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人参皂甙Rb1对机械通气大鼠肺组织NF-κB和iNOs表达的影响
目的 观察人参皂甙Rb1对机械通气肺损伤(VILI)大鼠炎症信号通路蛋白NF-κB及诱导型一氧化氮合酶(iNOs)的影响.方法 将30只SD大鼠随机分为假手术组(C组)、VILI组和人参皂甙Rb1预处理组(Rb1组),每组10只.后两组大鼠潮气量40ml/kg机械通气4h建立大鼠VILI模型,Rb1组在通气前30min尾静脉注射40mg/kg人参皂甙Rb1,其他两组予等容量0.9％氯化钠溶液.观察各组大鼠肺组织病理改变,肺组织湿/干重比(W/D),收集肺泡灌洗液(BALF),采用ELISA法测定BALF中TNF-α、IL-6水平,硝酸盐还原酶法检测一氧化氮(NO)水平;RT-PCR测定肺组织中iNOs mRNA的表达水平,Western blot检测肺组织的NF-κB蛋白水平.结果 与C组相比,VILI组肺组织病理损伤严重,肺组织W/D显著增加,BALF中TNF-α、IL-6、NO水平增加,iNOs mRNA表达增加,NF-κB蛋白表达上调;与VILI组比较,Rb1组肺组织病理损伤程度减轻,肺组织W/D降低,BALF中TNF-α、IL-6、NO水平降低,iNOs mRNA表达降低,NF-κB蛋白表达下调.结论 人参皂甙Rb1可下调机械通气大鼠NF-κB及iNOs活性,降低促炎因子TNF-α、IL-6、NO释放,减轻肺损伤.
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肿瘤坏死因子-α对原代大鼠肾近端小管上皮细胞Toll样受体2表达的调控及机制
目的 探讨肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对原代大鼠肾近端小管上皮细胞Toll样受体2(toll like receptor 2,TLR2)表达的调控以及核因子-κB (nuclear factor-κB, NF-κB)在其中的作用.方法 体外分离与培养原代大鼠肾近端小管上皮细胞,以TNF-α按不同时间给予刺激, Western blot检测TLR2, I-κBα,磷酸化I-κBα(pI-κBα),GAPDH蛋白水平.分别以TNF-α、NF-κB 特异性抑制剂Bay11-7082处理25 h、Bay11-7082预处理1 h后加入TNF-α刺激24 h,检测TLR2表达的变化.结果 TNF-α刺激6～24 h,TLR2高于基线水平;Bay11-7082处理组和Bay11-7082+TNF-α处理组的TLR2蛋白表达水平高于对照组.Bay11-7082+TNF-α处理组与单独TNF-α处理组TLR2蛋白表达水平无差异.TNF-α刺激后5～120 min,pI-κBα蛋白水平升高.结论 TNF-α促进原代大鼠肾近端小管上皮细胞TLR2蛋白表达,NF-κB对TLR2的表达可能起负调节作用.
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内皮细胞微粒对人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达和NF-κB活性的影响
目的 探讨内皮细胞微粒(EMPs)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)核转录因子-κB (NF-κB)活性变化及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响.方法 将体外培养的HUVECs分3大组:① EMPs不同时点观察组:用EMPs (终浓度105/ml)分别刺激细胞0、3、6、12、24 h;② EMPs不同剂量作用组:分别用终浓度为0、102、103、104、105/ml的EMPs刺激细胞24 h;③ 二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)干预组:在EMPs (终浓度105/ml)刺激前,与终浓度为10 μmol/L的PDTC共同孵育30 min.用实时荧光定量PCR测定ICAM-1 mRNA的表达,Western blot测定核蛋白NF-κB p65和ICAM-1蛋白的表达.结果 EMPs可通过活化NF-κB,使ICAM-1 mRNA和蛋白呈剂量和时间依赖性表达上调.NF-κB特异性拮抗剂PDTC可显著抑制EMPs的此作用.结论 在EMPs诱导的HUVECs炎性效应中,NF-κB参与调控炎性因子ICAM-1的表达.
