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CDA-Ⅱ抑制肺腺癌细胞增殖及C-erbB2表达的实验研究
目的:研究细胞分化剂CDA-Ⅱ(cell differentiation agent-Ⅱ)抑制人肺腺癌细胞A549增殖及对癌基因C-erbB2表达的影响.方法:不同浓度的CDA-Ⅱ作用人肺癌细胞A549,用CCK-8法检测细胞增殖抑制率；RT-PCR和Western blot检测经CDA-Ⅱ作用后A549细胞C-erbB2表达的改变.结果:CDA-Ⅱ能明显抑制肺腺癌细胞增殖,且抑制效应呈剂量依赖性.C-erbB2在CDA-Ⅱ抗人肺癌细胞A549增殖中表达下调.结论:CDA-Ⅱ可有效抑制人肺癌细胞A549增殖,该作用可能与抑制C-erbB2的信号传导通路有关.
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醌茜素对人肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响及初步机制研究
醌茜素是一种具有高效性、高选择性和细胞能透性的药物。虽然醌茜素能够有效抑制前列腺癌细胞的增殖[1]，但醌茜素对肺癌细胞的作用机制尚不清楚。本文研究了醌茜素对人肺癌A549细胞周期及细胞凋亡的影响，并初步探讨其机制。
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枸杞多糖对人肺癌A549细胞影响的研究
目的:探讨枸杞多糖(LBP)对人肺癌A549细胞的影响及作用机制.方法:将LBP作用于肺癌A549细胞,应用MTT法、电镜和钙离子测定等技术测定LBP的抗肿瘤作用及作用机理.结果:LBP呈剂量依赖性(100mg/L～2000mg/L)地抑制人肺癌A549细胞的增殖,诱导其凋亡,并可使细胞内钙离子浓度升高.结论:LBP可诱导A549细胞凋亡,其作用机制可能与细胞内钙离子浓度升高有关.
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骨形成蛋白-2对肺癌A549细胞膜型基质金属蛋白酶-1表达的影响
目的:探讨骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对人肺癌A549细胞膜型基质金属蛋白酶-1(membrane type 1-matrix metalloproteinase,MT1-MMP)表达的影响.方法:Western杂交检测MT1-MMP蛋白质表达.采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA)检测细胞培养液中活性基质金属蛋白晦-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的浓度.结果:BMP-2可促进A549细胞MT1-MMP蛋白质表达,并呈剂量和时间依赖关系.ELISA进一步显示BMP-2可增加A549细胞培养液中活性型MMP-2的含量.结论:BMP-2可促进A549细胞MT1-MMP的表达及MMP-2的激活.肺癌组织中BMP-2表达的增加可通过促进肺癌细胞MT1-MMP表达及MMP-2激活而促进肺癌细胞的侵袭转移,此可能为肺癌侵袭转移的另一重要机制.
关键词： 骨形成蛋白-2 膜型基质金属蛋白酶-1 人肺癌A549细胞 -
注射用胸腺法新对人肺癌A549细胞凋亡的影响
目的：研究注射用胸腺法新对人肺癌A549细胞凋亡的影响。方法：以0（空白对照）、25、50、100、200、400 mg/L注射用胸腺法新作用于肺癌A549细胞24、48、72 h后，用MTT法检测并计算细胞增殖抑制率。以0（空白对照）、50、100 mg/L注射用胸腺法新作用于肺癌A549细胞48 h后，用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况，用Western blot法检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达和蛋白激酶B（Akt）的磷酸化水平。结果：与空白对照比较，注射用胸腺法新作用后A549细胞的增殖抑制率增加，与浓度和作用时间呈正相关（P＜0.05）；50、100 mg/L的注射用胸腺法新作用48 h后A549细胞的凋亡率增加（P＜0.05）；100 mg/L的注射用胸腺法新作用48 h后A549细胞中Caspase-3表达增强、Bcl-2/Bax和Akt磷酸化水平降低（P＜0.05）。结论：注射用胸腺法新可通过激活Caspase-3、下调Bcl-2/Bax比例、抑制Akt信号通路来抑制A549细胞增殖，并促进其凋亡。
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粉防己碱对人肺癌A549细胞血管生成拟态的影响
目的:研究粉防己碱对人肺癌A549细胞血管生成拟态的影响.方法:采用细胞黏附试验观察粉防己碱对A549细胞黏附作用的影响;通过细胞迁移试验检测粉防己碱对A549细胞迁移能力的影响;通过血管生成拟态试验观察粉防己碱对A549细胞体外类血管生成的作用;实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测粉防己碱对A549细胞血管生成拟态相关基因表达的影响.结果:5、10、20 μmol/L粉防己碱作用A549细胞30 min后,细胞的黏附作用受到抑制,并与浓度呈正相关;与对照比较,5、10、20 μmol/L粉防己碱处理A549细胞12、24h后,A549细胞迁移数减少,A549细胞管腔形成数明显减少,管腔长度明显缩短;A549细胞以粉防己碱处理后,血管生成拟态相关基因VE-cadherin、VEGF的表达减弱.结论:粉防己碱可抑制A549细胞黏附、细胞迁移和血管生成拟态,其机制可能与抑制血管生成拟态相关基因VE-cadherin、VEGF的表达有关.
