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神经病理性疼痛大鼠脊髓背角神经元凋亡的内质网应激途径
目的:研究坐骨神经慢性压迫大鼠脊髓背角内神经元凋亡的内质网应激途径.方法:60只SD雄性大鼠随机分为假手术组(sham)和模型(CCI)组.CCI前、后1、3、5、7、14、21、28 d和35 d测定大鼠机械痛敏;RT-PCR和免疫组织化学检测大鼠脊髓背角内葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和Caspase-3的表达;TUNEL法检测脊髓背角内的细胞凋亡情况.结果:与假手术组相比,模型组的机械痛阈在术后明显下降,脊髓背角内GRP78、CHOP和Caspase-3的表达均增高,凋亡染色阳性细胞数目也较多.结论:坐骨神经慢性压迫模型大鼠脊髓背角内神经元凋亡的途径之一是内质网应激介导的,可能与神经病理性疼痛的发生、发展有关.
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外周神经损伤小鼠不同脊髓节段小胶质细胞和星形胶质细胞的激活状态
脊髓小胶质细胞和星形胶质细胞在外周神经损伤引起的痛行为敏化中发挥重要作用.但是,神经损伤引起的胶质细胞激活在脊髓背角的空间分布尚不清楚.本文采用坐骨神经慢性压迫(chronic constriction injury, CCI)模型,研究了神经病理性疼痛小鼠之颈、胸、腰、骶段脊髓背角胶质细胞的激活状态.采用von Frey方法测定CX3CRlYFP、GFAPYFP转基因小鼠和野生型(wild type,WT)小鼠CCI模型组和假手术组小鼠后爪对机械刺激反应的阈值.免疫荧光标记方法用于检测脊髓背角小胶质细胞和星形胶质细胞的激活状态.结果显示,野生型、CX3CR1YFP和GFAPYFP小鼠在CCI术后3天,术侧后爪均出现明显的触诱发痛,即von Frey刺激引起的缩腿反应阈值(paw withdrawal threshold, PWT)与非手术侧和假手术组动物后爪相比显著下降,并且一直持续到术后第14天;CCI术后14天,CX3CR1YFP小鼠术侧腰段脊髓背角CX3CR lYFP-GFP免疫荧光强度明显增高(P＜0.01,n=6),其他各节段无明显改变;GFAPYFP小鼠术侧胸段、腰段和骶段脊髓背角GFAPWP-GFP免疫荧光强度均显著增高;小胶质细胞和星形胶质细胞的激活情况在WT小鼠Iba-1和GFAP免疫荧光组织化学染色中得到进一步证实;CX-3CR1YFP-GFP和GFApYFP-GFP免疫荧光信号分别与小胶质细胞标志物Iba-1和星形胶质细胞标志物GFAP共定位;WT小鼠CCI术后3天,术侧胸、腰和骶段脊髓背角Iba-1表达水平均明显上调,但GFAP上调仅发生在脊髓腰段.上述结果表明,较为广泛的脊髓小胶质细胞和星形胶质细胞激活分别发生在痛觉敏化的早期和维持期,提示脊髓小胶质细胞和星形胶质细胞的激活可能分别与继发性痛觉敏化的产生和维持相关.
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鞘内注射丹参酮ⅡA对CCI大鼠脊髓背角内质网应激蛋白GRP78表达的影响
目的:观察丹参酮ⅡA对坐骨神经慢性压迫大鼠脊髓背角内葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)的表达,探讨内质网应激与丹参酮ⅡA镇痛机制之间的关系.方法:30只SD雄性大鼠随机分为模型组(n=20)和假手术组(n=10).模型组又分为实验组和生理盐水组(n=10).实验组和生理盐水组分别在大鼠鞘内注射丹参酮ⅡA 20 mg·kg-1和生理盐水0.1 mL,在手术当日及术后,每日1次,连续注射14d.检测各组大鼠在手术前及术后14天d的机械痛阈和热痛阈;术后第14天,免疫组织化学法检测大鼠脊髓背角内GRP78的表达.结果:与假手术组比较,生理盐水组大鼠的GRP78的表达增多,机械痛阈和热痛阈明显降低;与生理盐水组比较,实验组的脊髓背角内GRP78的表达下降,机械痛阈和热痛阈明显升高,差异均有明显统计学意义(P＜0.05).结论:坐骨神经慢性压迫模型大鼠鞘内注射丹参酮ⅡA后的镇痛作用可能与降低模型大鼠脊髓背角内GRP78的表达有关.
