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过量氟对大鼠体内、外I型胶原蛋白的影响
为研究过量氟对大鼠骨中I型胶原蛋白的影响,经饮水投氟复制大鼠氟中毒模型(NaF 221mg/L),测定氟中毒大鼠血清中骨钙素含量,骨中无机质、胶原含量和胶原交联度;酶消化法分离大鼠颅骨成骨细胞,经0.5mmol/L和1.0mmol/L NaF染毒48h后,用免疫组化方法观察过量氟对成骨细胞I型胶原表达水平的影响.结果表明:大鼠染毒两个月后,氟中毒大鼠血清骨钙素含量、骨中无机质百分含量较对照组显著增加(P<0.05);骨中胶原含量、胶原交联度较对照组显著下降(P<0.05);体外成骨细胞染氟后,I型胶原蛋白分泌明显减少.提示过量氟可抑制I型胶原蛋白的合成;胶原蛋白减少是导致氟骨症的原因之一.
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补骨脂提取物对体外培养小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞分化的影响
目的:研究补骨脂提取物对体外培养新生小鼠颅骨Mc313.E1细胞分化的影响.方法:以小鼠成骨细胞株Mc3T3-E1作为药物筛选的细胞模型,将培养的Mc3T3-E1小鼠成骨细胞分为4组:空白组,补骨脂提取物(含生药)0.02,O.2,2 g·L~(-1)不同剂量组.检测细胞ALP,I型胶原蛋白的含量,采用real-time PCR测定补骨脂提取物对MC3r13.E1细胞AIJP,I型胶原蛋白及骨钙素mRNA表达的影响.结果:补骨脂提取物生药剂量O.2 g·L~(-1),能提高MX3T3-E1细胞ALP的活性,促进I型胶原蛋白分泌.同时分别在7～14 d对Mc3r13-E1细胞ALP,以及在14-21 d I型胶原蛋白、骨钙素mRNA表达有明显的促进作用.结论:中药补骨脂提取物能有效促进成骨细胞的分化,为研究中药补骨脂的作用机制提供参考.
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大鼠脊髓损伤后TIMP-2、CollagenI和CollagenIV的表达情况及其肢体运动功能的研究
目的 观察大鼠脊髓损伤后 TIMP-2、Collagen I 和 Collagen IV 的表达情况,探讨其对大鼠肢体运动功能的影响.方法 将 60 只雌性 SD ( 2 个月龄 ) 大鼠按随机数表法随机分为假手术组、术后 3 天组、术后 5 天组、术后 7 天组和术后 9 天组,每组 12 只.假手术组仅行椎板切除术,其余组采用 NYU 脊髓打击器建立脊髓损伤模型.术后 1、3、5、7、9 天应用 BBB 肢体运动功能评分对大鼠肢体运动功能进行评分;采用尼式染色观察脊髓神经元形态;采用免疫组织化学染色法检测脊髓组织 TIMP-2、Collagen I 和 Collagen IV表达;Western blot 检测 TIMP-2、Collagen I 和 Collagen IV 的蛋白表达量.结果 ( 1 ) 脊髓损伤后,大鼠 BBB肢体运动功能评分显著下降,随着时间延长,大鼠 BBB 肢体运动功能评分逐渐增高,与术后 1 天相比,术后 7 天和术后 9 天大鼠肢体 BBB 运动功能评分增高,差异有统计学意义 ( P<0.05 );( 2 ) 尼氏染色观察发现,假手术组脊髓和神经元结构完整,尼氏体饱满,脊髓损伤各组脊髓和神经元结构被破坏,但术后 9 天大鼠脊髓和神经元的形态有所改善;( 3 ) 免疫组化检测显示假手术组 TIMP-2、Collagen I 和 Collagen IV 表达量不高,脊髓损伤各组 TIMP-2、Collagen I 和 Collagen IV 表达均有不同程度升高,与假手术组相比差异有统计学意义 ( P<0.05 ),术后 5 天 TIMP-2 的表达量高且差异有统计学意义 ( P<0.05 ),术后 7 天 Collagen I 和Collagen IV 的表达量高且差异有统计学意义 ( P<0.05 ).结论 脊髓损伤后大鼠肢体运动功能的变化可能与TIMP-2,I、IV 型胶原蛋白表达的变化有关.大鼠脊髓损伤后,脊髓组织中 TIMP-2、Collagen I 和 Collagen IV表达增高,TIMP-2 表达量在伤后 5 天达到高峰,Collagen I 和 Collagen IV 表达量在伤后 7 天达到高峰,有助于促进脊髓损伤模型大鼠肢体运动功能恢复.
