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Bcl-2短发夹状RNA对BEL-7402、Caco2细胞的生长抑制作用
目的:研究Bcl-2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列的表达载体对肝癌细胞系BEL-7402和结肠癌细胞系Caco2生长的抑制作用.方法:将Bcl-2 shRNA序列克隆到携带绿色荧光蛋白基因的质粒Pgenesil-1载体,采用脂质体介导的转染方法将构建的Bcl-2shRNA表达质粒转入BEL-7402、Caco2细胞,同时设立阴性shRNA组、空载体组、脂质体组、空白组作为对照.通过倒置荧光显微镜和流式细胞仪观察细胞的转染效率,Western印迹法检测Bcl-2蛋白表达水平,MTT法测定细胞增殖情况.结果:Bcl-2 shRNA转染组、阴性shRNA组、空载体组的转染效率无显著差异.转染Bcl-2 shRNA后BEL-7402、Caco2细胞Bcl-2蛋白表达水平与转染阴性shRNA、空载体组、脂质体组和空白组相比均显著降低(P＜0.05),且Bcl-2 shRNA抑制Caco2细胞Bcl-2蛋白表达比BEL-7402细胞更为明显(P＜0.05).MTT测定显示转染Bcl-2 shRNA载体入BEL-7402、Caco2细胞在72、96 h细胞生长明显受到抑制,分别与转染阴性shRNA、空载体组、脂质体组和空白组比较,差异有显著性(P＜0.05).结论:Bcl-2 shRNA可特异性地抑制BEL-7402、Caco2细胞生长.
关键词： Bcl-2 shRNA RNAi BEL-7402细胞 Caco2细胞 -
蛇床子素抑制LPS诱导的肠上皮细胞株Caco2的炎症反应
目的:探讨蛇床子素(osthole)对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导的肠上皮细胞Caco2中炎症因子表达的影响及机制.方法:培养Caco2细胞,用LPS诱导炎症反应.在LPS刺激前给予细胞不同浓度的蛇床子素处理,通过real-time PCR检测白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的表达情况.分别用PKA抑制剂H89和KT5720处理细胞,观察cAMP/PKA信号通路对蛇床子素效应的影响;用Western blot检测细胞中p38、Erk和JNK的磷酸化水平.结果:LPS刺激可以显著增加Caco2细胞中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达.蛇床子素预处理对LPS诱导的炎症反应有明显抑制作用,PKA抑制剂H89和KT5720不能逆转蛇床子素的抑制作用.LPS刺激后,Caco2细胞中p38、Erk和JNK的磷酸化水平明显增加,蛇床子素可部分抑制它们的磷酸化.结论:蛇床子素具有抑制肠上皮细胞株Caco2炎症反应的效应,该效应不依赖于cAMP/PKA,可能与抑制Erk、JNK和p38的磷酸化有关.
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黄连素对P-糖蛋白底物在Caco-2和L-MDR1细胞跨膜转运的影响
目的 研究黄连素(berberine,Ber)对P-糖蛋白底物环孢素(cyclosporine A,CsA)和地高辛在Caco-2和L-MDRl细胞跨膜转运的影响.方法 以Caco-2、L-MDR1细胞为模型,在50 μmol·L-1～5 mmol·L-1 Ber作用后,测定地高辛和CsA跨膜转运的转运率和表观渗透系数.结果 Ber在50μmol·L-1～5 mmol·L-1范围内可剂量依赖性地降低地高辛在Caco-2和L-MDR1细胞单层底端(B侧)至顶端(A侧)的转运.对于CsA在Caco-2细胞的转运,50 μmol·L-1～5mmol·L-1的Ber不但剂量依赖性地降低CsA从B→A方向的转运,而且也明显增加其在A→B方向的转运.在Caco-2和L-MDR1细胞,Ber抑制地高辛B→A方向转运的IC50值分别为1.44 mmol·L-1和1.24 mmol·L-1.Ber抑制CsA在Caco-2细胞转运的Ic50值为607μmol·L-1.结论 Ber和CsA相互作用的机制可能涉及P-gp功能的抑制和饱和.
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基于H2O2诱导Caco-2细胞模型的猴头菌多糖抗溃疡性结肠炎活性研究
目的 建立双氧水(H2O2)诱导人肠黏膜上皮细胞(Caco-2)细胞的溃疡性结肠炎细胞模型,通过观察猴头菌多糖对该细胞模型影响,探讨其与氧化应激相关的抗溃疡性结肠作用机制.方法 通过CCK-8法检测对细胞模型增殖的影响;通过Elisa法检测对细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量变化;通过流式细胞术检测细胞凋亡率的影响.结果 与细胞模型组相比较,猴头菌多糖能明显增加H2O2诱导的Caco-2细胞增殖、明显降低细胞凋亡率,其细胞中MDA含量明显降低(P＜0.05),SOD及LDH含量明显提高(P＜0.05).结论 猴头菌多糖具有抗H2O2引起Caco-2细胞凋亡的作用,提示其抗溃疡性结肠炎活性可能与减少氧化应激相关.
