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褪黑素对肺炎小鼠心肌的保护作用
目的:了解褪黑素对肺炎小鼠心肌细胞线粒体形态和心脏功能的影响,以探讨在肺炎时应用自由基清除剂对肺外器官的保护作用.方法:雄性NIH小鼠48只随机分为4组:生理盐水对照组(以生理盐水注入气管模拟制作肺炎模型)、肺炎组(经气管注入细菌悬液制作肺炎模型)、褪黑素+肺炎组(在肺炎模型基础上每日经腹腔注射褪黑素溶液进行干预)、溶媒+肺炎组(在肺炎模型基础上每日经腹腔注射褪黑素溶液的溶媒作为对照).各组动物观察72 h后检测血流动力学指标,取心肌组织制备光镜和电镜标本,剩余心肌组织制备匀浆,检测心肌组织中丙二醛含量、总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)活性和铜锌-超氧化物歧化酶(Cu,Zn-superoxide dismutase,Cu,Zn-SOD)活性、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,同时检测血浆中TNF-o含量;电镜观察心肌线粒体形态改变.结果:肺炎后小鼠心脏功能受损、心肌组织中丙二醛、TNF-a含量增加(F=3.15～8.03,P＜0.01～0.05);T-SOD[肺炎组、生理盐水对照组:(110.3±27.4),(152.16±27.4)kNU/g],Cu,Zn-SOD[肺炎组、生理盐水对照组:(22.89±4.17),(30.50±6.96)kNU/g]活性降低(F=4.05,P＜0.05;F=5.78,P＜0.01);ATP含量降低(F=2.91,P＜0.05);心肌组织线粒体损伤明显(F=8.55,P＜0.01).褪黑素干预可部分抑制上述改变(F=2.91～8.55,P＜0.01～0.05).结论:在肺炎小鼠中,褪黑素通过降低心肌脂质过氧化、保护心肌抗氧化能力、保护心肌线粒体等作用进而保护小鼠心脏功能.
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褪黑素对小鼠胸腺细胞电离辐射损伤的防护作用
目的:探讨外源性褪黑素(MLT)对电离辐射所致小鼠胸腺细胞损伤的影响及其机制.方法:通过腹腔注射方式给予昆明系小鼠外源性MLT,分别建立单次给药和连续给药两种动物模型.对于单次给药动物模型,腹腔注射不同浓度MLT后60 min给予1 Gy X射线全身照射,12 h后采用流式细胞术和荧光分光光度法分别检测胸腺细胞凋亡小体百分率和DNA裂解率的变化;对于连续给药动物模型,连续1周腹腔注射不同浓度MLT后给予1 Gy X射线全身照射,24 h后检测胸腺细胞数量及3H-TdR掺入率的变化.结果:单次给药动物模型,小鼠受1 Gy X射线全身照射后12 h,胸腺细胞数显著低于假照组(P<0.001),凋亡小体百分率和DNA裂解率显著高于假照组(P<0.001).照射前预先给予外源性MLT,与0 mg·kg -1 MLT组(单纯照射组)比较,胸腺细胞数增多,以0.5 mg·kg -1 MLT组增多明显(P<0.01);凋亡小体百分率和DNA裂解率降低,在0.1～2.5 mg·kg -1 MLT浓度范围内差异均具有显著性(P<0.001).连续给药动物模型,小鼠受1 Gy X射线全身照射后24 h, 胸腺细胞数及3H-TdR掺入率均显著低于假照组(P<0.001).照射前预先给予外源性MLT,与单纯照射组相比,胸腺细胞数和3H-TdR掺入率均显著增多,前者在0.01～0.10 mg·kg -1 MLT浓度范围内差异具有显著性(P<0.01),后者在0.1～1.0 mg·kg -1 MLT浓度范围内差异均有显著性(P<0.05).结论:照射前预先给予外源性MLT可减轻电离辐射所致小鼠胸腺细胞损伤,对小鼠免疫功能具有保护作用.