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知母皂苷B-Ⅱ抑制人肺癌A549细胞增殖和迁移的机制研究
目的:研究知母皂苷B-Ⅱ(TB-Ⅱ)抑制人肺癌A549细胞增殖和迁移的机制.方法:使用0(空白对照)、1、10、100μg/ml的TB-Ⅱ处理A549细胞48 h后,分别提取细胞总RNA及总蛋白,采用实时定量荧光-聚合酶链反应和Western blot法分别检测细胞内白细胞介素18(IL-18)mRNA及蛋白表达;通过转染沉默A549细胞内IL-18基因,比较未转染组、阴性对照组和转染组细胞内IL-18 mRNA及蛋白表达,然后用10μg/ml的TB-Ⅱ处理转染后的细胞24、48、72 h,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,划线法观察细胞迁移能力变化.结果:与空白对照比较,TB-Ⅱ处理后A549细胞内IL-18 mRNA及蛋白表达均增加(P<0.05或P<0.01),且与浓度呈正相关.与未转染组比较,转染组细胞内IL-18 mRNA及蛋白表达均降低(P<0.01);与TB-Ⅱ处理的未转染细胞比较,TB-Ⅱ处理72 h后的转染细胞增殖活性和迁移能力均增强(P<0.01).结论:TB-Ⅱ可通过上调IL-18基因的表达来抑制A549细胞的增殖和迁移.
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半枝莲提取物对人肺癌A549细胞的凋亡作用及其对凋亡相关基因表达的影响
目的：了解半枝莲提取物对人肺癌A549细胞的凋亡作用及其对凋亡相关基因表达的影响，探讨半枝莲提取物的抗肺癌作用及其分子生物学作用机制。方法：采用70％乙醇水溶液制备半枝莲提取物；实验组的半枝莲提取物浓度为3 mg／L、6 mg／L、12 mg／L ，对照组不加药物。采用MTT 法测定药物对细胞生长的抑制率；采用流式细胞仪检测细胞凋亡率；采用RT‐PCR法测定细胞凋亡相关基因Survivin、Caspase‐3和内对照β‐actin的表达水平。结果：3 mg／L、6 mg／L、12 mg／L浓度实验组的OD值均低于对照组；实验组的抑制率分别为（23．53±5．84）％、（39．71±6．77）％和（66．18±8．45）％。对照组3 m g／L、6 m g／L、12 m g／L浓度实验组的细胞凋亡率分别是（3．76±0．82）％、（16．61±3．19）％、（21．34±4．52）％、（35．19±5．80）％；3 m g／L、6 m g／L、12 m g／L浓度实验组的细胞凋亡率均高于对照组。3 mg／L、6 mg／L、12 mg／L浓度实验组的Survivin／β‐actin均低于对照组；3 mg／L、6 mg／L、12 mg／L浓度实验组的Caspase‐3／β‐actin均高于对照组。结论：半枝莲提取物可通过诱导细胞凋亡作用抑制人肺癌A 549细胞的生长，其分子机制为下调Survivin的表达水平和上调Caspase‐3的表达水平。
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β-榄香烯对肺癌A549细胞的差异基因筛选及鉴定
目的:筛选β-榄香烯处理前后肺癌A549细胞的差异基因并对其进行鉴定,为进一步研究靶基因的功能奠定基础.方法:CCK-8法检测β-榄香烯对肺癌A549及H1299细胞的增殖抑制作用及其对肺癌A549细胞的药物敏感性;运用基因芯片技术检测β-榄香烯处理前后A549细胞的基因表达谱变化并筛选出差异基因进行数据分析;使用实时荧光定量核酸扩增检测系统(Real-time Quantitative PCR Detecting System, qPCR)筛选出与基因芯片实验结果一致且表达丰度较高的基因,构建慢病毒干扰载体,高内涵细胞功能学筛选(HCS)实验选择增殖抑制明显的基因,进而进行阳性基因单靶点筛选,并用qPCR和Western-Blot分别对阳性靶点进行鉴定.