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中药维肝力栓治疗e-抗体阳性慢性乙型病毒性肝炎观察
目的:观察益气补阳的中药维肝力(HY99)栓对e抗体阳性慢性乙型肝炎(CCHB)的治疗效果.方法:所有病例HBVDNA均为阳性(采用PCR-ELISA检测方法),采用病例自身前后对照及停药后追踪4～6月的方法;先后两批共25例(取8例做HBV基因测序,结果均证实为前C区变异).每日早晚用HY99栓1粒塞肛,疗程6个月.结果:25例中,疗程结束时21例HBVDNA阴转,随访结束时为23例.12例ALT升高者,随访时有8例下降,其中6例降至正常.结论:该药对前C区变异CHB有显著疗效,表现在对病毒复制有明显抑制作用,同时能改善肝功能.
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应用PCR产物直接测序技术测定乙型肝炎病毒前C区基因序列
目的: 测定乙型重型肝炎和慢性乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒前C区基因序列,探讨乙型肝炎病毒前C区基因变异的意义.方法: 采用PCR产物直接测序技术,测定13例乙型重型肝炎和10例慢性乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒前C区基因序列,并与基因库中来自世界各地的不同基因型的毒株进行比较.结果: 患者血清中乙型肝炎病毒前C区基因序列,除发现乙型肝炎病毒前C区基因1896位存在点变异外,还可见1846位点变异,且乙型重型肝炎患者发生病毒变异的频率明显高于慢性乙型肝炎(P<0.05),而1862位未检出变异.1838位核苷酸全部为腺嘌呤核苷酸(A),1846位核苷酸大多为胸腺嘧啶核苷酸(T),仅4例发生了G→A点突变.经与不同基因型的毒株进行比较,提示沈阳地区流行的乙型肝炎病毒毒株接近美国株. 结论:乙型重型肝炎患者发生病毒变异的频率明显高于慢性乙型肝炎;沈阳地区流行的乙型肝炎病毒毒株接近美国株.
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慢性乙型肝炎T细胞功能与HBV前C区变异的研究
通过研究慢性HBV感染者前C区变异及T细胞免疫功能与疾病的相关性,评估前C(pre C)区变异及T细胞免疫功能对于慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)预后的影响.分别采用实时荧光法、突变特异PCRmsPCR法及微粒酶免疫分析法对150例HBV-DNA阳性的CHB及50例健康体检者进行血清HBV-DNA,HBV-DNA pre C区变异及HBV血清免疫标志物检测,同时采用APAAP法对所有研究对象进行相关细胞免疫功能检测.在150例CHB中,HBVpre C1896变异检出率达26.6%(40/150),主要发生于慢性重度患者及杭HBe(+)患者.T细胞功能:CHB与正常对照组比较,外周血CD4明显下降,而CD8明显增高;在CHB组中,变异株组较野生株组CD4下降、CD8升高更明显.在CHB中存在细胞免疫功能紊乱,而HBV DNA pre C变异株组较野生株组更为严重,这些细胞免疫功能紊乱,与CHB的严重程度及其临床预后密切相关.
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基于单标记探针实时荧光定量PCR和熔解曲线分析方法定量检测HBeAg阳性患者前C区变异株
目的 建立一种HBV复杂前C区变异株精确定量的检测系统.方法 分两步实时PCR完成检测.首先应用野生株阻断探针(WT-blocker probe)进行选择性抑制野生株病毒的扩增,而含量偏低的变异株病毒得以扩增约10 000倍,使其在后续反应中易于检出;第二步应用单标记探针(SimpleProbe)结合熔解曲线分析系统精确定量检测前C区G1896A、G1899A、G1896A/G1899A变异株.通过PBPPO(primer-blocker-probe partial-overlap)设计减少基因多态性对检测的影响,来提高检测精确度.检验结果经直接测序及聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法予以证实.结果 4种标准质粒(G1896/G1899、G1896A、G1899A、G1896A/G1899A)能够很好地被检出并予以区分,突变检测灵敏度达到0.01%;10例HBeAg阳性(直接测序法鉴定前C区变异阴性)患者血清标本中,每例至少1种前C区变异株被检出.结论 单标记探针实时荧光定量PCR和熔解曲线分析能够早期灵敏检测前C区变异株,前C区变异株进化过程及机制还需进一步大样本、纵向队列研究予以阐明.
