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NS398对Aβ肽损伤原代培养海马神经元的影响
目的:探讨Cox-2抑制剂NS398对损伤神经元的保护作用.方法:将原代培养的SD大鼠海马神经元随机分为空白对照组、Aβ肽细胞模型组和NS398实验组.以10 μmol/L Aβ25-35制作原代培养海马神经元损伤模型,以四氮唑溴盐(MTT)比色法检测细胞存活率,免疫细胞化学法检测Cox-2、Caspase-3的表达.结果:Aβ25-35细胞模型组神经元形态变化明显,细胞存活率明显下降,Cox-2和Caspase-3表达增强,与空白组比较有显著差异(P＜0.01).NS398使神经元细胞存活率明显提高并使Cox-2和Caspase-3表达减弱,与Aβ肽模型组比较具有显著性差异(P＜0.01).结论:Aβ25-35导致Cox-2和Caspase-3的表达增强,并使SD大鼠原代培养海马神经元变性、死亡.NS398可能通过抑制Cox-2和Caspase-3的表达保护原代培养海马神经元.
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p38MAPK通路参与亚急性帕金森病模型小鼠黑质iNOS表达的调控
目的:研究1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致Parkinson病(PD)小鼠模型黑质p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路对诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide,iN-OS)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达调控,以探讨PD多巴胺能神经元丢失的可能机制.方法:采用MPTP制备PD小鼠模型,观察行为学变化;采用免疫组化和免疫蛋白印迹法,观察黑质区酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)、iNOS、caspase-3和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)阳性细胞数和蛋白表达水平变化及给予p38MAPK特异性抑制剂SB203580后对上述变化的影响.结果:模型Ⅱ组TH阳性神经元明显丢失,小鼠出现典型的PD样行为学表现;模型Ⅰ组小鼠黑质区p-p38MAPK、iNOS、caspase-3阳性细胞数及蛋白水平显著增加.经SB203580处理后,上述变化明显减轻(P<0.01).结论:p38MAPK通路对PD模型小鼠黑质区细胞凋亡可能起重要的调控作用,抑制该通路具有一定神经保护作用.
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TRAIL和Caspase-3在尖锐湿疣组织中的表达
目的 观察尖锐湿疣(CA)组织中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达情况并探讨其意义.方法 采用免疫组化SP法检测30例CA患者组织中和20例正常包皮组织中TRAIL和Caspase-3的表达情况,并进行相关性分析.结果 CA组织中TRAIL阳性表达率(73.33％)和表达强度(+～3+)明显高于正常包皮组织(20.00％和+～2+),差异均有统计学意义(P均＜0.05).CA组织中Caspase-3阳性表达率(60.00％)略低于正常包皮组织(65.00％),差异无统计学意义(P＞0.05);但是CA组织中的Caspase-3表达强度(+～2+)低于正常包皮组(2+～3+),差异也有统计学意义(P＜0.05).CA组织中TRAIL和Caspase-3的阳性表达呈现正相关(P＜0.05).结论 CA组织中均存在TRAIL和Caspase-3异常表达,该两者可能共同参与了CA的发生和发展.
关键词： 尖锐湿疣 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 半胱氨酸蛋白酶-3 表达 -
柔红霉素和Bax过表达对培养人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响
目的观察柔红霉素(DNR)和外源bax基因转染对培养人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的影响. 方法通过脂质体法将外源bax基因转入RPE细胞. 采用TUNEL荧光染色方法,观察200 μg*L-1 DNR作用12 h对正常和转基因后RPE细胞凋亡的影响;同时采用专用试剂盒,通过荧光比色法检测细胞碎片中半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的活性. 结果正常RPE细胞可见TUNEL阳性着色,经bax基因转染和DNR作用后阳性细胞比例增加,而且染色加深. 经DNR作用不同时间后,转基因RPE细胞的Caspase-3活性升高比例均大于正常细胞Caspase-3活性升高的比例(P<0.01). 结论 DNR可以诱导RPE细胞的凋亡. bax基因转染可以促进细胞的凋亡,并增加DNR诱导凋亡的敏感性.