关键词： 大鼠 脊髓损伤 基质金属蛋白酶组织抑制因子 I型胶原蛋白 IV型胶原蛋白 -
瘦素对成骨细胞增殖及Collagen I和Cbfa1 mRNA表达的影响
目的 研究瘦素在体外对原代培养乳鼠颅盖骨成骨细胞增殖及对CollagenI(I型胶原蛋白)和Cbfa1 mRNA表达的影响.方法 培养乳鼠成骨细胞,以乳鼠成骨细胞为体外实验模型,采用MTT法检测不同浓度瘦素(0、40、80和160 ng/ml)作用于成骨细胞后的增殖情况;通过RT-PCR方法检测不同浓度瘦素对CollagenI和Cbfa1 mRNA的表达的影响.结果 瘦素作用于成骨细胞后,可促进其增值,OD值显著增加(P<0.01);瘦素增加CollagenI和Cbfa1 mRNA的表达,呈剂量效应关系.结论 瘦素促进成骨细胞增殖,同时通过调节CollagenI和Cbfa1的表达,促进成骨细胞分化,进而促进骨形成.
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rhPTH(1-34)对成骨细胞增殖、Collagen I及Osterix mRNA表达的影响
目的 观察间歇给予重组人甲状旁腺激素(1-34)[rhPTH(1-34)]对体外成骨细胞增殖、I型胶原蛋白(CoHagen I)及Osterix mRNA表达的影响,初步探讨rhPTH(1-34)对体外成骨细胞的作用机制.方法 体外培养新生大鼠成骨细胞,间歇循环给予0、10-11、10-10、10-9、10-8、10-7 M rhPTH(1-34)干预,(24 h为一循环,前12h给药),共2次,用MTT法检测细胞的增殖;RT-PCR法半定量测定成骨细胞Collagen I、Ostefix mRNA的表达.结果 显示rhPTH(1-34)可明显促进成骨细胞的增殖(P<0.05),促进成骨细胞Collagen I和Ostefix mRNA表达(P<0.05),101-9 M增殖、表达明显,呈剂量依赖关系.结论 rhPTH(1-34)可促进成骨细胞的增殖、分化,可能是通过Collagen I和Ostefix mRNA表达来调节.
关键词： 重组人甲状旁腺激素(1-34) 成骨细胞 I型胶原蛋白 Osterix -
持续高氧对新生大鼠肺组织胶原的动态影响
目的探讨持续高氧对新生大鼠肺组织胶原的影响.方法足月新生大鼠分别持续吸入90%以上的高氧和空气,于3、7、14、21 d,通过染色、化学法和免疫组化,动态比较肺组织中胶原相对含量、羟脯氨酸含量以及I型胶原蛋白的分布和半定量变化.结果(1)7 d时肺间质蓝色胶原所占的面积百分比较对照组增加(P＜0.05),14 d和21 d更为明显(P＜0.01);(2)7 d起高氧组羟脯氨酸含量高于空气组(P＜0.05),在14 d(P＜0.05)和21 d(P＜0.01)持续高于对照组.(3)7 d时高氧组较空气组胶原在肺间质中的表达增加(P＜0.05),14 d(P＜0.05)和21 d(P＜0.01)也明显高于对照组.结论持续吸入高氧可致胶原在新生大鼠肺组织间质中的沉积增加.