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产前阻断对乙型肝炎病毒前C区和C启动子区的影响
目的 探讨产前阻断,即产前注射乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)对HBV前C区和基本C启动子(BCP)区核苷酸序列的影响.方法 无症状慢性HBV携带孕妇120例,产前阻断HBIG组67例,不产前阻断非HBIG组53例,荧光定量PCR法检测血清HBV DNA载量,ELISA检测血清HBsAg、HBeAg,套式PCR扩增HBV DNA前C区和BCP区核苷酸片段,DNA自动荧光测序仪对PCR产物直接测序.组间均数比较采用t检验,组间率比较采用卡方检验.结果 HBIG组33例孕妇收集到阻断前、后双份血清,其中23例阻断前、后HBV DNA前c区、BCP区均扩增测序成功.阻断前、后HBV前C区+BCP区、前C区、BCP区核苷酸的替代变异率分别为1.5%和1.4%、0.7%和0.6%、1.7%和1.7%(Fisher's精确检验,x2值分别为0.627、0.689、1.000,P＞0.05).阻断前、后1896G→A、1899G→A、1762A→T、1764G→A热点总变异发生率分别为27.2%和13.0%(x2=5.717,P=0.017),但各热点变异的发生率阻断前、后分别为30.4%和17.4%、17.4%和4.3%、26.1%和13.0%、34.8%和17.4%,差异无统计学意义(P＞0.05).扩增成功的53例HBIG组和47例非HBIG组孕妇临产时HBV DNA前C区+BCP区、前C区、BCP区核苷酸的替代变异率分别为0.9%和0.8%、0.3%和0.3%、1.1%和0.9%(Fisher's精确检验,x2值分别为0.434、0.839、0.340,P＞0.05);HBIG组和非HBIG组孕妇1896G→A、1899G→A、1762A→T、1764G→A热点总变异发生率及各热点变异发生率分别为5.7%和10.1%、9.4%和14.9%、0和2.1%、7.5%和10.6%、5.7%和12.8%,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 产前阻断可能不增加孕妇HBV DNA前C区、BCP区核苷酸变异;产前阻断可能减少孕妇体内HBV前C区、BCP区热点变异的发生.
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拉米夫定治疗中HBeAg阳性慢性乙型肝炎病人发生前C区变异
目的:分析在服用拉米夫定过程中,HBeAg阳性的慢性乙型肝炎病人出现前C区变异的临床特点.方法:回顾性分析在服用拉米夫定过程中发生前C区变异的13例慢性乙型肝炎病人,口服拉米夫定100 mg·d-1,44～160 wk先后出现ALT复常后反跳,HBV DNA再次升高.结果:前C区变异可导致病人肝功能明显损害,ALT平均(544±s 324)U·L-1,180～1 249 U·L-1.HBV DNA随即复升(108～1010)拷贝·L-1,其中9例为109拷贝·L-1,2例为1010拷贝·L-1.结论:在拉米夫定治疗中,HBV DNA正常后再次上升,肝功能复常后又明显异常且HBeAg阴性者,首先要考虑前C区变异的可能,应引起高度重视.
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慢性乙型重型肝炎患者前C区变异株检测及对预后的影响
目的 探讨慢性乙型重型肝炎患者HBV前C区变异与机体CD4/CD8比值及预后的影响.方法 采用msPCR法检测53例HBV DNA阳性的慢性重型肝炎患者血清HBV前C1896变异,流式细胞仪检测T细胞亚群改变.结果 53例重型肝炎患者HBV前C区变异的检出率为71.7%,以HBeAg(-)/HBeAb(+)组为高,与其他两组之间差异有显著性(P＜0.01).变异株组CD4水平高于野生株组及正常对照组(P＜0.01),而CD8低于野生株组及正常对照组(P＜0.01),患者病死率高.结论 变异株的检出主要集中在HBeAg(-)/HBeAb(+)患者中,随病情加重检出率也增高.HBV变异株组比野生株组有更高的病死率.
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探讨前C区A1896变异与乙型肝炎病毒相关的进展性肝病的关系
目的 探讨前C区A1896变异与乙型肝炎病毒(HBV)相关的进展性肝病的关系.方法 选择172例HBV感染者,采用PCR-RFLP进行A1896变异的检测,并对其临床意义进行分析.结果 172例患者A1896变异的总体检出率为45.9%.在A1896变异株和野生株中,慢性无症状携带者(ASC)、慢性乙型肝炎(CHB)、肝硬化(LC)、慢性重型肝炎(CSH)、肝细胞癌(HCC)的构成比差异有统计学意义(P＜0.05).CHB、LC、CSH、HCC的A1896变异率分别为39.7%、52.0%、50.0%、74.1%,显著高于ASC的12.5%(P＜0.05).进展性肝病(包括CSH、LC、HCC)的A1896变异率为59.0%,显著高于CHB的39.7%(P＜0.05).慢性乙型肝病不同临床类型的A1896的野生株、变异株构成比差异无统计学意义(P＞0.05).HBeAb阳性组的A1896变异率为73.2%,显著高于HBeAg阳性组的28.1%(P＜0.05).A1896野生株HBeAg阳性率显著高于变异株(45.2% vs 19.0%,P＜0.05).变异株HBV-DNA复制的均数水平显著高于野生株[(9.55±4.65)lg copies·L-1 vs (10.35±4.49)lg copies·L-1,P＜0.01].结论 A1896变异与HBV相关的进展性肝病有关,但与CHB的炎症活动程度无关.A1896变异株的HBeAg阴性率和HBV-DNA病毒载量较野生株高,前者使HBV易逃避免疫清除,后者引起疾病逐步进展.
