.05比1.52±0.05,P＜0.01).Celecoxib处理细胞48 h后,细胞BLT1、VEGF mRNA表达与对照组比较无明显变化,但PGE2 mRNA的表达明显减少(37.50比71.50,P＜0.05)；MK886或MK886+ Celecoxib联合处理细胞后,细胞BLT1、VEGF mRNA表达明显减少(40.30、22.75比126.50,P＜0.05),而PGE2 mRNA的表达与对照组比较无明显变化.结论 花生四烯酸的两条代谢途径均与胰腺癌的发生及增殖有密切关系,同时抑制两条途径可显著抑制胰腺癌细胞的增殖.
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抑制5-脂氧合酶表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 应用RNA干扰(RNAi)技术阻断5-脂氧合酶(5-LOX)的表达,观察其对人胰腺癌细胞SW1990增殖及凋亡的作用.方法 构建4个靶向5-LOX的小干扰RNA(small interference,siRNA)和1个阴性对照siRNA质粒表达载体,采用Lipofectamine TM2000法转染SWl990细胞,RT-PCR和Western blot检测RNAi后SWl990细胞的5-LOX mRNA和蛋白表达,MTT法检测细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 阴性对照和4个序列特异性的siRNA对SWl990细胞5-LOXmRNA表达的抑制率分别为(3.0±1.4)%、(18.8±1.5)%、(53.5±2.3)%、(56.1±2.0)%、(52.4±2.5)%;5-LOX蛋白表达抑制率分别为(4.5±2.0)%、(18.1±2.5)%、(50.4±4.3)%、(48.9±4.4)%、(45.9±4.0)%.转染24 h后癌细胞增殖抑制率分别为(2.1±1.0)%、(5.5±1.3)%、(11.9±1.2)%、(13.4±1.1)%、(13.8±1.3)%.;48 h的增殖抑制率分别为(3.0±1.3)%、(16.0±2.2)%、(25.7±2.5)%、(25.3±3.1)%、(27.2±3.2)%.转染24 h细胞凋亡率分别为(2.0±0.8)%、(5.3±1.0)%、(10.6±1.2)%、(12.4±1.0)%、(10.6±0.9)%;转染48 h的凋亡率分别为(3.0±1.0)%、(7.1±1.1)%、(17.5±0.9)%、(21.5±1.1)%、(15.7±1.0)%.结论 通过RNAi可以有效、特异地阻断SWl990细胞5-LOX的表达,并可以有效抑制肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞凋亡.
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5脂氧合酶激活蛋白基因单核苷酸多态性与冠心病的关联研究
目的 探讨5-脂氧合酶激活蛋白基因2354T/A和16699G/A多态性与冠心病的关系.方法 采用聚合酶链反应--限制片长多态性技术,对282例经冠状动脉造影证实的冠心病患者和79例对照者进行检测,分析5-脂氧合酶激活蛋白基因2354T/A和16699G/A多态性的基因型和等位基因频率分布情况,检验多态位点与冠心病的关联.结果 5-脂氧合酶激活蛋白基因2354T/A和16699A/G多态性在病例组和对照组均以TT,GG基因型为主.A等位基因为少见型.连锁不平衡分析显示2354T/A,16699G/A间不存在连锁不平衡(D'=0.798,r2=0.037).单因素分析显示以上2个多态未显示与冠心病的相关性,应用Logistic回归模型将混杂因素矫正后进行分析单个多态位点与疾病的关系时,以上2个多态同样未显示与冠心病的相关性.将以上多态全部纳入构建单体型,有两种单体型频率较高分别为:AG 28.6%、TG 68.9%,单体型分析显示,两组间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 5-脂氧合酶激活蛋白基因2354T/A和16699G/A多态性与中国天津汉族人群冠心病易感性无明显关联.
关键词： 冠心病 5-脂氧合酶 5-脂氧合酶激活蛋白 单核苷酸多态性 白三烯 -
AA-861抑制5-LO途径对KC和HSC的影响
目的 探讨5-脂氧合酶(5-LO)特异性抑制剂AA-861对肝枯否细胞(KC)和星状细胞(HSC)的活化、增殖和基因表达的影响.方法 (1)观察AA-861对脂多糖(LPS)诱导的活化KC凋亡、KC中5-LO mRNA和蛋白表达的影响;(2)分别将LPS和AA-861处理后的KC上清液加入静止HSC中,观察HSC的活化、增殖及基因表达情况.结果 (1)经LPS刺激后,KC中5-LO的mRNA和蛋白表达均显著增加,同时5-LO代谢产物的含量也显著增加;AA-861显著降低活化KC中5-LO mRNA和蛋白的表达及其培养上清中5-LO代谢产物的含量,并显著增加KC的凋亡,AA-861对静止状态的KC的凋亡和基因表达无明显影响.(2)加入活化KC上清液后,静止HSC的增殖显著增加,其活化相关基因如平滑肌肌动蛋白-α(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Collagen-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)等的表达也显著提高;加入AA-861处理后的活化KC上清液可抑制静止HSC的活化,降低其增殖力和活化相关基因的表达.结论 AA-861可通过抑制5-LO途径,诱导过度增殖的KC凋亡,从而抑制HSC的活化和增殖,并降低HSC活化相关基因的表达.