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中药川芎对Ⅰ型胶原蛋白含量表达的影响
目的 探究中药川芎对Ⅰ型胶原蛋白含量表达的影响.方法 以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1为实验对象,以浓度1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20μg/ml的川芎提取液及西药干预作为观察组及对照组1组,并以α-MEM培养液干预为对照组2组.比较三组干预后24 h及48 h的Ⅰ型胶原蛋白含量表达情况.结果 干预后24 h及48 h观察组及对照组1组的Ⅰ型胶原蛋白含量表达均高于对照组2组,观察组则高于对照组1组,差异有统计学意义(P<0.05),观察组浓度10μg/ml的Ⅰ型胶原蛋白含量表达均高于其他浓度,差异有统计学意义(P<0.05).结论 中药川芎可有效促进Ⅰ型胶原蛋白含量的表达,以浓度10μg/ml相对更好.
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Gli1基因沉默通过抑制JAK2/STAT3信号通路阻抑TGF-β1诱导胰腺星状细胞纤维化
[目的]研究转录因子胶质瘤相关致癌基因(glioma-associated oncogene 1, Glil)基因沉默对转化生长因子-β1 (transforming growth factor-β1, TGF-β1)诱导LTC-14胰腺星状细胞Janus激酶2/信号转导子和转录激活子3(janus kinase 1 /signal transducer and activator of transcription 3, JAK2/STAT3)表达及胶原-I (collangen- I,COL- I )分泌的影响.[方法]TGF-β1诱导LTC-14细胞,同时转染ShRNA-Glil基因沉默质粒,western blotting检测TGFβ1对Glil、JAK2、STAT3蛋白表达水平的影响;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测沉默Glil对TGF-β1诱导的LTC-14细胞中COL- I分泌水平的影响.[结果]TGF-β1上调LTC-14细胞中Glil、JAK2、STAT3的蛋白表达,促进COL- I分泌;Glil基因沉默后, JAK2、STAT3的蛋白表达降低,COL-I分泌水平下降,同时阻断了TGF-β1对JAK2、STAT3和COL-I的上调作用.[结论]在 LTC-14胰腺星状细胞中,转录因子Glil介导了TGF-β1对JAK2、STAT3蛋白表达及COL-I分泌的上调作用,参与胰腺纤维化的发展.
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神经调节蛋白－1对心肌梗死大鼠缺血心肌 Toll 样受体及 I型胶原蛋白基因表达的影响
目的：探讨神经调节蛋白－1（ NRG－1）对心肌梗死大鼠缺血心肌Toll样受体（ TLR）及I型胶原蛋白（ Col I ）基因表达的影响。方法健康雄性SD大鼠15只随机分为模型组、预处理组、干预组3组，每组5只，通过结扎大鼠冠状动脉前降支建立心肌梗死模型。模型组不用药干预；预处理组采用尾静脉给药的方法给予0．01μg／g重组人神经调节蛋白－1（ rhNRG－1），并在给药后建立心肌梗死模型；干预组先建立心肌梗死模型，30 min后按0．01μg／g经鼠尾静脉注射给药，3组均24 h后处死大鼠取左心室。应用RT－PCR检测梗死区及其周边区TLR mRNA及Col ImR－NA表达。结果模型组、预处理组、干预组TLR mRNA的含量分别为0．52±0．29、0．10±0．04、0．30±0．46；Col I mRNA的含量分别为0．81±0．