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三氧化二砷逆转低浓度索拉非尼对人肝癌细胞促迁移作用及其机制
目的：探讨三氧化二砷逆转低浓度索拉非尼对人肝癌细胞促进迁移作用及其机制。方法取对数生长期的人肝癌细胞MHCC97H，分别以三氧化二砷2μmol/L（三氧化二砷组）、索拉非尼3μmol/L（索拉非尼组）、两者联合（联合组）、LY29400250μmol/L（LY组）及索拉非尼3μmol/L+LY29400250μmol/L（LY+索拉非尼组）作用于细胞，并以仅含二甲基亚砜（DMSO）作为对照组。细胞划痕实验和Transwell迁移实验分别检测细胞横向和纵向迁移能力。Western blot实验检测p-Akt、E-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达。实验数据比较采用单因素方差分析和Bonferroni法。结果细胞划痕实验检测索拉非尼、三氧化二砷、联合组细胞横向迁移速率分别为对照组的（1.59±0.14）、（0.39±0.08）、（0.58±0.12）倍（t=7.20，-12.58，-6.62；P<0.05）。Transwell迁移实验检测索拉非尼、三氧化二砷、联合组及对照组细胞数分别为（285±26）（、169±18）（、194±19）（、228±9）个。与对照组相比，索拉非尼组细胞数明显增多（t=3.48，P<0.05），三氧化二砷组明显减少（t=-3.80， P<0.05），且联合组较索拉非尼组明显减少（t=-5.67，P<0.05）。Western blot检测显示，与对照组比，索拉非尼组p-Akt、Snail、Vimentin的表达增强，E-cadherin的表达减弱。三氧化二砷、联合组、LY组及LY+索拉非尼组p-Akt、Snail、Vimentin的表达减弱，E-cadherin的表达增强。结论三氧化二砷可通过抑制PI3K/Akt/Snail通路的激活，阻止人肝癌细胞上皮间质化，逆转低浓度索拉非尼对人肝癌细胞促迁移作用。
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Caveolin-1与胰腺癌上皮间质转化及转移关系的研究
目的 研究细胞窖蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)在胰腺癌上皮间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)和转移中的作用及其相关机制.方法 免疫荧光技术、Western blot检测Cav-1及EMT分子标志物E-cadherin,β-catenin,vimentin,N-cadherin在高转移胰腺癌细胞系(L3.7,Panc02-H7)及低转移胰腺癌细胞系(COLO357,Panc02)中的表达,倒置相差显微镜观察上述胰腺癌细胞形态.Cav-1及相应的空载体质粒转染COLO357细胞,检测Cav-1及EMT分子标志物的表达,并观察细胞形态变化.结果 高转移胰腺癌细胞(L3.7,Panc02-H7)Cav-1及间质细胞标志物高表达,上皮细胞标志物低表达,而低转移胰腺癌细胞(COLO357,Panc02)Cav-1及上皮细胞标志物高表达,间质细胞标志物低表达.Cav-1质粒转染COLO357细胞后,Cav-1表达上调,E-cadherin表达降低而vimentin表达升高,且COLO357细胞由上皮细胞形态向间质细胞形态转变.结论 胰腺癌细胞中Cav-1表达升高与胰腺癌EMT及转移密切相关.
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糖原合成激酶-3β调控胰腺癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的实验研究
目的 在体外水平探讨糖原合成激酶-3β(glycogen synthase kinase 33,GSK-3β)在调控胰腺癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化中发挥的作用.方法 使用慢病毒干扰技术抑制胰腺癌细胞系中GSK-3β的表达,通过Western blot检测其对于GSK-3β磷酸化分子及上皮间质转化及侵袭转移能力相关分子表达的影响.通过划痕实验和Transwell实验检测抑制GSK-3β对胰腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响.使用荧光素酶报告基因技术检测抑制GSK-3β对于核因子κB活性的影响. 结果 抑制胰腺癌细胞中GSK-3β的表达可以抑制胰腺癌细胞的迁移、侵袭能力以及上皮间质转化.抑制GSK-3β后ASPC-1和PANC-1组迁移抑制率分别为59.1％±6.4％和55.9％±7.3％,NF-κB的结合活性分别降至24.8％±3.1％和31.5％±5.4％,与对照组相比差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 GSK-3β参与胰腺癌迁移、侵袭以及上皮间质转化的调控.抑制GSK-3β可以有效抑制胰腺癌迁移、侵袭以及上皮间质转化的发生,NF-κB是GSK-3β调控胰腺癌恶性生物学行为的关键分子.
