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南瓜核糖体失活蛋白的生物学活性及其结构
目的制备对肿瘤细胞生长有抑制活性的细胞毒素:南瓜核糖体失活蛋白(南瓜蛋白).方法 Sp Sepharose Fast Flow离子交换层析制备,SDS-PAGE电泳分析,N端顺序测定,晶体培养和X-射线衍射,噻唑蓝法(MTT)测定南瓜蛋白对肿瘤细胞生长抑制活性.
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麻疯树核糖体失活蛋白curcin在大肠杆菌中高效表达条件的研究
目的:编码麻疯树毒蛋白(curcin)成熟蛋白的基因原核表达载体的构建及其高效表达条件的研究.方法:根据GenBank上麻疯树的cDNA序列设计引物,用PCR方法从麻疯树基因组中扩增得到编码麻疯树毒蛋白成熟蛋白的基因;将其导入原核表达载体pQE-30,pET-32中,并将其转入大肠杆菌获得重组菌株.在不同诱导剂、不同温度、不同诱导时间等条件下诱导其产生重组蛋白并进行检测比较.结果:用PCR方法从麻疯树基因组中扩增得到编码麻疯树毒蛋白成熟蛋白的基因,成功构建了原核表达载体pQE-R,pET-R,并获得重组菌株PRM,PRB.在不同诱导剂、不同温度、不同诱导时间等条件诱导下,PRB均无重组蛋白产生,而PRM却能以包涵体的形式表达curcin.结论:重组菌PRM在诱导6 h,28℃,IPTG 0.5 mmol·L~(-1)时表达curcin蛋白的效率高.
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蓖麻毒素及其解毒剂研究进展
蓖麻毒素(ricin)是一种从蓖麻籽中提取的剧毒植物蛋白,是核糖体失活蛋白(RIP)的一种,可以使核糖体失去蛋白质合成能力并终导致细胞死亡,毒素在体内通过独特的"逆向转运"途径进入胞浆并与核糖体结合发挥毒性作用,目前对蓖麻毒素尚无有效的抗毒剂.本文对蓖麻毒素的结构,转运过程,作用机制以及抗毒剂的研究进展进行综述.
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丝瓜籽核糖体失活蛋白基因Luffin-a原核表达载体的构建
目的 探讨丝瓜籽核糖体失活蛋白基因Luffin-a原核表达载体的构建方法.方法 从Pubmed中查到Luffin-a的mRNA全序列,用RT-PCR的方法从未成熟的丝瓜种子中克隆Luffin-a基因,T-A克隆后鉴定核苷酸序列,构建原核表达载体pET-15b(+)-Luffin-a,转化大肠杆菌BL21(DE3),并经IPTG诱导表达;SDS-PAGE鉴定Luffin-a表达产物.结果 克隆出Luffin-a基因,IPTG诱导后大肠杆菌培养液和超声破碎的菌体沉淀中都有Luffin-a表达产物.结论 本研究成功构建了Luffin-a原核表达载体.
关键词： 丝瓜籽 核糖体失活蛋白 Luffin-a基因 -
苦瓜核糖体失活蛋白的纯化及其诱导HL-60 细胞凋亡的研究
目的:探讨运用假配基亲和层析和凝胶过滤层析相结合的手段纯化苦瓜核糖体失活蛋白(RIP)的可行性,同时观察其抑制HL-60细胞增殖并诱导其发生凋亡的生物学活性.方法:利用假配基亲和层析法、凝胶过滤层析法提取纯化苦瓜RIP;通过绘制生长曲线和MTT检测观察苦瓜RIP抑制HL-60细胞增殖的活性,运用流式细胞仪检测细胞周期相分布及细胞凋亡率.结果:运用硫酸铵分级沉淀、Blue Sepharose CL-6B假配基亲和层析、Sephadex-G75凝胶层析等方法提取、纯化得到了高纯度的苦瓜RIP,并且能够获得较高的得率;一定作用剂量的苦瓜RIP不仅能够抑制FHL-60细胞的增殖活性,还可以诱导其发生凋亡.结论:运用假配基亲和层析和凝胶过滤层析相结合的手段提取、纯化苦瓜RIP是可行的;苦瓜RIP可能是通过诱导细胞发生凋亡来发挥其抗肿瘤活性.
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鸢尾属植物化学及药理学研究进展
报道了近十年来对鸢尾属植物化学研究的新进展,并对其中某些已知成分的药理活性进行概述.
