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维生素E对CC14作用下HSC增殖和ECM影响
目的 观察维生素E(VE)对四氯化碳(CC14)作用下大鼠肝星状细胞(HSC)增殖和细胞外基质(ECM)产生的影响.方法 采用原位灌注方法分离大鼠HSC.结果 CC14作用下大鼠HSC3H-脯氨酸(3H-Pro)的掺入显著增加,Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、透明质酸(HA)、板层素(LN)及纤维连接素(FN)的分泌水平明显提高.200 nmol/L VE预处理4 h可有效抑制CC14作用下大鼠HSC 3H-胸腺密啶(3H-TdR)、3H-Pro的掺入,VE保护能使CC14作用下HSC分泌PCⅢ、HA、LN和FN减少与HSC产生丙二醛(MDA)下降,二者呈正相关.结论 VE可抑制CC14作用下大鼠HSC增殖和通过抗氧化损伤抑制HSC ECM的分泌.
关键词： 维生素E 肝星状细胞(HSC) 细胞外基质 -
b-FGF和FAK与慢性乙型肝炎肝纤维化的相关性
目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)和粘着斑激酶(FAK)在慢性乙型肝炎患者不同肝纤维化分期(S)的免疫组化表达和定位情况,并探讨二者在肝纤维化进展过程中的作用和二者之间的相关性.方法 选取进行肝组织活检的慢性乙型肝炎患者95例,对肝组织进行苏木素-伊红染色、Masson三色、网状纤维染色,并进行病理肝纤维化分期(S0～S4).免疫组织化学法测定肝组织中b-FGF和FAK 在不同时期的表达及定位特点,各组间进行统计分析.结果 b-FGF在肝纤维化不同发展阶段,其表达逐渐增高,差异有高度显著性(p<0.01),与病理分期有显著正相关(r=0.953 ,P<0.01);FAK在肝纤维化不同发展阶段,其表达逐渐增高,差异有高度显著性(P<0.01),与病理分期有显著正相关(r=0.935,P<0.01).b-FGF及FAK的表达呈显著正相关 (r=0.965,P<0.001).结论 肝组织中b-FGF、FAK的表达在肝纤维化发生发展过程中发挥重要作用,对二者的检测有助于对乙型肝炎患者肝纤维化进展程度的评估,间接反映病情活动的临床价值.
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肝纤维化发病机制中细胞和分子机制的研究进展
关于肝纤维化形成的复杂的细胞和分子联系已经有了相当多的研究进展.近的数据表明,纤维化进程的终止和纤维分解途径的恢复可以逆转晚期肝纤维化甚至肝硬化.因此,需要更好地阐明参与肝纤维化的细胞和分子机制.HSC(肝星状细胞)的激活是肝纤维化发生的中心事件,此外还有产生基质的其他细胞来源,包括肝门区的成纤维细胞,纤维细胞和骨髓来源的肌纤维母细胞.这些细胞与其邻近细胞通过多种联系聚集产生纤维疤痕并造成持续性损伤.阐明不同类型的细胞的相互作用,揭示细胞因子对这些细胞的影响,理清活化HSC基因表达的调控,将有助于我们探索新的肝纤维化治疗靶点.此外,不同的病因有不同的致病途径,弄清这一点有助于针对特异性疾病治疗方法的发现.本文概述了肝纤维化的细胞和分子机制的新研究进展,可能为未来治疗方法带来新的突破.