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CCR7在结节性甲状腺肿与甲状腺癌中的表达及其与EMT关系的研究
目的 研究并探讨趋化因子受体-7(chemokine receptor 7,CCR7)在结节性甲状腺肿与甲状腺乳头状癌中与上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的关系.方法 采用免疫组化检测CCR7、N-cadherin与基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)在50例结节性甲状腺肿与50例甲状腺乳头状癌中的表达,分析其与患者病理资料的关系.结果 CCR7、N-cadherin在结节性甲状腺肿的结节期滤泡上皮均呈高表达(分别为83.7％、90.7％),且为正相关(P＜0.01),而在胶质贮存期滤泡上皮(分别为2.0％,8.2％)与结节期纤维组织(分别为6.7％,31.1％)低表达.CCR7、N-cadherin与MMP9在甲状腺乳头状癌的淋巴结转移组的阳性表达率为87.1％,90.3％,96.8％,而无淋巴结转移组的阳性表达率为42.1％,57.9％,63.2％,差异有统计学意义(P ＜0.01)；CCR7与N-cadherin、MMP9在甲状腺乳头状癌的表达呈正相关(P＜0.01).结论 CCR7在结节性甲状腺肿与甲状腺乳头状癌中均与EMT的指标具有相关性,CCR7可能参与调节滤泡上皮EMT发生.
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丙型肝炎病毒核心蛋白通过活化stat3通路促进肝癌细胞上皮间质转化的研究
目的 探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCVc)对肝癌细胞信号转导子和转录激活子3(stat3)通路及上皮间质转化(EMT)的影响.方法 将含HCVc基因序列的重组质粒pEGFP-N3-HCVc转染人肝癌细胞HepG2,Real-Time PCR和Western blotting检测HCVc、总stat3、磷酸化stat3(p-stat3)及EMT指标蛋白E-cadherin、Vimentin、Snail的表达,划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况.结果 划痕实验及Transwell实验结果显示,过表达HCVc可增强HepG2细胞的迁移和侵袭能力;stat3通路抑制剂AG490处理可抑制HepG2细胞的侵袭能力.RT-PCR和Western blotting结果显示,过表达HCVc后,HepG2细胞中p-stat3、Vimentin及Snail在表达升高, E-cadherin表达下降;AG490处理可下调p-stat3、Vimentin及Snail表达,增强E-cadherin表达.结论 HCVc可活化stat3通路促进肝癌细胞上皮间质转化,增强肝癌细胞的迁移和侵袭能力.
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上皮间质转化与肝细胞癌肺转移的相关性研究
目的 研究上皮间质转化和肝细胞癌肺转移的关系.方法 2000年1月至2004年3月于中山医院肝外科手术病理诊断为肝细胞癌的患者中,根据术后随访期内有无肺转移分为有肺转移组和无远处转移组,每组随机选择50例患者的原位肝癌组织制成组织芯片.用免疫组织化学染色(二步法)方法检测组织芯片上肺转移组和无远处转移组患者的肝痛组织的上皮间质转化的标志(E-cadherin、Vimentin、Fibronectin),单因素和多因素分析这些标志和肝细胞癌肺转移的关系.结果 单因素分析了性别、年龄、HbsAg、甲胎蛋白(AFP)、肿瘤大小、数目、癌栓、包膜、肝门淋巴结、肿瘤分化程度、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤维连接蛋白(Fibroneetin)的表达与肺转移的相关性,结果显示:患者AFP水平>400 ng/ml、肿瘤直径>10 cm、门静脉癌栓、分化程度低、E-cadherin的低表达、Fibronectin的高表达、Vimentin的高表达与肝细胞癌肺转移相关;多因素分析显示肿瘤直径>10 cm、门静脉癌栓、分化程度低、Fibronectin高表达是肝细胞癌肺转移的危险因素.结论 肝细胞癌患者肝癌组织的上皮间质转化与其发生肺转移有密切关系.