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经穿膜肽与PEG修饰的核糖体失活蛋白Gelonin抗肿瘤作用的研究
目的:通过对核糖体失活蛋白Gelonin进行化学修饰,利用穿膜肽和聚乙二醇(PEG)偶联来提高其到达肿瘤部位和进入肿瘤细胞的能力,使Gelonin更高效地发挥抑瘤作用. 方法:利用FPLC Superdex75分子筛预装柱纯化系统对所修饰的Gelonin进行纯化后,在不同细胞系测试细胞毒性;通过倒置荧光显微镜、流式细胞分析技术等对药物进入纤维肉瘤细胞HT1080的能力进行评价;采用小动物活体成像技术考察药物体系在荷瘤动物体内的分布情况. 结果:采用分子筛色谱纯化可以得到纯度相对较高的修饰产物,其毒性较无修饰的Gelonin强,且在HT1080细胞系作用明显;细胞摄取结果显示,与未修饰的Gelonin相比,该药物体系具有更高的细胞摄取效率;动物成像结果表明,PEG5000修饰可以改变Gelonin在动物体内的分布情况,增加在肿瘤的药物蓄积.结论:穿膜肽和PEG5000修饰后的Gelonin有较高的肿瘤细胞摄取和杀伤能力,药物在肿瘤的蓄积量较高,从而增强了药物的抑瘤效果.
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浅谈苦瓜的保健作用
苦瓜是我们经常食用的一种蔬菜,它属于葫芦科苦瓜属植物,性昧苦寒,具有清凉解热、滋养强壮等功效.但是由于它味很苦,许多北方人不太喜欢食用苦瓜.其实苦瓜中富含具有降低血糖、调节酶活性、抗肿瘤和抗病毒等作用的生物活性成分,目前科学家已经提纯并证实的成分有苦瓜凝集素、苦瓜素、核糖体失活蛋白、苦瓜素苷、胡萝卜甾醇、MAP 30蛋白、P蛋白等.本文仅简介苦瓜在降血糖、抗肿瘤和抗病毒方面的保健作用.
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天花粉蛋白的研究进展
天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)是从葫芦科栝楼属植物栝楼的根块中提取出来的一种碱性蛋白,属于Ⅰ型核糖体失活蛋白(RibosomeInactivating Proteins,RIPs).它与双链RIPs-蓖麻毒蛋白(Ricin)的A链在一级结构上有56%的同源性.
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主动免疫：预防蓖麻毒素、相思子毒素中毒
蓖麻毒素( Ricin toxin, RT )和相思子毒素( Abrin toxin,AT)都属于大分子植物来源的蛋白毒素,属于Ⅱ型核糖体失活蛋白( Ribosome-inactivating proteins,RIP),能够抑制细胞蛋白合成而具有极强的细胞毒性。由于来源广、毒性强等特点,二者均被认为是重要的致死性生物毒素战剂,美国疾病控制中心( CDC)定义为B级生物威胁[1]。因此,开展对RT和AT的生防疫苗的研究,对提高军队和国家应对生物战和生物恐怖的能力和水平,增强生防能力和保障国家安全,具有非常重要的军事意义和社会意义。
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商陆抗病毒蛋白体外抑制HBV的实验研究
探讨商陆抗病毒蛋白(pokeweed ativiral protein PAP)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用.不同浓度的PAP-S(pokeweed antiviral proteinfrom seeds)作用于HepG2.2.15,应用ELISA、荧光定量PCR,分别检测药物作用后细胞上清液的HBsAg、HBeAg、HBV DNA水平的变化.PAP-S处理HepG2.2.15后72h发现,PAP-S在＞1μg/ml时有明显的抗HBV效应,在所试验浓度范围(1-10)μg/ml内,倒置显微镜下未发现明显的细胞毒性,PAP-S为50μg/ml时,发现部分细胞脱壁.PAP-S对HBsAg、HBeAg、HBV DNA呈剂量时间依赖性.PAP-S在体外有较强的抗HBV作用.
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植物核糖体失活蛋白在医药领域中的应用
核糖体失活蛋白(RIPs)是一类自然界中广泛存在的蛋白质,它能使核糖体大亚基rRNA断链以致核糖体失活,在医药和农业领域具有潜在的应用价值,文章主要是从分类,药理活性,进入细胞的途径,氨基酸同源序列分析,基因克隆并体外重组表达,突变改造进行综述.
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苦瓜籽核糖体失活蛋白的分离纯化及抗氧化活性的研究
目的改进苦瓜籽核糖体失活蛋白的提取工艺,并对其抗氧化活性进行研究.方法苦瓜籽经粉碎,50 mmol/L乙酸抽提,硫酸铵沉淀,经阳离子交换及凝胶柱色谱等步骤进一步纯化后,测定所得两种核糖体失活蛋白的理化性质. 结果纯化后得到一种分子量为29.6 kD的蛋白质和一种小分子量蛋白质,两者在无细胞系统中抑制50%蛋白质合成浓度分别为4.3×10-6、1.4×10-6 mol/L,含糖量分别为4.83%、 1.82%,类超氧化物歧化酶(SOD)活性分别为79.05、17.25 u/mg.阳性对照纯品SOD活性为1 267 u/mg.结论从苦瓜籽中分离纯化出两种不同分子量的核糖体失活蛋白均为糖蛋白质,且具有一定的抗氧化活性.