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褪黑素联合全反式维甲酸对NB4细胞株的影响
目的 观察褪黑素(MLT)联合全反式维甲酸(ATRA)对人早幼粒细胞白血病细胞株NB4的增殖、凋亡、分化及细胞周期的影响.方法 1 mmol/L的MLT与1 μmol/LATRA联合作用于NB4细胞,1 mmol/L的MLT和1 μmol/LATRA作为对照组,药物作用24、48、72 h后进行试验.流式细胞术检测细胞凋亡率、细胞膜表面抗原CD11b的表达阳性率,观察细胞周期的变化情况.结果 MLT联合ATRA作用于NB4细胞24、48、72 h后,促进细胞的凋亡率为16.23%±0.38%、31.03%±0.51%和55.65%±2.68%,细胞表面CD11b的阳性率为22.66%±0.36%、57.31%±3.12%和81.74%±0.47%,对细胞周期的影响则表现为G1期细胞增多(68.1%±0.3%、73.3%±0.4%和83.2%±0.2%),S期细胞减少(23.1%±0.1%、23.2%±0.5%和8.2%±0.1%),均优于单用MLT组或ATRA组(P＜0.05).结论 MLT和ATRA联合用药的作用优于单用药.
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褪黑素保护细菌脂多糖引起的小鼠宫内胎儿死亡和生长发育迟缓
目的 研究褪黑素(MT)对细菌脂多糖(LPS)引起宫内胎儿死亡(IUFD)和生长发育迟缓(IUGR)的保护作用.方法 实验1:LPS组小鼠于受孕第15～17天每天经腹腔注射LPS(75 μg/kg),LPS+MT组在LPS处理前和(或)处理后经腹腔注射MT,生理盐水和单纯MT处理作为对照.所有孕鼠于受孕第18天处死,统计活胎、死胎和吸收胎数,称量活胎体重,测量胎鼠身长和尾长,并对胎鼠骨骼发育情况进行评价.实验2:LPS组小鼠于受孕第16天经腹腔一次性注射75 μg/kg LPS,LPS+MT组孕鼠于LPS处理前和(或)处理后经腹腔注射MT,生理盐水和单纯MT处理作为对照.LPS处理后6 h处死孕鼠,取母肝和胎盘,检测丙二醛和谷胱甘肽水平.结果 LPS+MT处理组宫内胎儿死亡数显著低于单纯LPS处理组,并呈明显剂量-效应关系;MT预+后和后处理均显著减轻LPS引起生长发育迟缓,并逆转LPS引起的枕骨骨化不全.MT预+后处理明显减轻LPS引起的母肝和胎盘脂质过氧化,但对LPS所致GSH含量降低无明显影响.结论 MT通过其抗氧化功能保护LPS引起的IUFD和IUGR.
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一氧化氮在结肠黏膜上皮细胞氧化损伤中的作用观察
目的探讨一氧化氮(NO)在结肠黏膜上皮细胞氧化损伤中的作用及褪黑素的影响.方法利用FeSO4+H2O2产生羟自由基损伤结肠黏膜上皮细胞,观察L-精氨酸、L-NAME对模型中NO合成的影响及相应细胞损伤程度的改变,并观察褪黑素对该过程的影响.实验检测指标包括乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、NO和黏液含量.结果模型组大鼠结肠黏膜上皮细胞MDA和LDH水平增高,CAT、GSHPX、SOD和黏液含量减少, NO水平增高与结肠黏膜上皮细胞氧化损伤相关,L-精氨酸和L-NAME通过促进或抑制NO合成,显著加重或减轻这种氧化损伤.褪黑素可逆转羟自由基及NO引起的氧化损伤.结论 NO直接参与羟自由基对结肠黏膜上皮细胞的氧化损伤,褪黑素通过直接清除羟自由基和NO及可能形成的过氧化亚硝基阴离子,对大鼠结肠黏膜氧化损伤具有保护作用.