关键词： 乙型肝炎病毒 前C区变异 聚合酶链反应 限制性片段长度多态性分析 -
拉米夫定对前C区变异乙肝的治疗与乙肝病毒基因分型的研究
目的:探讨前C区变异的乙型肝炎患者基因型与拉米夫定疗效的关系.方法:随机选择80例HbeAg阴性、血清丙氨酸氨基转氨酶异常的慢性乙型病毒性肝炎患者,检测其HBV基因分型,并给予拉米夫定治疗.于治疗后第1,3,6,9,12个月分别检测患者肝功能及乙肝病毒定量变化,治疗9个月后再次检测乙肝病毒基因分型.结果:前C区变异乙型肝炎患者HBV基因分型:B型6.25%,C型26.25%,D型52.5%,E型8.75%,CD混合型5%,F型1.25%.HbeAg阴性乙型肝炎患者口服拉米夫定HBVYMDD突变株(YIDD/YVDD)多发生于HBV基因型D型、C型.前C区变异多发生于HBV基因型D型.结论:前C区变异多发生于HBV基因型D型,C型、D型对拉米夫定疗效依次降低.
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外周血T细胞亚群及sIL-2R水平与HBV前C区变异相关性研究
目的:探讨慢性乙型肝炎患者HBV前C区变异与宿主免疫之间的关系.方法:采用msPCR法检测102例慢性乙型肝炎患者血清HBV Pre-C变异,并用APAAP法检测T细胞亚群改变,用双抗体夹心ELISA法检测血清sIL-2R水平.结果:在102例HBV DNA阳性CHB患者中HBV Pre-C1 896变异检出率达64%(65/102).变异株组及野生株组外周血CD4、CD4/CD8比值明显下降;CD8明显增高,与正常对照组比较差异均具显著性意义(P＜0.01).变异株组CD4、CD4/CD8比值显著低于野生株组(P＜0.05);而CD8显著高于野生株组(P＜0.01).变异株组sIL-2R水平均显著高于野生株组(P＜0.01),两组水平均显著高于正常对照组(P＜0.01).结论:变异株组较野生株组存在更为严重的免疫紊乱,并通过多种途径激活宿主免疫,导致肝损伤.
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氧化苦参碱治疗前C区变异的慢性乙型肝炎40例
目的观察和评价氧化苦参碱对前C区变异的慢性乙型肝炎的抗病毒疗效.方法选择慢性乙型肝炎80例,治疗组40例为前C区变异患者,对照组40例为野生株患者,两组分别给予氧化苦参碱150 mg,静脉滴注1个月后改为400 mg,肌内注射2个月,观察HBV DNA、HBeAg的阴转情况.结果治疗结束后,治疗组HBV DNA有效率,阴转率分别为87.5%,42.5%,HBeAg阴转率为44.4%,对照组HBV DNA有效率,阴转率分别为85.0%,47.5%,HBeAg阴转率为40.0%.两组比较差异无显著性(P＞0.05).结论氧化苦参碱对前C区变异的慢性乙型肝炎抗病毒疗效与野生株比较无耐药性.
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1829例HReAg阳性慢性乙型肝炎的临床特点分析
目的 通过大样本回顾性调查.比较HBeAg阴性与HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者临床特点的异同.方法 对1829例慢性乙型肝炎患者的住院病历进行回顾性调查,分析HBeAg阴性与HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者年龄、肝功能、HBV DNA定量、HBV-DNA前C区变异、肝组织病理炎症及纤维化分级、临床诊断及预后等指标的差异.结果 HBeAg阴性组的平均年龄较大;HBeAg阳性组和HBeAg阴性组入院时肝功能各项指标均有差异,HBeAg阴性组的TB升高和ALB降低更明显一些.HBeAg阳性HBV DNA阳性率高于HBeAg阴性组.HBeAg阴性组HBV-DNA前C区变异阳性率明显高于HBeAg阳性组.HBeAg阴性组的肝硬化、肝衰竭和肝癌的构成比明显均高于HBeAg阳性组;HBeAg阴性组的病死率也高于HBeAg阳性组.结论 HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者年龄较大、病程较长,HBV-DNA前C区变异发生率高,HBV DNA复制水平低,易发展为肝硬化、肝衰竭和肝癌.
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重型肝炎分离病毒株前C区变异者的细胞免疫改变
目的 探讨慢性重型肝炎病人乙型肝炎病毒(HBV)前C区变异与机体细胞免疫水平的关系.方法 采用msPCR法检测53例HBV DNA阳性慢性重型肝炎病人血清HBV preC1896变异,流式细胞仪方法检测T细胞亚群改变.结果 53例重型肝炎HBV preC变异的检出率为71.7%.各HBe系统均可检出,HBeAg(-)/HBeAb(+)组为高,与其它组之间差异有显著性(P＜0.01).变异株组CD4+,CD4+/CD8+比值高于野生株组及正常对照组(P＜0.01),而CD8+低于野生株组及正常对照组(P＜0.01).结论 变异株的检出主要集中在HBeAg(-)/HBeAb(+)病人中,随病情加重检出率也增高.HBV变异株比野生株组有更加严重的免疫紊乱.
