首页 > 文献资料
-
两种重组逆转录病毒浓缩方法的比较
目的比较传统逆转录病毒浓缩方法(差速离心)与简便方法浓缩逆转录病毒效率的差异.方法选择含有新霉素磷酸转移酶(NeoR)的重组逆转录病毒载体,通过包装细胞得到含有重组逆转录病毒粒子、有感染力的病毒溶液,分别采用差速离心和简便方法对该病毒溶液进行浓缩,将浓缩前后的病毒溶液体外感染靶细胞NIH3T3并测定其滴度,计算浓缩效率.结果简便方法与传统差速离心方法浓缩病毒上清效率分别为36.54%,38.46%,二者比较无差异(P＞0.05).结论简便方法浓缩逆转录病毒对设备要求较低,许多小实验室可推广应用.
-
人大颗粒淋巴细胞抗菌多肽的分离
新近的资料表明T淋巴细胞和NK细胞具有直接抗细菌、真菌和寄生虫作用,其分子基础受到关注.现已报道从猪细胞毒性T细胞和NK细胞发现一链长为78个氨基酸残基的小分子抗菌肽,并对肿瘤细胞亦具细胞毒性.本文报道从人大颗粒淋巴胞浆颗粒中分离抗菌多肽.取健康人外周新鲜血,用淋巴细胞分层液分离单个核细胞,离心洗涤,用RPMI 1640完全培养基(含rIL-21 000 U/mL),于37℃,5% CO2孵箱培养7 d.收集IL-2刺激的淋巴细胞,0.34 mol/L蔗糖匀浆,经差速离心获得胞浆颗粒,用5%乙酸提取酸性可溶物.电泳凝胶/琼脂糖弥散抗菌技术发现三条抗菌蛋白带.经制备性AU-PAGE获得HLP-1、和HLP-2和HLP-3等3个抗菌组分,琼脂糖弥散抗菌试验显示对大肠杆菌、绿脓杆菌和金色葡萄球菌等均具很强抗菌活性.SDS-PAGE分析显示HLP-3已为纯化分子,其分子量约为7 kD;HLP-2包含3个多肽,分子量范围5.6～8.8 kD;HLP-1组分相当复杂,包含6个多肽分子,分子量范围5.5～13.0 kD.
-
基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术在尿标本微生物快速鉴定中的应用
目的 评估基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术在尿液标本微生物快速鉴定中的临床应用价值.方法 收集苏州大学附属第二医院2016年10-12月住院和门诊送检的中段尿标本进行差速离心沉淀后经MALDI-TOF MS技术检测,同时进行尿常规和有形成分分析,并与传统尿培养鉴定结果进行比较,计算质谱的鉴定率.结果 212例尿培养阳性标本中MALDI-TOF MS技术鉴定出病原菌168例,总鉴定率为79.2％,大肠埃希菌鉴定率高,为92.0％,其他肠杆菌科细菌、肠球菌属、非发酵菌科鉴定率分别为79.4％ 、66.5％ 、66.7％,假丝酵母菌属、链球菌属、其他革兰阳性菌标本量少,鉴定率分别为58.3％ 、50.0％ 、44.4％.其中140例标本菌落计数大于105 CFU/mL,鉴定率为92.9％.结论 MALDI-TOF MS技术直接检测尿液标本中的微生物具有简单快速、准确性高等优点,可以弥补传统方法的不足,有效缩短检验时间,优化实验室流程,准确快速地为临床提供检验结果,结合尿常规和有形成分分析等辅助手段具有较高的临床应用价值.
关键词： 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术 快速鉴定 差速离心 中段尿培养 -
大鼠T细胞源性exosome提取方法比较
目的：采用3种方法从大鼠T细胞培养上清中提取纯化exosome ，以获取高质量的exosome。方法分别采用Exo-Quick Precipitation提取法、超滤密度梯度离心法、差速离心法提取 T 细胞培养上清中的exosome。利用透射电镜进行形态学观察，2，2-联喹啉-4，4-二甲酸二钠（BCA ）法进行蛋白定量，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE ）分析蛋白表达的差异，Western blotting检测白细胞介素2（IL-2）的表达。结果3种方法均可提取出exosome；ExoQuick Precipitation 提取法、超滤密度梯度离心法所得样本浓度显著高于差速离心法所得样本浓度（P＜0．05）；SDS-PAGE结果显示3种方法所得样本具有蛋白表达强度的差异；Western blotting显示3种方法所得样本均表达IL-2。结论 ExoQuick Precipitation提取法、超滤密度梯度离心法可获得高纯度、无蛋白丢失的exosome样本。
-
大鼠心肌细胞核Ca2＋释放受体在心肌肥厚时的变化
细胞核上存在相对独立的Ca2＋摄取和释放系统，如1，4，5-三磷酸肌醇受体(inositol 1,4,5 triphosphate receptors,IP3R)是一类配基(IP3)操纵的Ca2＋释放通道，存在于内质网肌浆网和细胞核膜上。IP3R数目和结构的变化可能会影响到核内Ca2＋信号的幅度和频率，并精确地调控核内Ca2＋变化，进而影响核的各种功能。为了研究细胞核Ca2＋释放受体-IP3R在心肌肥厚时的变化，及体外蛋白磷酸化和核外Ca2＋浓度对它的影响，我们在腹主动脉缩窄大鼠心肌肥厚模型上，通过差速离心提纯心肌细胞核，采用［3H］IP3的放射受体分析的方法，观察心肌细胞核膜IP3R与其配体的大结合容量(Bmax)和亲和力(Kd)，从而进一步揭示心肌肥厚发生的分子机制。结果发现腹主动脉缩窄大鼠心肌肥厚组IP3与核膜结合的大容量Bmax比对照组增加54.9%［每毫克蛋白(891.0±111.0)vs(401.82±121.4)fmol,P<0.05］。