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5-脂氧合酶抑制剂AA-861治疗肝纤维化的实验研究
目的 探讨5-脂氧合酶(5-LO)特异性抑制剂AA-861对四氯化碳(CCI4)诱导的大鼠肝纤维化形成的影响.方法 在CCI4诱导的肝纤维化模型中,在注射CCI4的前2 d开始腹腔内注射AA-861(0.2 mg/100 g,1次/d),分别在注射CCI4的第2、4、6周处死大鼠.应用实时定量PCR检测肝脏中5-LO、平滑肌肌动蛋白-α(α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagen-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)等基因的表达,Western blot榆测肝脏5-LO蛋白的表达;检测肝功能和肝脏组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量和组织学变化,并对肝纤维化程度进行半定量计分系统(SSS)分级评分.结果 随着肝纤维化程度的加重,大鼠肝组织中5-LO、α-SMA、Collagen-1、MMP-2和TIMP-1等基因的表达显著增加,同时肝功能ALT、TBA等指标明显升高;而大鼠注射AA-861后各种基因表达明显降低,相对于MMP-2基因,TIMP-1基因mRNA表达的降低更为明显,Hyp、肝功能和肝纤维化程度评分也明显降低. 结论 AA-861可通过抑制5-LO途径,显著降低TIMP-1 Collagen-1和α-SMA等基因的表达,减轻CCI4诱导的大鼠肝纤维化程度.
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生长抑素对脂多糖刺激的大鼠库普弗细胞抑制作用的观察
目的 探讨生长抑素(SST)对脂多糖(LPS)刺激的原代培养大鼠库普弗细胞NO、TNFα和5-脂氧合酶(5-LO)表达的影响.方法 分离培养SD大鼠库普弗细胞,分为对照组、LPS刺激组、SST干预组,于12、24、48 h收集不同实验组细胞培养上清液,硝酸还原酶法测定NO水平,ELISA法检测TNFα含量,半定量RT-PCR法检测细胞5-LO mRNA的表达.结果 分离的库普弗细胞产生低水平的NO、TNFα和5-LO mRNA,LPS刺激后各时间点NO、TNFα和5-LO mRNA含量均明显高于对照组(P＜0.05);SST干预后各时间点NO、TNFα和5-LO mRNA含量低于LPS刺激组(P＜0.05),其中NO、TNFα含量在各时问点均高于对照组(P＜0.05),5-LO mRNA表达在12、24 h时间点高于对照组(P＜0.05),而在48 h时间点与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 生长抑素能抑制LPS诱导的库普弗细胞NO,TNFα和5-LO的表达.
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5-脂氧合酶激活蛋白基因多态性与缺血性卒中分子遗传学的研究进展
缺血性卒中是一个复杂性状的多基因遗传病,遗传流行病学研究结果提示遗传变异决定了其遗传易感性.近年来缺血性卒中遗传学的研究取得了长足的进展,通过连锁分析和关联分析陆续报告了一些与缺血性卒中相关的新的易感基因.5-脂氧合酶激活蛋白(5-1ipoxygenase activating protein,ALOX5AP)基因是2004年鉴定出来的第一个与缺血性卒中密切相关的基因.本文就ALOX5AP基因多态性与缺血性卒中相关性的研究进展作一综述.
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清热利湿饮治疗荨麻疹疗效观察及抗过敏作用机制初探
目的观察清热利湿饮治疗荨麻疹临床疗效及对患者治疗前后白介素2(IL-2)、白介素4(IL-4)水平的影响,探讨清热利湿饮对Ⅰ型变态反应及5-脂氧合酶的影响.方法将入选患者随机分为治疗组与对照组,88例治疗组患者口服清热利湿饮,63例对照组患者口服咪唑斯汀.应用放射免疫法对治疗组60例患者进行治疗前后IL-2、IL-4的检测并与20例健康成人的IL-2、IL-4水平作对照.实验部分建立大鼠Ⅰ型变态反应与花生四烯酸致大鼠足跖肿胀模型,分别随机分组,灌胃生理盐水、咪唑斯汀、清热利湿饮,观察其抑制Ⅰ型变态反应与5-脂氧合酶的效果.结果治疗组愈显率为82.95%,总有效率为94.31%,与对照组比较差异无显著性(P＞0.05).实验结果显示,清热利湿饮可明显抑制Ⅰ型变态反应与5-脂氧合酶活性.结论清热利湿饮治疗荨麻疹疗效确切,复发率低,其作用机制可能与抗过敏、抗组胺、抑制5-脂氧合酶活性、抗病原微生物、利尿等有关.