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褪黑素保护大鼠慢性肝损伤的动态观察
目的观察褪黑素抗大鼠慢性肝损伤作用.方法用四氯化碳(CCl4)制造大鼠慢性肝损伤模型,同时予褪黑素腹腔注射;在造模的第1、2、3月末处死大鼠,分别测定大鼠体重、肝脏湿重和血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)及白蛋白和总蛋白水平,并作肝脏病理学检查.结果褪黑素可以显著降低CCl4诱导大鼠慢性肝损伤早期的ALT、AST,在大鼠慢性肝损伤的中期,MT可提高血清白蛋白水平和白球比值,改善肝脏病理损伤.结论褪黑素在CCl4诱导的大鼠慢性肝损伤早期可以减轻肝脏炎症,而在中晚期,MT主要起着抑制肝纤维化的作用.
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吲哚硒对小鼠化学性肝损伤的保护作用
目的探讨吲哚硒对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性化学性肝损伤的保护作用及可能机制.方法建立CCl4诱导小鼠化学性肝损伤模型,分光光度法检测血浆中ALT、AST水平和肝匀浆MDA、SOD、GSH-Px含量,HE染色法对肝脏组织作病理检查.结果吲哚硒(5、10、20 mg/kg)灌胃给药均能降低血浆中升高的转氨酶水平,病理检查也发现其可明显减轻肝组织坏死范围及程度,减少炎细胞浸润.同时发现吲哚硒可降低肝匀浆中升高的MDA水平,使降低的肝匀浆SOD、GSH-Px酶活性升高.结论吲哚硒对CCl4致小鼠急性化学性肝损伤具有保护作用,其机制与其抗自由基、提高抗氧化物酶的活性等有关.
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褪黑素对结肠黏膜上皮细胞氧化应激的影响
目的探讨褪黑素对大鼠结肠黏膜上皮细胞氧化应激的影响.方法在分离培养正常大鼠结肠黏膜上皮细胞基础上,利用FeSO4+H2O2产生.OH攻击制备结肠黏膜细胞氧化损伤模型,同时预先加入褪黑素并观察损伤减轻程度.实验设正常对照组、模型对照组、5-氨基水杨酸给药组(0.1 mmol/L),褪黑素给药组(0.01、0.1、1.0 mmol/L).培养一定时间后,取上清测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)和黏液含量.结果模型组大鼠结肠黏膜上皮细胞MDA、LDH和NO水平增高,CAT、GSHPX、SOD和黏液含量减少.不同剂量褪黑素呈剂量依赖性的减少LDH释放,抑制MDA和NO的形成,恢复黏液、CAT、GSHPX及SOD水平.结论褪黑素对大鼠结肠黏膜氧化损伤具有保护作用.
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褪黑素镇痛作用的依赖性及免疫增强作用
目的观察褪黑素(MT)的镇痛作用是否有耐受性和依赖性及其对免疫功能的影响.方法依赖性观察采用小鼠竖尾实验和跳跃实验;免疫功能的检测采用免疫器官称重法、碳粒廓清实验及脾淋巴细胞增殖反应等.结果MT 40mg/kg(qd×7 d,ip)产生镇痛作用而无耐受现象,并能提高ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应;小鼠scMT 350 mg/kg未出现竖尾现象;MT 350 mg/kg(bid×5 d)后,用纳洛酮(5 mg/kg)催瘾未出现跳跃现象,且对盐酸吗啡依赖小鼠的跳跃实验无明显影响;MT 350 mg/kg(bid×5 d)后,脾、胸腺指数及碳粒廓清实验中K、α值高于溶媒组,提示MT能显著增加小鼠的非特异性免疫功能;盐酸吗啡30 mg/kg(bid×5 d)对小鼠的免疫功能有抑制作用.结论MT镇痛作用无明显的耐受性及依赖性,并对免疫功能有促进作用.
