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松果菊苷对TNFα诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用
目的探讨肉苁蓉提取物松果菊苷对TNFα诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用.方法用MTT法检测细胞存活率,DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡的发生,以激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化,并用荧光酶标仪测定caspase-3的活性.结果 100 μg·L-1 TNFα处理细胞36 h显著降低细胞的存活率;诱导细胞发生凋亡,凋亡率达37%;细胞内活性氧水平及caspase-3的活性升高;而线粒体膜电位却明显降低,红/绿荧光强度的比值由正常的5.97降低为0.35左右.而预先给予1, 10或者100 mg·L-1浓度的松果菊苷处理细胞2 h,可提高细胞存活率;并可有效抑制DNA ladder的发生;流式细胞仪检测凋亡率分别降低到25.9%,18.3% 和 8.2%;激光共聚焦显微镜结果显示松果菊苷可明显抑制细胞内活性氧产生;并可逐渐恢复线粒体的高能量状态;caspase-3的活性不断降低,并呈现了一定的剂量依赖性.结论松果菊苷能抑制TNFα诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,其神经细胞保护作用可能与降低细胞内活性氧水平,抑制caspase-3的活性和维持线粒体膜电位的高能状态有关.
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葛根素对MPP+诱导的SH-SY5 Y细胞凋亡过程中p53和mir-34 a表达的影响
近年来，部分以p53为靶点的化合物研究推动着蛋白相互作用和蛋白突变体构象领域药物的新发现[1]，但有关中药单体分子对神经细胞退行性变过程中p53及其相关基因变化的研究尚不多见。本研究在前期相关实验基础上[2-4]，采用MPP+诱导的SH-SY5Y 细胞凋亡模型，进一步探讨葛根素是否通过调节p53及mir-34a 表达来影响多巴胺神经细胞凋亡。
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2，3-吲哚醌对神经母细胞瘤细胞 SH-SY5Y侵袭转移的影响及机制
目的：探讨2，3-吲哚醌对神经母细胞瘤细胞 SH-SY5Y 侵袭转移的影响及机制。方法体外培养 SH-SY5Y 细胞，用不同浓度（50、100、200、300μmol／L）的2，3-吲哚醌处理细胞48 h，并设不加药物处理的细胞作为对照组，CCK-8法检测细胞活性，筛选合适的2，3-吲哚醌浓度；用吖啶橙染色法检测对照组和200μmol／L 2，3-吲哚醌处理组（加药组）的自噬溶酶体细胞数量；将细胞分别用50、100、200、300μmol／L 2，3-吲哚醌处理（加药组），并设空白对照，48 h 后用 Western blotting 法检测自噬标志性蛋白 LC3-Ⅱ的表达水平，Transwell 小室试验检测细胞的侵袭能力，划痕试验检测细胞迁移能力。结果与对照组相比，随着2，3-吲哚醌浓度的升高，细胞 A450值降低，药物对细胞的抑制率升高（P ＜0．05或＜0．01）。吖啶橙染色结果显示，与对照组相比，加药组产生自噬溶酶体的细胞数增多（P ＜0．01）。Western blotting 结果显示，与空白对照比较，随着药物浓度增加，加药组 LC3-Ⅱ表达增多（P＜0．05或＜0．01）；Transwell 小室试验和划痕试验表明，随着2，3-吲哚醌浓度的增加，SH-SY5Y 细胞侵袭转移能力逐渐减弱（P 均＜0．05）。结论2，3-吲哚醌可能通过诱导神经母细胞瘤细胞 SH-SY5Y 自噬，从而抑制其侵袭转移。
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西洋参水提物对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y 细胞凋亡的保护作用
目的:探究在以SH-SY5Y细胞作为神经元代表,β淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导凋亡的阿尔茨海默症(Alzheimer′s Disease,AD)体外细胞模型中,西洋参水提物(water extracts of American Ginseng,WEAG)对神经元的保护作用.方法:流式细胞仪(FCM)检测确定Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡的佳浓度和时间,以及WEAG抗凋亡的浓度,MTT法检测细胞存活率,Hoechst33258染色观察细胞形态的变化.结果:50 μmol/L Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞72 h后,细胞变圆,聚集,Hoechst33258染色可见明显的颗粒状和固缩状荧光,FCM检测凋亡率达(37.30±0.69)%,与对照组(1.56±0.80)%比较,差异具有显著性意义(P<0.05).而Aβ25-35和不同浓度的WEAG(0.5、1、5 mg/ml)同时孵育后,细胞形态明显改善,MTT值显著高于Aβ25-35处理组(P<0.01),凋亡率分别降低到(16.71±1.08)%、(10.52±2.11)%和(3.39±1.65)%,与Aβ25-35损伤组(37.30±0.69)%相比,差异具有统计学意义(p<0.05),并呈现出剂量依赖关系.结论:西洋参水提物对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡有显著的保护作用.
关键词： SH-SY5Y 细胞 Aβ25-35 西洋参水提物 细胞凋亡