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慢病毒介导的DREAM沉默治疗在坐骨神经慢性压迫模型大鼠疼痛中的作用及其对GALR1的表达调控
目的 甘丙肽受体1(galanin receptor 1,GALR1)信号通路在痛觉调节中发挥重要作用,该研究利用坐骨神经慢性压迫(chronic constriction injury of the sciatic nerve,CCI)大鼠模型,探索慢病毒介导的DREAM沉默治疗在CCI模型大鼠疼痛中的作用及其对GALR1的表达调控.方法 选择健康雄性SD大鼠24只,随机分为4组(n=6):即RNA干扰组、空白载体组、单纯CCI组和正常对照组.鞘内置管前后分别测定基础痛阈,RNA干扰组和空白载体组于CCI后经微导管给予pKCSHR-Puro/GFP-DREAM慢病毒和空白载体,并测定腰段脊髓内下游调控元件拮抗分子(downstream regulatory element antagonist,DREAM)和GALR1的蛋白表达.结果 大鼠痛阈的变化:手术同侧热痛阈和机械痛阈测定结果表明,CCI处理后,RNA干扰组、空白载体组及单纯CCI组在各个时间点热痛阈和机械痛阈较正常对照组均显著降低(P ＜0.01);RNA干扰组鞘内注射后较注射前痛阈显著升高,治疗后相同时间点RNA干扰组较空白载体组及单纯CCI组痛阈亦显著升高.Western blotting结果表明,与其他实验组对比,RNA干扰组的DREAM蛋白表达水平显著下调,而GALR1蛋白表达水平较空白载体组、单纯CCI组亦有显著下调.结论 DREAM可以调控GALR1的表达,提示甘丙肽受体1信号通路参与DREAM基因调节大鼠神经病理性疼痛.
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鞘内注射丹参酮Ⅱ A对坐骨神经慢性压迫大鼠脊髓背角c-fos表达的影响
目的 研究丹参酮ⅡA对坐骨神经慢性压迫大鼠脊髓背角内c-fos蛋白的表达,探讨丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡ A,TSA)的镇痛机制.方法 30只SD雄性大鼠随机分为假手术组(sham组,n=10)和模型组(n=20).模型组又分为生理盐水组(NS组)和处理组(TSA组,n=10).模型组在手术当日及术后每日在模型大鼠鞘内注射生理盐水0.1 mL和丹参酮ⅡA20 mg/kg,连续注射14d.检测各组大鼠在手术前及术后14 d的机械痛阈和热痛阈;术后第14天,免疫组织化学法检测大鼠脊髓背角内c-fos的表达.结果 与假手术组比较,生理盐水组大鼠的机械痛阈和热痛阈明显降低,c-fos的表达增多;与生理盐水组比较,处理组的机械痛阈和热痛阈明显升高,脊髓背角内c-fos的表达下降,差异均有明显统计学意义.结论 鞘内注射丹参酮ⅡA对坐骨神经慢性压迫模型大鼠的镇痛作用可能与降低脊髓背角内c-fos的表达有关.
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加巴喷丁联合吗啡对神经病理性疼痛大鼠脊髓胶质原纤维酸性蛋白表达的影响
目的:观察加巴喷丁联合吗啡镇痛对坐骨神经慢性压迫(CCI)大鼠脊髓背角胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响.方法:选择重量在180～220 g的成年雄性SD大鼠24只,随机分为4组(n=6):假手术组(S组)、模型组(M组)、预防性镇痛组(P组)和常规镇痛组(N组).M组、P组和N组采用CCI建立神经病理性疼痛模型,P组在术前1 d至手术后9 d使用加巴喷丁联合吗啡镇痛,N组在手术当日至手术后第9天加巴喷丁联合吗啡镇痛,S组和M组仅给予生理盐水.分别于手术后第3、5、7、9天测定各组50%机械刺激缩足阈值,手术后第10天采用免疫组化测定脊髓GFAP表达.结果:与M组相比,P组和N组50%缩足阈值升高,同时脊髓背角GFAP表达降低(M组:0.623 7±0.049 03,P组:0.461 6±0.038 90,N组:0.521 5±0.026 91).结论:加巴喷丁联合吗啡可以减轻CCI神经病理性疼痛和脊髓背角GFAP的表达.