结果:CCK-8法两轮增殖检测结果:β-榄香烯对人肺癌A549细胞的半数抑制浓度(IC50)值较H1299细胞稳定,选用A549细胞进行后续实验细胞;A549细胞药敏试验结果:随着时间和浓度的升高,A549细胞对β-榄香烯的药物敏感性增加,呈一定的时间和浓度依赖性;基因芯片技术筛选出β-榄香烯处理前后A549细胞有差异表达的基因721个,其中上调基因273个,下调基因448个,从下调基因筛选出30个在肺癌中尚未报道但可能具有潜在功能的基因;运用qPCR筛选出20个基因进行HCS筛选,结果显示慢病毒转染后细胞增殖抑制表型明显的基因为POLE2;qPCR检测单靶点RNAi效率,结果显示shPOLE2-PSC34533基因敲减效率达75.6%(P<0.05).Western-Blot鉴定结果显示靶点对POLE2基因的外源表达在蛋白质水平有显著的敲减作用,进一步证实POLE2是有效靶点.结论:β-榄香烯可下调肺癌A549细胞POLE2基因的表达,其可能为肺癌临床治疗的一个潜在靶点.
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南方红豆杉水提物协同厄洛替尼对人肺癌A549细胞COX-2、MMP-2表达的影响
目的 研究南方红豆杉水提物协同厄洛替尼抑制人肺癌A549细胞及对其COX-2、MMP-2表达的影响.方法 采用MTT法检测厄洛替尼对A549细胞增殖的抑制作用;采用MTT法检测不同浓度厄洛替尼联合南方红豆杉水提物干预后,人肺癌A549细胞的增殖情况;Western blot法检测不同浓度厄洛替尼联合南方红豆杉水提物干预后人肺癌A549细胞环氧酶-2(Cyclo Oxygenase-2,COX-2)、基质金属蛋白酶-2(Matrix Metallo Proteinase-2,MMP-2)的蛋白表达量.结果 厄洛替尼对A549细胞的增殖有抑制作用;低剂量厄罗替尼联合南方红豆杉水提物组抑制率明显高于标准剂量厄洛替尼组(P<0.05);Western blotting法显示两药联合组COX-2、MMP-2的蛋白表达明显低于相应单药厄洛替尼组(P<0.05),低剂量厄洛替尼联合标准剂量南方红豆杉水提物组COX-2、MMP-2蛋白表达明显低于标准剂量厄洛替尼组(P<0.05).结论 南方红豆杉水提物能协同厄洛替尼增强抑制人肺癌A549细胞增殖,疗效呈相加效果,下调COX-2、MMP-2蛋白表达为其可能机制.
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硫酸软骨素对人肺癌A549细胞增殖及侵袭能力影响
目的 探讨硫酸软骨素(CS)对人肺癌A549细胞增殖及侵袭能力的影响及可能的分子机制.方法 常规方法培养人肺癌A549细胞,并给予含不同剂量CS的培养液培养,采用噻唑盐(MTT)法检测CS对A549细胞增殖的影响;采用流式细胞术(FCM)碘化丙啶染色法检测CS对A549细胞周期的影响;采用Transwell侵袭实验检测CS对A549细胞侵袭能力的影响.结果 CS各浓度组干预A549细胞后,与对照组相比细胞生长均受到限制,差异具有显著性(F=10.39,q =6.45～17.48,P＜0.05).24 h细胞被抑制25％和50％时CS的浓度为6.6和28.4 g/L.以7和30 g/L的CS干预A549细胞24 h后,FCM检测结果显示,与对照组相比,G0/G1期和G2/M期比例明显降低,S期比例明显升高,差异有显著性(F=16.29～38.01,q=6.15～16.38,P＜0.05).Transwell侵袭实验显示,实验组A549细胞穿膜细胞数明显少于对照组,差异有显著性(F=3.19,q=4.89、15.38,P＜0.01).结论 CS对人肺癌A549细胞具有抑制增殖和侵袭的作用,其机制可能与抑制细胞分裂周期有关.
