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PCR-SSP法进行HLA分型的影响因素分析
目的:探讨DNA模板质量、DNA聚合酶(Taq)用量对人类白细胞抗原(HLA)分型结果的影响,从而确定PCR-序列特异性引物(PCR-SSP)技术的更加优化的扩增体系.方法:采用PCR-序列特异性引物(PCR-SSP)的方法,对山西地区14 400名骨髓供者的血样进行了人类白细胞抗原(HLA)基因分型,回顾性分析DNA模板的纯度、DNA用量、DNA聚合酶(Taq)酶用量对HLA分型结果的影响.结果:每个PCR反应的DNA模板量在30 ng～50 ng之间时PCR扩增效果优;每个PCR反应所用Taq酶为0.23 U时PCR扩增效果优.结论:DNA模板量和Taq酶用量是使用PCR-SSP技术进行HLA分型的主要影响因素;模板DNA的纯度对实验结果影响不大.
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基因诊断在MNS血型系统中的应用
MNS血型系统的抗原取决于寡糖和多肽构成的唾液糖蛋白(sialocophorins),存在于红细胞膜的血型糖蛋白A(glycophorin A,GPA),受控于4号染色体的GPA基因,在临床输血和遗传学研究中具有重要意义.近年来时有因MNS血型系统血型不符造成输血时产生抗体;或由于抗体的产生了造成血型鉴定和配血困难,甚至引起新生儿溶血病的报告[1-4],储备一定数量已知MNS血型的健康献血者是建立和完善红细胞库的基础,也是为临床提供更配型血液制品的基础.应用PCR-SSP技术对109名随机供血者进行了基因分型,并与血清学表型结果相比较,报告如下.
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HLA-DQB1等位基因多态性与复发性尖锐湿疣的关系
本文采用PCR-SSP技术分析HLA-DQB1等位基因DQB1*0501、DQB1*0502、DQB1*0201、DQB1*0402与复发性尖锐湿疣间的关系,为寻找尖锐湿疣的易感基因及尖锐湿疣复发的遗传学因素提供依据.
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Diego血型基因在西安地区汉族人群中的频率分布
目的研究人类红细胞Diego(Di)血型抗原在西安地区汉族人群中的分布频率.方法采用PCR-SSP技术对220例随机个体红细胞的Dia和Dib抗原分型进行检测.结果检测到3种表现型.其中210例表现为Dia-b+,9例表现为Dia+b+,仅1例表现为Dia+b-.Dia基因频率为0.0250,Dib基因频率为0.9750.结论西安地区汉族人群的Dib抗原表达高于Dia,Dia-b-的表现型未检测到.
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中国汉族人群中Dia抗原和Dib抗原的分子遗传分析
目的 研究中国汉族人群Diego血型系统中Dia和Dib抗原表达的分子遗传背景.方法 采用血型血清学方法对2990例非血缘关系的捐血者进行Diego血型鉴定,从中随机选择20例表现型为Di(a-b+)的样本,以及筛选到的所有Di(a+b-)稀有血型样本,采用PCR-SSP、DNA直接测序方法分析Diego血型基因的分子遗传背景.结果 2990例捐血者中,发现Di(a+b-)表现型2例,Di(a+b+)167例,Di(a-b+)2821例.随机选择的20例表现型为Di(a-b+)的DNA样本,经PCR-SSP法检测的基因型为DI2DI2,对DI基因第19外显子直接测序,2561位上碱基为C.2例稀有血型Di(a+b-)的DNA序列在19外显子2561位上碱基为T,基因型为DI1DI1.结论 中国汉族人群Dia和Dib抗原表达的分子遗传基础是DI基因第19外显子2561位上碱基T-C的置换,引起第854位氨基酸的改变.
