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PHⅡ-7对人乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR体外杀伤活性和逆转耐药作用
背景与目的:多药耐药(multidrug resistance,MDR)是恶性乳腺癌化疗失败的主要原因,而ABC转运蛋白家族的P-glycoprotein(P-gp)高表达是MDR的主要机制之一.因此研制能抑制P-gp表达及其功能的新型抗癌药是目前研究的热点.本研究旨在研究PH Ⅱ-7对人乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR体外抗瘤活性及逆转耐药的作用.方法:采用MTT法检测PHⅡ-7、多柔比星(adriamycin,ADR)及二者联合应用对人乳腺癌细胞MCF-7和耐药细胞株MCF-7/ADR的IC50值;采用流式细胞仪测定PH Ⅱ-7对MCF-7及MCF-7/ADR细胞凋亡的诱导作用;采用逆转录PCR和实时荧光定量PCR方法检测PHⅡ-7对多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,mdr1)表达水平的影响;通过流式细胞仪观察PHⅡ-7处理前后,MCF-7/ADR细胞内Rhodamine123浓度的改变,分析PHⅡ-7对p-gp外排功能的影响.结果:PH Ⅱ-7对MCF-7和MCF-7/ADR细胞均有生长抑制作用,IC50值分别为(6.07±0.85)和(5.51±1.22)μmol/L;低浓度PHⅡ-7与ADR联合应用能增强其细胞毒作用,二者具有协同作用.PHⅡ-7可诱导MCF-7和MCF-7/ADR细胞凋亡;在诱导凋亡过程中,PHⅡ-7可降低MCF-7/ADR细胞内mdrl基因的表达,抑制p-gp外排功能.结论:PHⅡ-7可诱导MCF-7/ADR凋亡,并具有对MCF-7相同的体外杀伤活性.PHⅡ-7可通过抑制P-gp的表达和功能逆转MCF-7/ADR耐药性.
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靛玉红衍生物PHⅡ-7促进sTRAIL对乳腺癌细胞及其耐药株杀伤的机制研究
目的：探讨靛玉红衍生物PHⅡ-7联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对乳腺癌细胞MCF-7及其耐药株MCF-7／ADR的增殖及调节TRAIL受体表达的相关机制。方法采用MTT法，分别检测PHⅡ-7、TRAIL及低浓度PHⅡ-7联合TRAIL处理MCF-7、MCF-7／ADR细胞的生长抑制率，同时以TRAIL敏感细胞MDA-MB-231为对照，证实上述乳腺癌细胞对TRAIL的敏感性；采用流式细胞术检测细胞凋亡和药物作用后活性氧的产生情况；real time PCR检测PHⅡ-7以及PHⅡ-7和活性氧抑制剂NAC 联用后，乳腺癌细胞TRAIL功能性受体DR4、DR5的表达情况。结果 PHⅡ-7作用24 h 后对 MCF-7及 MCF-7／ADR 的 IC50分别为（4.49±1.55）、（3.44±0.90）μmol · L－1，TRAIL 可诱导MDA-MB-231细胞凋亡，而MCF-7、MCF-7／ADR对TRAIL极不敏感，各浓度组与MDA-MB-231相比差异具有统计学意义（P＜0.05）；低浓度PHⅡ-7联合TRAIL可有效促进TRAIL对MCF-7、MCF-7／ADR的杀伤并诱导凋亡，而两药单用对上述细胞的增殖抑制作用有限；此外，低浓度的PHⅡ-7还对人正常细胞PBMC的毒性很小，即使与TRAIL联用，在该浓度范围下也不会对正常组织细胞产生明显毒性；PHⅡ-7可有效诱导MCF-7及MCF-7／ADR细胞内活性氧的产生，同时上调TRAIL受体DR4、DR5的水平，并呈剂量依赖性。当PHⅡ-7与ROS 抑制剂 NAC 联用时，可有效抑制 PHⅡ-7对DR4、DR5的表达上调作用。结论低浓度的PHⅡ-7可有效增强乳腺癌细胞MCF-7、MCF-7／ADR对TRAIL治疗的敏感性，其机制可能是通过PHⅡ-7升高细胞内的活性氧水平进而上调TRAIL受体DR4、DR5表达而实现的。本研究为今后PHⅡ-7联合TRAIL 治疗方案的临床应用奠定了基础。
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PHⅡ-7通过升高ROS诱导K562和K562/A02凋亡
目的 探讨靛玉红衍生物--PHⅡ-7对K562和K562/A02的体外杀伤作用及其机制.方法 利用WST-8试剂盒、细胞凋亡检测以及活性氧(ROS)检测研究PHⅡ-7对K562和K562/A02发生杀伤作用的机制.共聚焦显微镜及Western blot分析观察药物处理前后细胞的变化.结果 细胞毒实验证实PHⅡ-7对K562和K562/A02有相近的杀伤作用.给予上述两种细胞2 μmol·L-1 PHⅡ-7可见明显的ROS水平升高.PHⅡ-7对K562及K562/A02具有诱导凋亡的作用,呈剂量依赖性.加入ROS的抑制剂NAC可抑制给药后细胞内ROS水平的提高,同时也抑制了PHⅡ-7处理后细胞的凋亡.共聚焦显微镜观察发现药物处理的K562和K562/A02细胞出现明显的凋亡形态改变,Western blot分析表明单用PHⅡ-7可以引起PARP-1及caspase-3,caspase-9的切割,当PHⅡ-7与NAC共同作用之后,上述改变均被抑制.结论 PHⅡ-7可以通过诱导K562/和K562/A02凋亡来实现对上述细胞的杀伤作用,该作用很有可能与其升高细胞内的ROS水平有关.
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PHⅡ-7逆转肿瘤细胞K562/A02耐药机制的研究
目的 阐明PHⅡ-7逆转肿瘤耐药的机制.方法 用MTT法测定阿霉素、PHⅡ-7及二者联合用药对人白血病细胞系K562及其多药耐药细胞系K562/A02的IC50值,提取不同浓度PHⅡ-7作用48 h后K562和K562/A02细胞RNA,以实时定量PCR的方法分析PHⅡ-7对MDR1基因表达水平的影响,后通过激光共聚焦显微镜和流式细胞仪观察PHⅡ-7作用前后,K562和K562/A02细胞内阿霉素浓度的改变.结果 PHⅡ-7本身具有抗肿瘤活性,对K562和K562/A02 IC50值分别为(1.37±0.37) μmol·L-1;(1.48±0.34) μmol·L-1.此外PHⅡ-7还能协同提高阿霉素的细胞毒作用,K562组CDI值为0.22,K562/A02组CDI值为0.09,其对耐药细胞的协同作用更为明显.阿霉素和PHⅡ-7同时作用于K562/A02,随着PHⅡ-7作用剂量的增加,K562/A02细胞MDR1基因表达水平逐渐下降;细胞内阿霉素浓度伴随PHⅡ-7作用时间的延长而逐渐提高.结论 PHⅡ-7不仅本身是有效的肿瘤细胞化疗药物,还具有下调MDR1耐药基因表达的作用,从而有效逆转K562/A02细胞的耐药现象,增强化疗药物阿霉素的细胞杀伤作用.