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增加受者体内一氧化碳含量在减轻小鼠移植心缺血再灌注损伤中的作用和机制
目的 观察心脏移植前用二氯甲烷(MC)灌胃增加受者体内一氧化碳含量在减轻小鼠移植心缺血再灌注损伤中的作用及其机制.方法 以Balb/c小鼠作为供、受者,建立颈部异位心脏移植模型.实验共分为4组,分别为MC 100 mg组(n=10)、MC 500 mg组(n=12)、橄榄油组(n=10)和正常对照组(n=5).前3组在麻醉前3 h分别用经橄榄油稀释的MC 100 nag/kg、MC 500mg/kg及单纯橄榄油0.15 ml对受者进行灌胃处理,然后行颈部异位心脏移植;正常对照组小鼠仅作麻醉处理,不进行心脏移植.分别于灌胃后0、1、3、6、12和24 h剪尾采血,测定血液中CO的含量[用碳氧血红蛋白(COHb)占总血红蛋白的百分比表示],并于相应时间点取心肌组织,检测心肌组织中CO的含量;各组移植后3和24 h分别处死半数受者,检测移植后3和24 h血清中肌钙蛋白I(cT-nI)、心肌组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素10(IL-10)、细胞凋亡与相关基因Bcl-2和Bax mRNA以及核因子κB(NF-κB)的表达,并观察移植心心肌的超微结构.结果 与橄榄油组比较,MC 100 mg和MC 500 mg组受者血液中COHb浓度与心肌组织中CO含量明显升高,均在灌胃后3h达到峰值;MC 100 mg组和MC 500mg组受者心脏移植后3和24h,能显著降低血清中cTnI水平(P<0.01),并以MC 500 mg组降低为明显;可明显下调促炎症基因TNF-α mRNA水平(P<0.01),而抗炎症基因IL-10 mRNA上调不明显(P>0.05),同时可以显著上调抗凋亡基因Bcl-2 mRNA水平(P<0.01),并抑制促凋亡基因Bax mRNA的转录(P<0.01);心肌超微结构损伤明显减轻.正常对照组可见少量NF-κB表达,而橄榄油组、MC 100 mg组和MC 500 mg组NF-κB活性均显著增强(P<0.01),但后三组之间NF-κB活性的差异无统计学意义(P>0.05).结论 诱导受者体内增加CO含量能通过其抗炎症和抗凋亡功能而减轻移植心缺血再灌注损伤;但与抑制NF-κB信号转导通路无关.
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视神经脊髓炎 IgG 刺激原代培养大鼠星形胶质细胞免疫反应
视神经脊髓炎（NMO）主要累及星形胶质细胞，导致中枢神经系统炎症、脱髓鞘和组织损伤。脑内病灶常高表达水通道蛋白4（AQP4），AQP4被认为是 NMO 血清 IgG 的抗原目标。根据 NMO 的可逆性及对NMO 病灶演变特点的分析，笔者推测 NMO IgG 可能诱导了星形胶质细胞的动态免疫过程。培养原代大鼠星形胶质细胞，加入从 NMO 患者血清中提取或纯化的 IgG，星形胶质细胞出现炎性增殖，同时基因表达出现与之匹配的明显变化。且星形胶质细胞反应因子脂质运载蛋白-2、多种趋化因子、细胞因子、应激反应因子的表达均增加。而在培养的原代星形胶质细胞中加入从正常对照者血清中提取的 IgG 则无上述变化。此星形胶质细胞的反应还与疾病种类相关。从复发缓解型多发硬化、Sj?gren's 或系统性红斑狼疮患者血清中提取的 IgG 加入培养的原代星形胶质细胞中也不能导致上述变化。笔者推测是 NMO IgG 与 AQP4结合，导致星形胶质细胞出现炎症反应，并出现基因在转录和翻译水平的相应变化。抑制星形胶质细胞的炎症反应可能有助于减少星形胶质细胞增殖，缓解 NMO 病灶的发展。
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白介素-1受体相关激酶-2和磷脂酰肌醇 3-激酶协同调控白介素-1诱导的NF-κB 活化
目的研究白介素1受体相关激酶2(IRAK-2)和磷脂酰肌醇 3-激酶(PI 3-激酶)在白介素-1(IL-1)诱导核因子- κB(NF-κB)活化中的作用.方法 Lipofectin介导反义IRAK-2寡核苷酸或反义PI 3-激酶寡核苷酸转染HepG2细胞后,用逆转录PCR法检测IRAK-2 mRNA和PI 3-激酶 mRNA表达水平,以Sandwich ELISA法检测NF-κB的活化.结果 (1) 反义IRAK-2寡核苷酸和反义PI 3-激酶寡核苷酸分别抑制IRAK-2 mRNA和PI 3-激酶mRNA的表达;(2)反义IRAK-2寡核苷酸或反义PI 3-激酶寡核苷酸部分抑制NF-κB活化;(3)与反义IRAK-2寡核苷酸或反义PI 3-激酶寡核苷酸单独转染HepG2细胞相比,反义IRAK-2 寡核苷酸和反义PI 3-激酶寡核苷酸共转染HepG2细胞对NF-κB的抑制作用明显增强.结论在HepG2细胞中,IRAK-2和PI 3-激酶都调控NF-κB活化但都不能完全激活NF-κB,IRAK-2和PI 3-激酶在调控NF-κB 活化时有协同作用.