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褪黑素对痴呆动物中枢神经细胞产生NO的影响
目的观察褪黑素对不同因素诱导的痴呆动物中枢神经细胞产生NO的影响.方法分别采用淀粉样β多肽25-35片段(Aβ25-35)和D-半乳糖(D-gal)诱导大鼠和小鼠学习记忆障碍模型,并采用胎鼠皮质-海马神经细胞培养来观察Aβ25-35和褪黑素对其产生NO的影响;NO的测定采用比色法.结果在Aβ25-35诱导的大鼠学习记忆障碍模型上,大鼠脑组织匀浆中NO的水平各实验组间差异无显著性;小鼠皮下注射D-gal 3个月后脑组织匀浆中NO含量较对照组降低(P<0.01),褪黑素(1、10 mg/kg)可降低的NO水平(P<0.01);Aβ25-35(1×10-7、1×10-6、1×10-5 mol/L)能降低胎鼠皮质-海马细胞培养上清液中NO的含量,褪黑素(1×10-5 mol/L)可对抗这种作用.结论褪黑素对神经细胞产生NO的影响依赖于不同的刺激状态.
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褪黑素对免疫性肝纤维化大鼠抗氧化酶活性的影响
目的 研究褪黑素对免疫性肝纤维化大鼠血清及肝匀浆中SOD、GSHpx活性的影响。方法 采用人血清白蛋白诱导大鼠免疫性肝纤维化模型，实验大鼠分为正常组、模型组、褪黑素预防组及阳性药对照组，检测各组动物血清及肝匀浆中SOD、GSHpx活性。结果 模型大鼠血清及肝匀浆中SOD、GSHpx活性明显降低；而自造模的尾静脉攻击阶段起，每ig褪黑素(0.3、0.6、0.9mg·kg-1)，均可恢复模型大鼠血清及肝匀浆中SOD、GSHpx的活性。结论 褪黑素对免疫性肝纤维化大鼠模型具有一定程度的保护作用，其机制可能与增强其抗氧化酶活性有关。
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褪黑素对NB4细胞作用的研究
目的 观察褪黑素对人早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡、分化及细胞周期的影响.方法 以不同浓度的褪黑素(0.1、0.5、1 mmol/L)加入NB4细胞中,继续培养24、48、72 h,利用流式细胞术检测细胞凋亡率,细胞膜表面抗原CD33和CD11b的表达阳性率,及细胞周期的变化情况.结果 MLT有促进NB4细胞凋亡的作用,且呈时间和浓度依赖性增加(P<0.05);CD33的细胞阳性率没有变化(P>0.05),CD11b的细胞阳性率在浓度为1 mmol/L,48 h和72 h有轻度增加(P<0.05);细胞周期检测则显示随着浓度和时间的增加, G1期细胞增多,S期细胞减少(P<0.05).结论 褪黑素有促进NB4细胞凋亡,影响细胞生长周期的作用,诱导分化作用则不明显.
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褪黑素对CCl4诱导大鼠肝纤维化模型肝星状细胞凋亡和功能的影响
目的 探讨褪黑素(MT)对肝星状细胞(HSC)凋亡和功能的影响.方法 予SD大鼠背部皮下注射CCl4造肝纤维化模型.体内实验:MT组大鼠灌胃给予MT[0.125、0.5、2.0 mg/(kg·d)]8周,HE染色观察病理改变,放免法检测血清透明质酸(HA)与Ⅲ型前胶原(PCⅢ).体外实验:从模型组来源的HSC给予MT(10、0.1 μmol/L和1 nmol/L),从正常组来源的HSC给予生理盐水;48 h后,流式细胞术检测HSC细胞凋亡,放免法检测培养上清中HA、PCⅢ.结果 体内实验中,MT各剂量组均明显改善CCl4引起的肝脏病理改变,降低血清HA、PCⅢ.体外实验中,MT 10 μmol/L显著诱导HSC凋亡,各浓度MT均明显降低HA、PCⅢ的水平.结论 MT可能通过诱导HSC凋亡和抑制其合成或分泌HA与PCⅢ而改善CCl4致大鼠肝纤维化.
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褪黑素对炎症免疫和痛反应的作用及其机制
用大鼠佐剂性关节炎(AA)模型、类风湿关节炎(RA)患者外周血淋巴细胞(PBL)、小鼠增龄性实验以及吗啡(Mor)依赖小鼠模型,从整体、细胞和分子水平探讨了褪黑素(MT)对炎症免疫和痛反应的作用及其机制.