关键词： 肝脏 肝纤维化 肝硬化 肝星状细胞(HSC) 细胞外基质 -
小鼠肝星状细胞(HSC)中ATF5促进TRAIL基因的表达及其对同种异体胰岛移植物的保护作用
目的 探讨小鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)中转录激活因子5(activating transcription factor 5,ATF5)促进肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)的表达及其对同种异体胰岛移植物的保护作用.方法 半定量RT-PCR检测HSCs中ATF5 mRNA、TRAIL mRNA的表达水平,流式细胞术检测HSCs表面TRAIL蛋白质水平.慢病毒(LV-ATF5-RNAi)感染HSCs,针对ATF-5基因进行RNA干扰,半定量RT-PCR检测慢病毒感染的HSCs中ATF5 mRNA及TRAIL mRNA水平.单向混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)观察HSCs和慢病毒感染的HSCs对T细胞的增殖反应.分别将单纯胰岛、胰岛联合HSCs、胰岛联合慢病毒感染的HSCs移植到小鼠的肾包膜下,比较移植胰岛的存活时间.结果 γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)上调HSCs中ATF5 mRNA和TRAIL mRNA水平(P＜0.01),IFN-γ亦可上调HSCs表面TRAIL蛋白质水平.慢病毒(LV-ATF5-RNAi)感染HSCs后,HSCs中ATF5 mRNA水平明显下降(P＜0.01),TRAIL mRNA水平亦下降(P＜0.05).IFN-γ作用于感染慢病毒的HSCs后,HSCs中ATF5 mRNA和TRAIL mRNA水平亦增加(P＜0.01),但明显低于未被慢病毒感染的HSCs(P＜0.01).HSCs可明显抑制T细胞增殖反应(P＜0.01),慢病毒感染的HSCs亦能抑制T细胞增殖反应(P＜0.05),但抑制作用明显低于未被慢病毒感染的HSCs(P＜0.01).单纯胰岛移植组(A组)移植胰岛中位存活时间为11天;胰岛联合HSCs移植组(B组)移植胰岛中位存活时间为88天,B组胰岛移植物存活时间明显长于A组(P＜0.01);胰岛联合慢病毒感染的HSCs移植组(C组)移植胰岛中位存活时间为18天,C组胰岛移植物存活时间长于A组(P＜0.01),但明显短于B组(P＜0.01).结论 小鼠HSCs中ATF5可促进TRAIL基因表达,表达TRAIL的HSCs可以抑制T细胞的增殖反应,此HSCs与胰岛细胞联合移植,明显延长小鼠同种异体胰岛移植物存活时间.
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熊果酸(UA)对大鼠活化型肝星状细胞(HSC)的NADPH氧化酶(NOX)亚基及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路活化的影响
目的 观察熊果酸(ursolic acid,UA)对大鼠活化型肝星状细胞-6(hepatic stellate cell T6,HSC-T6)NADPH氧化酶(NAPDH oxidase,NOX)亚基及其调控的磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶(phosphatidyl inositol 3-kinase/Akt,PI3K/Akt)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen-activated protein kinase,P38MAPK)信号通路及其对基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)、基质金属蛋白酶-1(metal matrix proteinase-1,MMP-1)蛋白表达的影响,并探讨其机制.方法 取对数生长期的HSC-T6细胞,随机分成6组:空白对照组、瘦素组(100 ng/mL)、UA干预组(UA 50 μmol/L+瘦素)、NOX抑制剂DPI干预组(DPI 20 μmol/L+瘦素)、P38MAPK抑制剂SB203580干预组(SB203580 10 μmol/L+瘦素)及PI3K抑制剂LY294002干预组(LY294002 10 μmol/L+瘦素).采用Western blot法分别检测NOX亚基gp91phox、p22phox、p67phox、Rac1蛋白表达;信号通路PI3K、Akt、P38MAPK的活化及TIMP-1、MMP-1蛋白表达.结果 UA能显著抑制瘦素诱导的gp91phox、p22phox、p67phox、Rac1蛋白表达(P均＜0.01),但UA对gp91phox、p67phox蛋白表达的抑制作用不及DPI和LY294002.UA能抑制瘦素诱导的PI3K蛋白表达及Akt、P38MAPK蛋白磷酸化(P均＜0.01),与DPI及LY294002作用的差异无统计学意义.UA能抑制瘦素诱导的TIMP-1蛋白表达,同时促进MMP-1蛋白表达(P均＜0.01).结论 UA能抑制瘦素诱导的大鼠HSC-T6细胞NOX亚基gp91phox、p22phox、p67phox、Rac1表达及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路的活化;其下调TIMP-1蛋白及上调MMP-1蛋白表达的机制可能与UA抑制NOX调控的PI3K/Akt及P38MAPK信号通路有关.
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抗肝纤维化药物研究思路与探讨
从肝纤维化致病因素方面介绍了抗肝纤维化药物的研究思路及新进展.肝纤维化的形成与发展与许多的致病因素有关,如炎症反应、氧化应激、肝星状细胞活化等.针对不同的致病因素,如促使肝星状细胞活化、抗氧化、抗炎症反应等方向进行了逐一分析,对近年肝纤维化药物的研究方向进行了归类与讨论,并对新的抗肝纤维化思路方向进行了阐述,希望对今后的抗纤维化研究有一定的促进及帮助作用.