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大鼠上皮－间质转化和肺移植后闭塞性细支气管炎的相关性
目的：模拟肺移植后闭塞性细支气管炎（ BO）病理过程，研究小气道上皮细胞上皮间质转化（ EMT）和BO之间的相关性。方法采用三袖套吻合法将F344大鼠的左肺移植至Lewis大鼠，建立同种异基因大鼠左肺原位移植模型。术后腹腔注射环孢菌素（5 mg· kg-1· d-1）10天，术后第28天气管内给予脂多糖（0.5 mg／kg），于术后90天处死。 HE染色和Masson染色观察移植肺的组织结构，免疫组化检测EMT标记物E-cadherin和Vimentin在移植肺和健康F344大鼠肺组织中的表达，分析E-cadherin及Vimentin表达的变化与小气道重塑的相关性。计数资料采用Fisher确切概率法，相关性分析采用Spearman秩分析。结果病理观察发现，移植肺间质有炎症细胞浸润、细支气管壁纤维增生、管腔明显狭窄。移植肺E-cadherin阳性表达5只（共13只），显著低于其在正常肺组织中表达（7／8，P＜0.05）；Vimentin阳性表达10只（共13只），显著高于其在正常肺组织中表达（2／8，P＜0.05）。 Spearman相关性分析发现，E-cadherin的表达与Vimentin呈负相关（ r＝－0.750，P＜0.01）。结论本研究建立的疾病模型能够模拟BO的病理过程。 BO表现的移植肺组织小气道上皮细胞发生EMT，提示EMT参与BO的气道重塑过程。深入研究小气道上皮细胞EMT发生的机制和病理意义将为肺移植后BO的防治提供了新的治疗靶点。
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胎盘Snail表达与前置胎盘和胎盘植入发病关系的研究
目的 研究胎盘Snail的表达与胎盘滋养细胞侵袭性及前置胎盘和胎盘植入发病的关系.方法 选取60例孕产妇,分为胎盘植入组10例、前置胎盘组20例及对照组30例.采用免疫组织化学、Western Blot和RT-PCR检测各组胎盘母体面Snail的表达情况.结果 胎盘植入组和前置胎盘组Snail蛋白的表达水平高于对照组,胎盘植入组Snail mRNA相对水平高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 胎盘植入和前置胎盘患者胎盘母体面Snail表达升高可能与胎盘滋养细胞侵袭性增强及胎盘植入发病相关.
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上皮间质转化的分子机制及在妇科肿瘤转移中的研究进展
恶性肿瘤的浸润及远处转移是导致患者死亡的重要原因,上皮间质转化(EMT)在肿瘤转移及侵袭中发挥了重要的作用.EMT的发生与多种分子机制相关,包括转录调节因子、生长因子、微环境、微小RNA(miRNA)及DNA甲基化等均参与EMT的调控.研究发现EMT也参与了各种妇科肿瘤的病理过程,对EMT机制的深入研究可以为探索新的肿瘤治疗模式提供理论依据.