关键词： 核糖体失活蛋白 抽提 纯化 蛋白质合成抑制活性 类超氧化物歧化酶活性 -
核糖体失活蛋白抗HIV的研究进展
核糖体失活蛋白是一类可使真核细胞核糖体失活而抑制蛋白合成的植物毒蛋白,广泛分布于植物界,具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节及抗生育等多种生物学活性.本文探讨了其抗人免疫缺陷病毒(HIV)活性及作用机制,它们可通过杀伤病毒感染细胞,使病毒DNA拓扑失活,抑制HIV整合酶等多种途径发挥抗HIV作用,因其高效、安全和不产生耐药性而优于齐多夫定(AZT),给艾滋病治疗开辟了一个新的领域.
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商陆抗病毒蛋白体外对HepG2.2.15细胞HBV复制的影响
目的探讨商陆抗病毒蛋白(pokeweed antiviral protein,PAP)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的活性.方法以不同浓度的PAP-S作用于培养的HepG2.2.15细胞,采用ELISA、荧光定量PCR法分别检测细胞上清液中的HBsAg、HBeAg及HBV DNA水平的变化,并用MTT比色法检测细胞成活率.结果随着PAP-S浓度的增加,对HBsAg、HBV DNA的抑制作用亦逐渐增强,不同药物剂量组之间差异十分显著(P＜0.01).PAP-S处理后96h,PAP-S对HBsAg和HBeAg的半数抑制浓度(ID50)分别为6.9μg/ml和3.2μg/ml,半数中毒浓度(CD50)为29.3μg/ml,治疗指数(TI)=ID50/CD50分别为4.3和9.3.MTT试验结果显示,药物的细胞毒性也呈剂量依赖型,倒置显微镜下观察在50μg/ml～100μg/ml剂量组出现部分细胞脱壁和死亡现象.结论 PAP-S在体外有直接的抗HBV作用.
关键词： 核糖体失活蛋白 商陆抗病毒蛋白 乙型肝炎病毒 HepG2.2.15细胞 -
核糖体失活蛋白抗血液病肿瘤的研究
核糖体失活蛋白是广泛存在于高等植物中能抑制核糖体翻译功能的一类毒蛋白.它能够对哺乳动物核糖体大亚基上的28SrRNA进行脱嘌呤作用,从而破坏核糖体的结构,抑制蛋白质的生物合成.本文就核糖体失活蛋白的生物学活性以及近年来在抗血液病肿瘤方面的研究进展做一综述.
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核糖体失活蛋白抗肿瘤作用的研究进展
目的介绍核糖体失活蛋白抗肿瘤作用的研究概况及展望.方法总结核糖体失活蛋白抗肿瘤作用的机理及应用.结果核糖体失活蛋白具有明显的抗肿瘤作用.结论核糖体失活蛋白是很有发展前景的抗肿瘤植物药.
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南瓜蛋白对B16细胞的诱导分化作用(简报)
植物核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating protein,RIP)通常按分子结构不同分为两型:Ⅰ型RIP为单链蛋白,如天花粉蛋白;Ⅱ型RIP是通过二硫键连接的双链蛋白,如蓖麻毒素.Ⅰ型RIP与Ⅱ型RIP的A链一样,是一类RNA N-糖苷酶或多核苷酸:腺苷糖苷酶,具有抗生育、抗病毒和抗肿瘤等多种生物学活性.
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绿色荧光蛋白/PAP-a融合表达载体的构建及其在SMMG-7721细胞中的表达
目的构建绿色荧光蛋白/PAP-a融合表达载体,并检则其在肝癌细胞SMMC-7721细胞中的表达.方法采用PCR方法获得PAP-a基因;将该基因片段克隆入带有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,CFP)报告基因的真核表达载体pEGP-N1中,构建融合表达载体pEGFP-PAPa;通过脂质体介导的方法将该载体转染到SMMC-7721中,Western blot检测PAP-a的瞬时表达,荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达.结果pEGFP-PAPa转染SMMC-7721细胞后,在细胞中检测到PAP-a基因片段,Western blot可以检测到PAP-a在SMMC-7721细胞表达,用荧光显微镜观察到转染细胞中有绿色荧光蛋白表达.结论 pEGFP-PAPa在SMMC-7721细胞中获得了表达,表达的融合蛋白具有PAPa和绿色光蛋白的双重活性,该载体的成功表达是研究PAP-a抗肿瘤或抗病毒活民生的基础.
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天花粉蛋白的构效关系及进入细胞的途径
天花粉蛋白(Trichosanthin, TCS)因具有妊娠引产、抗肿瘤、抗病毒及免疫调节等多种药理学作用而倍受关注.研究天花粉蛋白的结构特征,明确其活性中心及过敏原性区域对于深入了解天花粉蛋白的生物学功能十分重要.该文对近年来关于天花粉蛋白构效关系的研究进展作了综述,并着重介绍了天花粉蛋白进入细胞的具体途径,为研究其他的核糖体失活蛋白提供新的思路.