关键词： 肝纤维化 炎症反应 氧化应激 肝星状细胞(HSC) 细胞外基质(ECM) 自主神经系统 -
苦杏仁苷对HSC-T6细胞分泌作用的影响
目的:观察苦杏仁苷对肝星状细胞(HSC)-T6细胞Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA活化,以及Ⅰ型胶原、透明质酸等分泌的影响.方法:将HSC-T6细胞系分为以下4组,每组细胞均置于6孔板中.4组分别为:正常组,苦杏仁苷高剂量(10-3 mol/L)组,苦杏仁苷中剂量(10-4 mol/L)组和苦杏仁苷低剂量(10-5 mol/L)组.RT-PCR检测Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA,酶联免疫法检测HSC-T6 Ⅰ型胶原的分泌,放射免疫法检测透明质酸的含量.结果:各苦杏仁苷组对Ⅰ型胶原基因表达均有明显的抑制作用,与正常组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).以苦杏仁苷中剂量组为明显,苦杏仁苷高剂量组次之,苦杏仁苷低剂量组再次之.提示苦杏仁苷对HSC-T6细胞Ⅰ型胶原mRNA表达有明显的抑制作用,但这种抑制作用或并不与剂量成正比.各苦杏仁苷组对Ⅲ型胶原基因表达均有明显的抑制作用,与正常组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).以苦杏仁苷高、中剂量组明显,苦杏仁苷低剂量组次之.24 h时,Ⅰ型胶原的0D450值苦杏仁苷各组与正常组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).72 h时,苦杏仁苷各组与正常组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),但苦杏仁苷各组组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).正常组透明质酸分泌曲线与苦杏仁苷低剂量组稍有重叠,位置较苦杏仁苷高、中剂量组分泌曲线高.但24 h、72 h时,4组透明质酸含量比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).96h时,苦杏仁苷高、中剂量组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),其余组间比较,差异仍无统计学意义(P＞0.05).结论:苦杏仁苷对HSC-T6细胞活化后的细胞外基质(ECM)分泌功能有明显的抑制作用,此可能是其抗肝纤维化的主要机制之一.
关键词： 肝纤维化 肝星状细胞(HSC) 苦杏仁苷 分泌 -
PI3K抑制剂对肝星状细胞PI3K/AKT通路及Ⅲ型胶原表达的影响
目的 探讨PI3K抑制剂(PI103)对肝星状细胞(HSC) PI3K/AKT通路及Ⅲ型胶原表达的影响,为肝纤维化的治疗提供理论基础.方法 将液氮保存下的HSC株,于37℃,5％C02孵育箱中复苏传代培养,同步化后将细胞分为3组:空白对照组、CCl4组、CCl4+PI3K抑制剂组.QPCR方法检测PI3K、AKT信号分子mRNA水平的变化;免疫细胞化学方法测定HSC的PI3K、AKT信号分子和Ⅲ型胶原表达情况.结果 CCl4组和空白对照组比较,PI3K、AKT信号分子mRNA水平和蛋白表达均增多,Ⅲ型胶原生成增多,差异有统计学意义(P＜0.05).CCl4组和CCl4+PI103组比较,PI3K、AKT信号分子mRNA水平和蛋白表达均减少,Ⅲ型胶原生成减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PI3K抑制剂可降低PI3K、AKT信号分子及Ⅲ型胶原的表达,进而阻断肝纤维化进程.
关键词： PI3K/Akt通路 肝星状细胞(HSC) Ⅲ型胶原 -
RNA的靶向干扰在肝纤维化中应用研究
肝纤维化是肝脏慢性受损的结果,目前还没有更好的方法用于治疗肝纤维化. RNA干扰(RNAi)被称为是一个功能强大的工具后转录基因沉默,可作为肝纤维化基因治疗的新途径.但是它在体内是缺乏特异性的,妨碍了其在肝纤维化治疗中的应用.为了克服此缺点,国内外专家进行了大量实验研究,如流体力学为基础的研究,局部注射,细胞膜表面选择性配体和特异性启动子或增强子等,本文对RNA靶向干扰在肝纤维化应用进行综述.