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上皮间质转化与转录因子Twist及Snail在宫颈鳞状上皮病变中的研究
目的 探讨上皮间质转化(EMT)与转录因子Twist及Snail在宫颈鳞状上皮病变发生发展过程中的作用及意义.方法 选择荆州市妇幼保健院2005年1月至2009年12月宫颈组织活检及手术切除中,确诊为宫颈鳞状上皮病变的170例存档石蜡块标本为研究对象.其中,慢性宫颈炎标本为20例,纳入慢性宫颈炎标本组;CINⅠ,CINⅡ,CINⅢ及宫颈鳞癌标本各为32例,27例,35例及56例,分别纳入CINⅠ组,CINⅡ组,CINⅢ组及宫颈鳞癌组.采用原位杂交(ISH) 技术及免疫组化SABC法检测170例宫颈鳞状上皮病变标本中Twist,Snail,E-cadherin及Vimentin的表达,并进行相关性分析(本研究遵循的程序符合荆州市妇幼保健院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,并与患者签署临床研究知情同意书).结果 慢性宫颈炎→CIN→宫颈鳞癌的发生发展中,E-cadherin的表达逐渐减弱,而Vimentin,Twist 及Snail的表达逐渐增强,其中E-cadherin,Vimentin在宫颈鳞癌组及CINⅢ组中的表达与慢性宫颈炎组比较,差异有统计学意义(P<0.05);宫颈鳞癌组中,Twist 及Snail的阳性率明显高于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05),并且Twist及Snail的表达分别与E-cadherin呈负相关关系(P<0.05),而Twist与Vimentin则呈正相关关系(P<0.05).结论 宫颈组织中,E-cadherin表达下调,而Twist,Snail及Vimentin表达上调,这可能是宫颈鳞癌发生的重要分子生物学标志.Twist 及Snail可能通过协同介导EMT的发生,促进宫颈鳞状上皮病变的发生发展,终导致宫颈鳞癌发生.
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脂肪间充质干细胞分泌的Exosome促进结肠癌细胞系上皮间质转化
目的：研究间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）来源的Exosome对结肠癌细胞系HCT8上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）的影响。方法从人脂肪组织中分离出MSC后，对MSC进行培养并传代，并对MSC的分化能力进行鉴定。在人脂肪来源的MSC中提取Exosome后，用透射电子显微镜观察并拍照，并用蛋白质印迹法检测其抗原表达情况。在HCT8培养体系中加入人脂肪来源的MSC分泌的Exosome ，定量PCR和蛋白质印迹法检测上皮和间质转化相关标志物的表达，细胞侵袭和迁移实验检测人脂肪来源的MSC分泌的Exosome对HCT8迁移和侵袭的影响。结果人脂肪来源的MSC具有多系分化能力，人脂肪来源的Exosome直径为40～100 nm ，表达CD63、HSP70和HSP90，下调HCT8上皮相关标志E-cadherin和ZO-1的表达，上调间质相关标志Fibronectin的表达，促进HCT8的迁移和侵袭。结论人脂肪来源的MSC分泌的Exosome可促进结肠癌细胞系HCT8的EMT。
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晚期肺腺癌EMT和EGFR突变状态的关系及其对吉非替尼治疗疗效的影响
目的：探讨晚期肺腺癌上皮间质转化（EMT）与表皮生长因子（EGFR）突变的关系及其对吉非替尼治疗敏感性的关系。方法通过检测78例晚期肺腺癌EGFR突变情况和E-cadherin/β-catenin表达情况，对EGFR突变的晚期肺腺癌患者一线使用吉非替尼，EGFR未突变的晚期肺腺癌一线化疗失败后二线使用吉非替尼治疗，观察吉非替尼治疗的疗效和无进展生存时间（PFS）。结果晚期肺腺癌EGFR突变患者E-cadherin表达高于EGFR未突变患者。EGFR突变且E-cadherin/β-catenin阳性表达者疾病控制率（DCR）略高于异常表达者，虽差异无统计学意义，但EGFR突变同时E-cadherin/β-catenin阳性表达者显示了更长的PFS。EGFR未突变的晚期肺腺癌二线吉非替尼治疗患者临床获益率低。结论晚期肺腺癌患者EGFR突变者常伴随E-cadherin高表达，同时存在EG-FR突变和E-cadherin/β-catenin高表达者显示更长的PFS；不建议EGFR未突变的晚期肺腺癌病例二线使用吉非替尼。
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SCIN在恶性肿瘤中的研究进展
SCIN被认为是一种多功能分子,可以调节其他细胞的功能,如成骨细胞的形成、巨核细胞的分化,以及牙髓干细胞的增殖、迁移和分化.近有研究证明,SCIN参与了人类癌症的发生和发展.SCIN通过调节肌动蛋白细胞骨架、上皮间质转化过程以及促进丝状伪足的形成,促进肿瘤细胞的增殖、浸润和转移.