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灯盏花素对肝癌细胞HepG2和结肠癌细胞Caco2的体外抗肿瘤活性筛选
目的 观察灯盏花素对人肝癌细胞(HepG2)和人结肠癌细胞(Caco2)的体外增殖抑制影响.方法 以不同浓度的灯盏花素分别处理HepG2和Caco2细胞24、48和72 h后采用MTT法检测灯盏花素对2种细胞活力的影响,以半数抑制浓度(IC50)及治疗指数(TI)作为评价其抗肿瘤活性及安全性指标.结果 灯盏花素对HepG2表现高浓度抑制作用,浓度为20 000μmol/L时,对HepG2细胞24、48和72 h的抑制率分别为37％、63％和69％;对Caco2细胞呈浓度依赖性,浓度为5 000μmol/L时,对Caco2细胞24、48和72 h的抑制率分别为72％、95％和92％.灯盏花素对HepG2 24h的IC50值为24 320.5μmol/L;48h的IC50值为30 667.7μmol/L;72 h的IC50值为15 586.1μmol/L.对Caco2细胞24 h的IC50值为11 417.0μmol/L;48 h的IC50值为832.2μmol/L;72h的IC50值为1 369.2μmol/L.结论 灯盏花素对HepG2和Caco2细胞均有不同程度的抑制作用,对Caco2的抑制效果更明显.
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组织胺对肠粘膜屏障功能的调节作用研究
为探讨组织胺对肠粘膜屏障功能的调节作用,采用CaCo2细胞单层肠上皮系统-感染模型,将1×10-6mmol/L、1×10-7mmol/L和1×10-8 mmol/L三种不同浓度的组织胺DMEM细胞培养液分别加入已形成类似肠上皮的CaCo2细胞单层系统中,和定量的大肠杆菌混合培养.观察侵入细胞的大肠杆菌量,并用同样的方法测试组织胺调节作用的时间效应.结果:经浓度为1×10-6mmol/L、1×10-7mmol/L和1×10-8mmol/L组织胺液处理过的CaCo2细胞液的细菌培养结果分别为52.5、30.3和91.3个,而对照组为536.2个,显示不同浓度的组织胺均能明显减少大肠杆菌进入上皮的数量(P＜0.05).观察不同的作用时间段发现:对照组及组织胺-DMEM培养0.5、1.0、2.0、4.0和18.0小时后的细菌入侵数分别为101.5、135.5、64.0、29.5、35.5和22.55个,说明组织胺的作用有其时相性.上述实验结果表明,组织胺能增强肠粘膜的屏障功能,减少大肠杆菌对肠上皮细胞的侵袭作用.
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不同淋巴组织淋巴细胞培养上清诱导Caco2细胞向微皱褶样细胞转分化
目的 复制微皱褶(M)样细胞体外诱导模型,从功能和基因水平两方面鉴定M样细胞,同时观察不同淋巴组织活化的淋巴细胞的培养上清对Caco2细胞向M样细胞转化的影响.方法 用3μg/mL伴刀豆球蛋白A(Con A)刺激Peyer结(PP)、肠系膜淋巴结(MLN)和脾脏(Sp)的淋巴细胞3d,收集细胞培养上清后,将其并与Caco2细胞共培养.在TranswellTM上室加入微球,收集下室的培养液,流式细胞术分析荧光微球数量;反转录PCR检测M样细胞相关基因CC趋化因子配体20 (CCL20)、密封蛋白基因4(CLDN4)、肿瘤坏死因子受体超家族成员9(TNFRSF9)、Ets家族转录因子Spi-B mRNA的水平,观察不同淋巴组织淋巴细胞培养上清对Caco2细胞向M样细胞转化的诱导率的影响.结果 与空白对照组相比,PP、MLN和Sp淋巴细胞培养上清诱导后,诱导后的Caco2细胞转运的微球数量和CCL20、CLDN4、TNFRSF9、Spi-B的mRNA水平均显著增加;与未刺激组相比,Con A刺激后,诱导后的Caco2细胞转运的微球数量和CCL20、CLDN4、TNFRSF9、Spi-B的mRNA水平均显著增加.结论 Con A刺激和未刺激的淋巴细胞培养上清,均可以诱导Caco2细胞向M样细胞转分化.
