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葡萄籽原花青素对PC12细胞氧化损伤的神经保护作用及机制研究
目的 探讨葡萄籽原花青素(GSP)对PC12细胞氧化损伤的神经保护作用及机制.方法 用H_2O_2作用于PC12细胞,MTT检测细胞活性,用流式细胞仪测定PC12细胞凋亡率,共聚焦显微镜观察细胞Caspase-3活性的变化.结果 与模型组比较100μg/ml葡萄籽原花青素可使PC12细胞活性升高(P
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甘西鼠尾草注射液与丹参注射液对PC12细胞H_2O_2损伤保护作用比较研究
目的:比较甘西鼠尾草注射液与丹参注射液对PC12细胞H_2O_2损伤的保护作用.方法:采用细胞株培养的方法,建立PC12细胞H_2O_2损伤模型,通过MTT法和流式细胞分析仪检测细胞存活率和凋亡率;采用免疫细胞化学染色法检测PC12细胞bcl-2和bax表达.结果:PC12细胞经H_2O_2损伤后,细胞存活率降低、凋亡率增加,甘西鼠尾草注射液与丹参注射液处理组均可有效缓解上述改变(P<0.05);两药均使bcl-2表达增加(P<0.05),bax表达减少(P<0.05).结论:甘西鼠尾草注射液与丹参注射液对PC12细胞H_2O_2损伤具有明显保护作用.其机理可能与增强凋亡抑制因子bcl-2表达、抑制凋亡促进因子bax表达,进而抑制细胞凋亡有关.
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活性氧诱导离体大鼠耳蜗Corti器毛细胞凋亡的观察
目的 探讨氧自由基中毒后耳蜗毛细胞有无凋亡及其变化规律.方法 选用新生1～5 龄SD大鼠24只,随机分为4组,每组6只(12耳):①无血清培养液组(H_2O_2浓度为零);②0.05 mmol/l,H_2O_2组;③0.1mmol/L H_2O_2组;④0.5 mmol/L H_2O_2组.分离Corti器,并用尖刀按顶回、中回、底回将其分为3段,分别放入相应浓度的H_2O_2培养液中培养,培养结束后用丫啶橙/碘化丙啶双重染色技术检测并计数凋亡的毛细胞.结果 不同浓度H_2O_2组均检测到凋亡毛细胞.外毛细胞(OHC)是H_2O_2攻击的主要靶细胞,而支持细胞无凋亡.底回毛细胞损伤明显重于顶回和中回,各回外毛细胞损伤明显高于内毛细胞;随H_2O_2浓度增加,各回凋亡细胞增加.结论 本实验条件下,外源性H_2O_2可直接诱导离体培养大鼠耳蜗Corti器毛细胞凋亡,支持细胞无凋亡.
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不同浓度脂联素对心肌细胞氧化应激损伤后GRP78及Caspase-12表达的影响及意义
目的 通过原代培养SD大鼠的乳鼠心肌细胞建立H_2O_2心肌细胞氧化应激损伤模型,观察脂联素对心肌细胞氧化应激所致内质网应激的保护作用.方法 采用酶消化法原代培养乳鼠心肌细胞,倒置相差显微镜下观察细胞生长状态,通过α-肌动蛋白免疫荧光法对培养的心肌细胞进行鉴定.选用原代培养3～4天的心肌细胞,随机分为对照组、H_2O_2组、H_2O_2+10 mg/L脂联素组、H_2O_2+20 mg/L脂联素组和H_2O_2+30 mg/L脂联素组.实验终止后,在倒置相差显微镜下观察心肌细胞形态的变化,采用化学比色法测定乳酸脱氢酶的释放,通过流式细胞术来检测心肌细胞的凋亡,用RT-PCR与western Blotting方法检测内质网应激指标GRP78和Caspase-12的表达.结果 与对照组相比,给予H_2O_2后,细胞凋亡率显著增加(70.7%±6.4%比1.0%±0.6%,P<0.05),LDH释放增加(1411.5 ±189.7 U/L比353.3 ±50.3 U/L,P<0.05),内质网伴侣蛋白GRP78以及Caspage-12在mRNA(分别为1.25±0.50比0.18 ±0.10和1.32±0.15比0.26±0.06)及蛋白水平(分别为0.92±0.50比0.37±0.10和1.24 ±0.50比0.51±0.01)表达增加(P<0.05),30 mg/L脂联素预处理后给予H_2O_2,可较大程度地逆转上述指标变化,细胞凋亡率显著下降(43.6%±3.8%),LDH释放减少(686.7±61.1 U/L),内质网伴侣蛋白GRP78以及Cagpase-12在mRNA(分别为0.56±0.03和0.83±0.04)及蛋白水平(分别为0.66±0.03和0.64±0.03)表达减少(P<0.05).结论 氧化应激使GRP78和Caspase-12表达增强,启动内质网应激,脂联素可以通过减轻内质网应激逆转H_2O_2所致的心肌细胞损伤及凋亡作用,对心肌细胞有保护作用.