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Numb与上皮间质转化关系的研究进展
目的:总结Numb与上皮间质转化(epithelial mesenchymal transitions,EMT)的研究进展,并讨论Numb在EMT中的可能作用机制.方法:应用PubMed及CNKI期刊全文数据库检索系统以“Numb、肿瘤和EMT”等为关键词,检索1990-01-2012-10的相关文献.共检索到英文文献815篇,中文文献285篇.纳入标准:1)以肿瘤中的Numb与EMT的关系；2)Numb在上皮间质转化中的作用机制研究.根据纳入标准分析文献38篇.结果:Numb是参与肿瘤信号转导途径的重要成分,新的研究表明,Numb表达下调或缺失,EMT的发生加剧.作用机制可能是其通过影响肿瘤细胞E-钙黏蛋白的定位、调控Notch等信号通路在肿瘤EMT过程中起关键作用,研究发现,10％的癌组织中伴有Notch1基因变异.通过参与EMT而诱导肿瘤形成和发展可能为Numb影响肿瘤发生、发展的又一重要机制.结论:肿瘤中Numb的表达水平及其相关信号通路在EMT中可能起重要作用,但具体作用方式和机制仍未阐明.
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胃癌干细胞与上皮间质转化研究进展
目的 总结国内外关于胃癌干细胞(gastric cancerstem cells,GCSCs)和肿瘤细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal-transition,EMT)关系的研究进展,探讨胃癌干细胞在胃癌细胞恶性转化中的作用及可能机制.方法 应用Pubmed及CNKI期刊全文数据库系统,以“上皮间质转化(epithelial-mesenchymal-transition,EMT)、胃癌干细胞(gas-tric cancerstem cells,GCSCs)”为关键词,检索2012-02-2018-02的相关文献.纳入标准:(1)GCSCs与肿瘤恶化的联系;(2)EMT与胃癌的关系;(3)GCSCs对EMT的正/负反馈调控机制.排除标准:根据纳入标准分析45篇文献.结果 GCSCs是胃癌扩散、复发的根源,EMT直接导致细胞黏附力减弱、侵袭力增强.多种转录因子及其他调控因子、mi-croRNAs、各种细胞微环境等可通过Wnt/β-catenin、EGFR/Ras和TGF-β/Smad等信号转导通路激活EMT,启动并维持胃癌细胞EMT过程,增强胃癌细胞的侵袭性和转移性的同时赋予其自我更新能力等GCSCs特性,进一步促进干细胞的致瘤性;GCSCs可反向调控EMT,促进胃癌细胞生长转移,完成相关转化;EMT与GCSCs共同受多种影响因素的调节.结论 EMT与GCSCs之间关系十分密切,需在进一步研究中阐明EMT与GCSCs在胃癌转移中的作用机制.靶向抑制EMT-GCSCs信号网络中的关键节点以阻断EMT过程,或可诱导GCSCs分化成其终末细胞抑制增殖,将GCSCs转化为具有较高分化程度的胃癌细胞.对EMT及GCSCs标志物作为潜在靶点的深入研究有望为胃癌防治提供新途径、新思路.
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循环肿瘤细胞检测方法研究现状
目的:总结循环肿瘤细胞检测方法的研究现状,探讨上皮间质转化和循环肿瘤微栓对循环肿瘤细胞检测的影响.方法:应用Medline、PubMed及CNKI期刊全文数据库检索系统,以“循环肿瘤细胞、上皮间质转化和循环肿瘤微栓”等为关键词,检索2004-01-2013-06的相关文献.纳入标准:1)循环肿瘤细胞概述;2)循环肿瘤细胞检测技术;3)上皮间质转化及其对循环肿瘤细胞检测的影响;4)循环肿瘤微栓及其对循环肿瘤细胞检测的影响.符合要求纳入分析的文献20篇.结果:转移是恶性肿瘤患者死亡的主要原因,循环肿瘤细胞检测对早期发现肿瘤微转移、评估预后及肿瘤个体化治疗具有重要意义.目前循环肿瘤细胞检测技术众多,各有其优缺点,特别是上皮间质转化和循环肿瘤微栓2种现象对循环肿瘤细胞检测有着重要影响.结论:循环肿瘤细胞检测将在临床肿瘤诊治过程中得到广泛应用,更高效、更经济和更快速的检测方法是未来的发展趋势.