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5-脂氧合酶在急性肝衰竭大鼠中的表达变化及意义
目的 探讨5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LO)及其产物白三烯B4 (Leukotriene B4,LTB4)在急性肝衰竭大鼠模型中的变化及其在肝脏炎性损伤中的作用.方法 30只成年雄性Wistar品系大鼠分为实验对照组(6只)和肝衰竭模型组(24只).通过腹腔注射D-氨基半乳糖及脂多糖建立大鼠急性肝衰竭模型,动态观察4、8、16、24h各时间点大鼠肝组织的病理变化以及血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(T-BIL)的变化.荧光定量PCR测量肝组织5-LO mRNA变化,免疫组化法及蛋白质印迹法检测5-LO蛋白表达,ELISA试剂盒检测肝组织LTB4含量.结果 联合腹腔注射D-氨基半乳糖/脂多糖后,血清中ALT、AST及T-BIL逐渐升高,24h时达高峰,ALT(3992.6±290.7)U/L、AST(10 114.7±1 014.2)U/L,T-BIL (32.9±2.0)μmmol/L,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).24 h病理改变表现为肝细胞坏死、肝索解离,小叶及汇管区大量炎性细胞浸润.5-LO mRNA表达于造模后升高,8h表达高;与对照组比较,肝衰竭4、8、16h的表达差异有统计学意义(P＜0.01).造模后肝组织5-LO表达呈持续升高,24 h表达高.LTB4含量与5-LO变化趋势相同,于造模后24h浓度高,为(355.4±22.2) pg/ml.结论 5-LO及其产物LTB4参与急性肝衰竭的病理生理过程,并发挥重要的作用.
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5-脂氧
花生四烯酸经由5-脂氧合酶(5-LO)通路转化为白三烯类代谢产物.研究表明,5-LO参与了脑血管病、脑肿瘤、阿尔茨海默病和癫痫等多种神经系统疾病的发生和演变过程,尤其是5-LO与脑血管疾病的脑水肿、炎性反应等之间的关系已成为近年来研究的热点.5-LO在脑缺血/再灌注损伤时亦发挥重要作用,现主要对二者关系的研究进展予以综述.
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脂氧合酶介导的苯并(a)芘活化及DNA损伤
目的 探讨细胞内5-脂氧合酶(5-LOX)对苯并(a)芘(B[a]P)的代谢活化及DNA损伤的影响,为脂氧合酶(LOX)作为外源化学物氧化代谢的替代途径提供进一步依据.方法 体外酶系统实验:B(a)P在含有大豆脂氧合酶(SLO)的酶体系中反应,用分光光度法检测其氧化产物;酶系统中加入DNA,用高效液相色谱仪检测其DNA加合物.细胞实验:人支气管上皮细胞(HBE)染毒24 h,B[a]P剂量分别为4、8、16、32、64、128 μmol/L,抑制剂(AA-861)、萘普生和α-萘黄酮分别为0.1、1、10 μmol/L,用免疫印迹法(western-blot)法检测各组5-LOX蛋白表达情况;用流式细胞计数及单细胞凝胶电泳实验检测各组的细胞毒性及DNA损伤情况;同时,检测特异性5-LOX抑制剂(AA-861)及其他特异性酶抑制剂(萘普生和α-萘黄酮)对5-LOX蛋白表达和对DNA损伤的影响.结果 在过氧化氢(H2O2)参与下,SLO可以协同氧化B[a]P,氧化生成B[a]P-7,8-环氧化物,在一定范围内呈剂量效应关系.GTP能够抑制SLO介导的B[a]P氧化,其IC50为0.46 mg/L.SLO介导B[a]P活化后,生成新的产物,出现一明显新增峰,但本次在体外未能检测到与DNA形成加合物.随着B[a]P染毒浓度的增加,HBE细胞存活率逐渐下降,AA-861和萘普生抑制后,细胞存活率上升,差异均有统计学意义(P＜0.05).B[a]P可以使HBE内5-LOX蛋白表达增加,且表达量随B[a]P浓度增加而增加,5-LOX抑制剂AA-861对5-LOX蛋白表达基本无影响;流式细胞计数及单细胞凝胶电泳实验显示,各B[a]P染毒组DNA损伤指标随着B[a]P浓度增加而加重,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).与64 μmol/L B[a]P组比较,加入抑制剂AA-861、萘普生和α-萘黄酮后DNA损伤程度逐渐减轻,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 在HBE内,B[a]P可能主要通过5-LOX介导的协同氧化,形成亲电子物质与DNA结合,使HBE产生DNA损伤,AA-861可以明显抑制该反应.