65、1．60±0．41、2．57±1．13；与模型组相比，预处理组TLR mRNA表达明显减少，差异有统计学意义（ P ＜0．05）；干预组TLR mRNA含量无明显变化，差异无统计学意义（ P ＞0．05）。与模型组相比，干预组Col I mRNA含量增加，差异有统计学意义（ P ＜0．05），预处理组Col I mRNA表达差异无统计学意义（ P ＞0．05）。相关性分析表明，Col I mRNA与TLR mRNA表达无明显相关性（ r ＝－0．171， P ＝0．542）。结论在心肌梗死早期，NRG－1可抑制TLR mRNA的表达，促进Col I的表达，有利于坏死心肌组织的修复。对于TLR的干预，在心肌梗死前给予NRG－1的效果优于心肌梗死后；对于Col I的干预，在心肌梗死后给予NRG－1的效果优于心肌梗死前。
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胰岛素样生长因子-1对MC3T3-E1细胞增殖及I型胶原蛋白合成的影响
目的 观察胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对体外培养的小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞增殖及I型胶原蛋白合成的影响,探讨IGF-1对骨代谢可能的影响机制.方法 不同浓度rhIGF-1刺激体外培养的MC3T3-E1,用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力.结果 一定浓度IGF-1能明显增加成骨细胞数量(P<0.05),在1 ng/mL～100 ng/mL这种作用与IGF-1的浓度呈正相关;经rhIGF-1的刺激,成骨细胞I 型胶原蛋白的表达明显高于对照组(P<0.05);半定量RT-PCR显示在rhIGF-1干预48h后,I型胶原蛋白mRNA表达较对照组明显增加.结论 IGF-1 对MC3T3-E1细胞有明显的促增殖作用,在0.1 ng/mL～100 ng/mL之间呈浓度依赖性,IGF-1 能促进成骨细胞I 型胶原蛋白的合成及其mRNA的表达.
关键词： 胰岛素样生长因子-1 MC3T3-E1成骨细胞 增殖 I型胶原蛋白 -
骨髓间充质干细胞分离培养方法及其对CD8+T淋巴细胞的免疫调控
背景：骨髓间充质干细胞具有免疫调节特性，使其在免疫抑制方面有可预期的应用价值。目的：探讨骨髓间充质干细胞的分离培养方法及其对CD8+T淋巴细胞的免疫调控。方法：采用骨髓直接贴壁法获得原代Wistar大鼠骨髓间充质干细胞，利用差速贴壁结合消化法纯化原代细胞，加入Ⅰ型胶原蛋白作为细胞外基质，扩增骨髓间充质干细胞。取第2代骨髓间充质干细胞，分别将0，1×103，1×104，1×105/wel 的骨髓间充质干细胞与CD8+T淋巴细胞共培养，植物血凝素刺激68 h，荧光CFSE法观察CD8+T淋巴细胞聚集，MTT法检测CD8+T淋巴细胞增殖率。结果与结论：①不同密度骨髓间充质干细胞对T淋巴细胞均有抑制作用，1×103/wel 组抑制能力弱，形成集落现象；1×105/wel 组抑制能力强，细胞未见明显聚集现象；②1×103，1×104，1×105/wel 组CD8+T淋巴细胞增殖率分别为(44.83±4.92)%、(31.94±6.28)%及(15.77±3.98)%，3组间两两比较差异均有显著性意义(P<0.05)；③结果表明，采用全骨髓直接贴壁法能获得原代大鼠骨髓间充质干细胞，采用差速贴壁联合消化控制法能完成细胞纯化，骨髓间充质干细胞浓度依赖性抑制T淋巴细胞增殖。
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舒心稳斑颗粒对兔 AS 斑块稳定性及MMP -9、I 型胶原蛋白表达的影响