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非可控性炎症和肿瘤细胞上皮间质转化关系的研究进展
目的:总结国内外关于非可控性炎症和肿瘤细胞上皮间质转化关系的研究进展,探讨非可控性炎症在肿瘤细胞恶性转化中的作用及可能机制.方法:应用PubMed及CNKI期刊全文数据库系统,以“上皮间质转化( Epithelial-mesenchymaltransition,EMT)、非可控性炎症及肿瘤微环境”为关键词,检索2005-01-2010-12的相关文献.纳入标准:1)非可控性炎症与肿瘤的联系；2) EMT与肿瘤的关系；3)非可控性炎症对EMT的调控机制.根据纳入标准分析26篇文献.结果:在非可控性炎症状态下,TGF-β、TNF-α和ILs等细胞因子可通过NF-kB等信号通路,激活EMT相关转录因子,启动并维持肿瘤细胞EMT过程,增强肿瘤细胞的侵袭性和转移性；肿瘤细胞发生EMT后又可进一步促进肿瘤微环境的形成,以维持炎症的非可控性状态.结论:非可控性炎症与EMT之间关系十分密切,通过靶向抑制非可控性炎症-EMT信号网络中的关键节点以阻断EMT过程,有望为肿瘤防治提供新的途径.
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食管鳞癌组织CXCR4与EMT相关因子表达及其相关性
目的 研究食管鳞癌组织中细胞趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)与上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关因子表达情况及相关性,探讨CXCR4介导食管鳞癌转移的相关机制.方法 选取2009-01-01-2011-12-31天津医科大学肿瘤医院食管肿瘤科114例经病理确诊的食管鳞癌患者手术切除存档蜡块.应用免疫组织化学法检测含114例的原发食管鳞癌组织芯片中CXCR4及EMT相关因子的表达,分析各指标与临床病理特征的相关性及CXCR4与EMT相关因子的相关性.结果 食管鳞癌中CXCR4的胞质阳性表达率为62.3％(71/114),与淋巴结转移(P=0.009)和肿瘤浸润深度(P=0.008)有关.β-catenin细胞质异常表达率为65.8％(75/114),与肿瘤直径(P=0.045)、淋巴结转移(P=0.001)和TNM分期(P=0.005)有关.β-catenin胞膜异常表达率为64.9％(74/114),与肿瘤部位有关(P=0.033).Vimentin阳性表达率为31.6％(36/114),与肿瘤淋巴结转移(P=0.013)、淋巴结转移个数(P=0.029)和TNM分期(P=0.024)有关.Logistic回归多因素分析示,CXCR4表达与淋巴结转移(P=0.030)、肿瘤浸润深度(P=0.005)、β-catenin胞质表达(P=0.011)和Vimentin的表达(P=0.022)有关.Spearman分析显示,CXCR4与β-catenin胞质表达(r=0.278,P=0.003)和Vimentin(r=0.256,P=0.006)具有相关性.结论 食管鳞癌淋巴结转移过程中存在CXCR4高表达及EMT现象,且CXCL12/CXCR4生物轴介导淋巴结转移过程可能与涉及调节EMT发生有关.
