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鲍曼不动杆菌外膜蛋白OmpA的原核表达及保守性分析
目的:扩增鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)外膜蛋白OmpA基因,表达纯化该蛋白,为深入研究鲍曼不动杆菌亚单位蛋白疫苗奠定理论基础.方法:从ATCC19606提取OmpA基因,构建pET28a(+)-OmpA 表达载体,用BL21诱导表达并纯化蛋白;选取20株临床菌株,PCR技术扩增OmpA基因,免疫印迹试验(Western blot) 验证OmpA蛋白保守性.小鼠腹腔细菌攻毒后生存率观察验证疫苗保护性.结果:成功构建pET28a(+)-OmpA质粒,表达并纯化蛋白;20株鲍曼不动杆菌均扩增出OmpA基因;Western blot 实验表明临床菌株OmpA蛋白表达阳性.攻毒后,免疫小鼠较对照组生存率明显增加.结论:OmpA基因和蛋白表达保守性高,具有免疫原性,是鲍曼不动杆菌疫苗良好的抗原靶点.
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SARS病毒蛋白保守性分析
目的:寻找和确定SARS病毒中高保守的蛋白,以指导针对这些高保守蛋白为药物靶的药物分子设计.方法:采用比较基因组的方法和PSI-Blast搜索方法分别探讨SARS病毒不同蛋白在冠状病毒属内部及在正链RNA病毒内的保守情况.结果:确定了SARS非结构蛋白,特别是RdRp、Hel、nsP12、nsP13等蛋白在冠状病毒属内部表现很高的序列相似性,同时它们在正链RNA病毒范围内呈现不同程度的保守性.结论:主要参与病毒的复制、转录及后处理过程的非结构蛋白RdRp、Hel、nsP12、nsP13的高保守性,表明与病毒扩增相关的基因调控机制的保守是病毒进化的重要特征;同时这些非结构蛋白的高保守性及功能重要性表明它们更适合作为有效的药物靶分子.
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钩端螺旋体外膜蛋白LipL45相关基因的保守性分析及在诊断中的初步应用
目的:分析外膜蛋白LipL45在不同致病性钩端螺旋体中的同源性,初步探讨其在钩端螺旋体病诊断中的应用价值.方法:克隆表达外膜蛋白LipL45相关基因,用酶联免疫吸附试验和显微凝集试验分别测定其抗血清效价和抗体活性.以15株不同致病性钩端螺旋体的基因组DNA为模板PCR扩增此外膜蛋白基因序列,通过测序进行同源性分析.表达产物作为包被抗原与部分钩端螺旋体患者血清反应,评估其作为诊断抗原的可行性.结果:免疫印迹法结果显示,抗血清能识别大多数致病性钩端螺旋体茵体蛋白,显微凝集试验结果也显示此外膜蛋白抗血清与大多数致病性钩端螺旋体凝集反应呈阳性.用重组LipL45蛋白包被96孔板作酶联免疫吸附试验检测显示,此蛋白抗原与22名感染者血清呈现不同水平的免疫阳性反应,而与10份正常人血清呈阴性反应(P