目的：观察舒心稳斑颗粒对实验兔AS斑块稳定性及MMP-9、I型胶原蛋白表达的影响。方法：运用高脂高胆固醇饲料喂养12周制备日本大耳白兔动脉粥样硬化模型，用舒心稳斑颗粒灌胃给药治疗4周，采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测血清中I型胶原蛋白的含量；采用免疫组化法分析I型胶原蛋白、MMP-9在主动脉粥样斑块中的表达；同时观察主动脉粥样硬化斑块的病理学改变。结果：与模型组比较，舒心稳斑颗粒能升高血清中Ⅰ型胶原蛋白的含量，差异具有显著统计学意义（ P＜0.01）；同时能降低斑块中MMP-9的表达水平，升高Ⅰ型胶原蛋白在斑块中的表达水平。病理学检查结果显示，采用舒心稳斑颗粒干预后，主动脉粥样硬化斑块的病理学形态、结构均发生改变，斑块结构更加趋于稳定。结论：舒心稳斑颗粒可能通过抑制斑块内炎症反应，调节动脉粥样硬化斑块纤维帽中的胶原纤维降解与合成失衡状态，进而对AS斑块起稳定作用。
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转化生长因子β1对种植体表面成骨细胞I型胶原蛋白基因表达研究
目的：通过观察特定浓度的转化生长因子β1(TGF-β1)，在不同时间刺激体外培养种植体表面成骨细胞中I型胶原蛋白表达情况，探讨TGF-β1对种植体表面成骨细胞增殖分化的影响。方法：体外培养成骨细胞模拟种植体植入后的体内环境接种于钛片表面,将其分为2个浓度刺激组和对照组。刺激组分别加入0.5ng/mL、10ng/mL的TGF-β1刺激细胞增殖和分化，分别收集刺激后第2d、5d、7d培养的细胞。通过RT-PCR检测不同培养时间成骨细胞中的I型胶原蛋白mRNA表达，对照组不加TGF-β1，比较各组间差异程度。结果：浓度为0.5ng/mL的外源性TGF-β1加入到接种于模拟体内种植体的钛片表面的成骨细胞中后，可显著增加成骨细胞中I型胶原蛋白表达(P<0.05)；而浓度为10ng/mL的外源性TGF-β1可降低成骨细胞中I型胶原蛋白的表达(P<0.05)。TGF-β1刺激后的I型胶原蛋白在不同时间培养的成骨细胞中，表达在凝胶成像系统光密度分析后可见与对照组中表达量相比，低浓度刺激组表达量略有升高，高浓度刺激组表达量略有降低。结论：浓度为0.5ng/mL的TGF-β1对I型胶原蛋白的表达有促进作用；浓度为10ng/mL外源性TGF-β1对I型胶原蛋白表达有抑制作用。
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丹参酮ⅡA对肾性高血压大鼠心肌胶原代谢影响的机制研究
目的 研究丹参酮Ⅱ A(Tanshinone Ⅱ A,Tsn)对两肾两夹(two-kidney two-clip,2K2C)肾性高血压大鼠心肌I型胶原基因表达、蛋白含量的影响.方法 制作两肾两夹肾性高血压大鼠模型,Tsn 70 mg·kg-1·d-1(高剂量)和35 mg·kg-1·d-1(低剂量)、缬沙坦(Valsartan)26.7 mg·kg-1·d-1连续灌胃给药6周,Western Blot检测心肌组织I型胶原(collagen type I,Collagen I)蛋白表达;RT-PCR检测心肌组织Collagen I水平.结果 Tsn高剂量组、低剂量组和缬沙坦组Collagen I蛋白含量明显低于两肾两夹模型组,分别下降了59.3%、24.6%和63.2%,Tsn高剂量组、低剂量组、缬沙坦组和两肾两夹模型组之间的Collagen I mRNA水平无明显差别,这提示Tsn和缬沙坦对Collagen I mRNA水平无下调作用,二者并不是通过Collagen I基因转录调控以改变胶原含量,而是与转录后和/或翻译后调控有关.结论 Tsn对两肾两夹高血压大鼠左室心肌Collagen I mRNA水平无下调作用,但抑制心肌Collagen I蛋白表达,提示Tsn并不是通过Collagen I基因转录调控以改变胶原含量,而是与转录后和/或翻译后调控有关.