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肝星状细胞的激活在大鼠小肝移植供肝损伤中的作用
目的: 在大鼠小肝移植模型的基础上,检测大鼠小肝移植中肝星状细胞的激活在供肝损伤中所起的作用.方法: 建立大鼠小肝移植模型;按供肝与受体肝重量比,分全肝移植组和小肝移植组.观察两组7 d生存率;术后6 ,48 h处死大鼠,取下肝脏标本,应用α-SMA抗体进行免疫组织化学染色以测定肝星状细胞(Hepatic stellate cell)的激活程度.结果: 成功建立了大鼠小肝移植模型;全肝移植组和小肝移植组7 d生存率分别为91.7%(11/12)和16.7%(2/12);两组间比较,在各时间点上,小肝移植组α-SMA的表达均高于同一时间点全肝移植组α-SMA的表达,表明小肝移植组HSC激活的程度总体上高于全肝移植组.结论: 在大鼠小肝移植中,肝星状细胞的激活与供肝的损伤密切相关.
关键词： 供肝损伤 肝星状细胞(HSC) 移植 -
植物雌激素木黄酮对HSC-T6细胞增殖及雌激素受体表达的影响
目的 研究植物雌激素木黄酮对体外培养的肝星状细胞(HSC-T6)的增殖、活化、胶原合成以及对雌激素受体(ER)表达的影响,探讨木黄酮抑制肝纤维化的作用机制.方法 选择细胞系HSC-T6为体外细胞模型,随机分为 4组,分别加入不同浓度的木黄酮(0.5、5、50 μmol/L),同时设未加任何药物的空白对照组.作用24 h后采用MTT法检测HSC T6细胞的增殖情况,放射免疫法测定细胞上清液Ⅲ型胶原(PCⅢ)、透明质酸(HA)的含量;免疫组化法观察木黄酮对各组HSC-T6细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及ER表达的影响.结果 木黄酮各剂量组均不同程度地抑制HSC T6细胞的增殖,降低其α-SMA的表达,减少PCⅢ及HA的分泌,且其抑制作用呈剂量依赖性;给予木黄酮后,HSC-T6细胞的ER表达增强,也呈剂量效应关系.结论 木黄酮可抑制体外培养的HSC-T6细胞的活化与增殖,减少细胞外基质的产生,抑制肝纤维化的形成.其作用机制可能与木黄酮增加HSC的ER表达有关.
关键词： 肝纤维化 肝星状细胞(HSC) 木黄酮 雌激素受体(ER) -
PI3K抑制剂对四氯化碳刺激的肝星状细胞增殖和Ⅰ型胶原表达的影响
目的 探讨PI3K抑制剂对四氯化碳(CCl4)刺激的肝星状细胞(HSC)增殖和Ⅰ型胶原表达的影响,为肝纤维化的治疗提供理论基础.方法 将液氮保存下的HSC株,于37℃,50 mL/L CO2孵育箱中复苏传代培养,同步化后将细胞分为5组:空白对照组、CCl4组、CCl4+1 μmol/L PI103组、CCl4+2μmol/L PI103组、CCl4 +4 μmol/L PI103组,分别培养48 h.用透射电子显微镜初步观察了细胞形态改变；MTT比色法测定细胞增殖情况；免疫细胞化学测定细胞的Ⅰ型胶原表达情况.结果 CC14组与空白对照组比较,细胞生长旺盛,细胞数目增多,Ⅰ型胶原表达增多；透射电子显微镜下可见CCl4+4μmol/L PI103组比CCl4组凋亡细胞显著增多,细胞数目减少；MTT和免疫细胞化学实验结果显示,与CCl4组比较,CCl4+1μmol/L PI103组、CCl4 +2μmol/L PI103组、CCl4 +4μmol/L PI103组细胞的增殖和Ⅰ型胶原的表达均减少,随着PI103剂量加大,细胞的增殖和Ⅰ型胶原的表达均减少,但CCl4+4 μmol/L PI103组和CCl4+2μmol/L PI103组比较,细胞的增殖无明显变化.结论 PI3K抑制剂PI103可抑制活化的HSC的增殖,促进其凋亡以及减少其Ⅰ型胶原的表达.
关键词： PI3K抑制剂 肝星状细胞(HSC) 增殖 Ⅰ型胶原 肝纤维化 PI3K/Akt信号通路