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沉默Oct4B1基因对结直肠癌耐药细胞上皮间质转化逆转实验研究
目的 研究已证实Oct4基因可调控肿瘤细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT).本研究探讨沉默Oct4的亚型Oct4B1能否逆转结直肠癌耐奥沙利铂细胞株SW620/OxR的EMT.方法 分别采用带G418抗性的Oct4B1-shRNA质粒和阴性对照质粒转染SW620/OxR细胞,转染成功后通过G418筛选建立稳定转染细胞株,分别称为实验组(RNAi组)及对照组(Ctrl组).对两组细胞作如下检测,(1)RT-qPCR检测Oct4B1的mRNA水平;(2)划痕实验检测细胞迁移能力;(3) Transwell小室检测细胞侵袭能力变化;(4)蛋白质印迹法检测EMT标记物E-钙粘蛋白(E-cadherin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平.结果 RNAi组与Ctrl组比较,(1)Oct4B1mRNA表达明显下调,P＜0.05;(2)细胞迁移能力明显减弱,P＜0.05;(3)细胞侵袭能力显著降低,P＜0.01;(4)上皮标记物E-cadherin明显增高(P＜0.05),间质标记物N-cadherin(P＜0.01)和Vimentin(P＜ 0.05)则明显下调.结论 沉默Oct4B1基因可逆转SW620/OxR细胞EMT.
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microRNA-103下调Dicer1对卵巢癌侵袭转移影响及其机制探讨
目的 探讨卵巢癌细胞中microRNA-103对Dicer1的调控作用以及对侵袭转移能力的影响,研究其作用分子机制.方法 收集华中科技大学同济医学附属同济医院2009-02-01-2012 07-02确诊为浆液性卵巢癌患者石蜡切片共135例,免疫组织化学检测配对原位转移卵巢癌病灶,高低级别浆液性卵巢癌病灶Dicer1表达水平;收集武汉同济医院2013-01-03-2013-03-20新鲜卵巢癌标本组织和正常卵巢标本各5例,提取RNA后qRT PCR法比较卵巢癌组织、正常卵巢组织、卵巢癌细胞系和正常卵巢上皮细胞中miR-103表达差异;用生物信息学的方法特异预测出miR-103特异作用Dicer1位点,后通过双荧光素酶报告体系进行验证.上调miR-103表达后,蛋白质印迹法检测Dicer1的表达变化;上调miR 103或下调Dicer1水平后Transwell实验观察卵巢癌细胞迁移侵袭能力的改变;Confocal观察EMT相关分子N-cadherin的表达.结果 Dicer1在卵巢癌发生发展过程中表达下降,转移灶与原位灶相比显著表达下调,x2 =15.0,P＜0.01;高级别浆液性癌较低级别Dicer1明显表达下调,x2 =21.4,P＜0.01.miR-103在上皮性卵巢癌组织的相对表达量为4.28±1.22,较正常卵巢(0.69±0.13)明显增加,t'=-6.381,P=0.002;同时在卵巢癌细胞系中相对表达量为3.71±1.36,较正常卵巢上皮细胞(0.98±0.19)显著增加,t=-4.851,P=0.005.荧光素酶报告系统示,miR-103能特异结合Dicer1-3'-UTR区域;卵巢癌细胞系SKOV3中过表达miR-103后其迁移细胞数目为77.5±8.4,较对照组(17.5±3.1)明显增加,差异有统计学意义,t=-21.44,P＜0.001;侵袭数目为50.7±4.2,较对照组(13.5±1.3)增加显著,差异有统计学意义,t=19.74,P＜0.001.Dicer1蛋白水平被显著抑制;Dicer1-siRNA下调Dicer1水平后卵巢癌细胞系SKOV3(t=16.67,P＜0.001)和CAOV3(t=18.63,P＜0.001)迁移侵袭能力增加;miR-103过表达或Dicer1-si后细胞形态呈现间质化改变,间质标志分子N-cadherin表达明显上升.结论 miR-103在卵巢癌中作为一个促癌miR促进卵巢癌侵袭转移,其分子机制是通过下调Dicer1介导卵巢癌细胞EMT的发生;抑制miR 103或恢复Dicer1水平可能成为上皮性卵巢癌治疗的有效方法.
关键词： 卵巢肿瘤 微小RNA-103 Dicer1 上皮间质转化 N-cadherin