关键词： 丹参酮ⅡA 两肾两夹肾性高血压大鼠 I型胶原蛋白 -
美洲大蠊提取液对慢性难愈合创面I/Ⅲ型胶原蛋白调控研究
目的 观察美洲大蠊提取液对大鼠慢性难愈合创面组织中I/Ⅲ型胶原蛋白的表达,探讨其促愈机制.方法 将48只SPF大鼠随机分为急性创面对照组,慢性创面模型组、贝复济阳性组及美洲大蠊实验组,药物干预5、7、11 d后分批留取创面组织并处死,运用PCR方法测定创面组织中I/Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达.结果 I、Ⅲ型胶原在各组中的表达趋势曲线一致,第5天,对照组表达高,模型组低,从第5天开始,美洲大蠊实验组中I、Ⅲ型胶原中表达呈上升趋势并高于阳性组,第7天达到高峰后逐渐稳定下降,第11天略低于阳性组(P<0.01).结论 美洲大蠊提取液能有效提高大鼠难愈合创面前中期I/Ⅲ型胶原蛋白的表达从而促进创面愈合,并在后期能有效降低胶原蛋白的过度表达而减少瘢痕形成.
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越橘花青素对人胚胎巩膜成纤维细胞M M P2和collagen I表达的影响
目的:探讨越橘花青素对人胚胎巩膜成纤维细胞(HFSF)基质金属蛋白酶2(MMP2)和I型胶原蛋白(collagen I)表达的影响,为越橘花青素防治近视提供实验依据.方法:取不同浓度(0、10-6、10-5、10-4、10-3、10-2、10-1和1 g/L)越橘花青素作用于HFSF,应用MTT法检测越橘花青素作用不同时间(6 h、8 h、12 h、24 h和48 h)对HFSF活力的影响;流式细胞术检测HFSF活力高时(10-1 g/L越橘花青素作用12 h)的细胞周期和凋亡情况;RT-qPCR检测HFSF中MMP2、COL1A1和COL1A2的mRNA表达;Western blot检测其MMP2和collagen I的蛋白表达.结果:MTT法结果显示HFSF在10-1 g/L的越橘花青素作用12 h时活力高;与空白对照组比较,流式细胞术显示10-1 g/L越橘花青素组S和G2期的细胞比例增加(P<0.05),凋亡率差异无统计学意义;RT-qPCR显示MMP2的mRNA表达量下降(P<0.05),COL1A1的mRNA表达量增加(P<0.05),COL1A2的mRNA表达量差异无统计学意义;Western blot显示MMP2蛋白表达下降(P<0.05),collagen I蛋白表达增加(P<0.05).结论:越橘花青素对HFSF和具有抑制MMP2和增加collagen I表达的作用.
关键词： 越橘花青素 人胚胎巩膜成纤维细胞 基质金属蛋白酶2 I型胶原蛋白 -
Decorin对僵直膝关节滑膜B型细胞增殖及I型胶原蛋白表达的影响
目的：探讨重组核心蛋白聚糖（ decorin）对人僵直膝关节滑膜B型细胞的增殖和Ⅰ型前胶原蛋白（ PcⅠ） mRNA表达及Ⅰ型胶原蛋白（ ColⅠ）合成的影响，为decorin 治疗人膝关节僵直提供理论依据。方法：分离培养人僵直膝关节滑膜B型细胞，分别加入不同浓度（0．1、5和10 mg／L）的decorin；培养24 h、48 h和72 h后用MTT法测定关节滑膜B型细胞的活力；用流式细胞术检测滑膜B型细胞的周期和凋亡；RT-PCR法检测滑膜B型细胞的PcⅠmRNA表达；Western blot检测Col Ⅰ的合成。结果：5和10 mg／L的decorin可有效降低滑膜B型细胞的活力（P＜0．05），明显增加处于G0／G1期细胞的百分比（P＜0．05），并下调PcⅠmRNA的表达，抑制ColⅠ的合成；同时实验组和对照组均未检测到终末期凋亡细胞。结论： Decorin可抑制人僵直膝关节滑膜B型细胞的增殖、PcⅠmRNA的表达和ColⅠ的合成，在防治膝关节僵直中可能起一定的作用。
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遗传因素在颅内动脉瘤发病机制中的研究进展
颅内动脉瘤是严重威胁人类生命健康的一种.是造成自发性蛛网膜下腔出血的首位原因.该病大的特点是较高的残死率,即使在现代的医疗条件下颅内动脉瘤破裂出血的死亡率仍高达40%[1].