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重组人促红细胞生成素对兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究
目的 观察重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)对心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion injury,MI/RI)兔心肌细胞凋亡及凋亡关键蛋白酶半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响,探讨rhEPO对兔MI/RI损伤的保护作用及其机制.方法 取新西兰大白兔16只,随机分为对照组(MI/RI组)和药物组(rhEPO组).结扎兔左冠状动脉前降支制备MI/RI模型.rhEPO组于结扎左冠状动脉前降支的同时注入rhEPO(1 000 U/kg),对照组注入等量的0.9％氯化钠注射液.分别于缺血前、缺血60 min、再灌注60 min和再灌注180 min检测肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)的浓度;取缺血区心肌组织,检测其凋亡指数以及凋亡关键蛋白酶Caspase-3的表达水平;制作光镜和电镜标本,观察心肌组织大体形态结构和超微组织结构.结果 血清CK-MB浓度随缺血及再灌注时间延长而增加(P＜0.01);缺血前rhEPO组与MI/RI组血清CK-MB浓度差异无统计学意义(P＞0.05);缺血60 min、再灌注60 min、再灌注180 min时,rhEPO组血清CK-MB浓度均显著低于MI/RI组(均P＜0.01).与MI/RI组相比,rhEPO组缺血区心肌细胞凋亡指数显著下降(P＜0.01),凋亡关键蛋白酶Caspase-3表达水平亦显著下降(P＜0.01).rhEPO组心肌组织细胞大体形态结构及超微组织结构损伤均较MI/RI组减轻.结论 rhEPO对兔MI/RI具有明显保护作用,其机制与稳定心肌细胞膜结构、减少心肌酶释放和抑制心肌细胞凋亡有关;rhEPO抑制心肌细胞凋亡可能通过抑制Caspase-3蛋白表达发挥作用.
关键词： 重组人促红细胞生成素 缺血再灌注损伤 细胞凋亡 半胱氨酸蛋白酶-3 兔 -
大鼠脊髓损伤后Caspase-3表达和神经细胞凋亡相关性研究
目的研究大鼠脊髓损伤后半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达变化,探讨与神经细胞凋亡发生的关系.方法建立大鼠脊髓(T8、T9)急性压迫损伤模型,损伤后4、8小时和1、2、3、7、14、21天免疫组化、半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),测定各时间点Caspase-3的表达变化;原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸(dUTP)标记法(TUNEL法)检测神经细胞的凋亡水平.结果免疫组化结果显示正常大鼠脊髓神经细胞中很少有Caspase-3表达(2.1±0.5);脊髓损伤后8小时,Caspase-3表达阳性的神经细胞明显增加,3天达到高峰(189±12.7,P<0.01),Caspase-3表达的阳性细胞与凋亡细胞出现的时限相似,呈正相关(r=0.941).RT-PCR检测到Caspase-3 mRNA 4小时开始增高,48小时达到高峰(0.634±0.028),7天后恢复正常,早于凋亡出现的时期,与神经细胞凋亡水平呈正相关(r=0.622).结论 脊髓损伤后Caspase-3表达增强,Caspase-3参与了脊髓损伤细胞凋亡的调节.
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海生多糖肽对辐射诱发小鼠肝细胞POD和Caspase-3异常表达的影响
背景与目的:探讨海生多糖肽(Haishen polysaccharide peptide,HPP)制剂对辐射引发小鼠肝细胞凋亡和凋亡基因异常表达的影响.材料与方法:将饲以150 mg/kg和100 mg/kg HPP制剂的小鼠用60Co γ射线全身亚急性照射,体内灌注固定肝组织,采用原位末端标记和原位杂交技术检测肝细胞辣根过氧化氢酶(Peroxidase,POD)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的阳性表达水平.结果:辐射损伤组POD和Caspase-3阳性表达率分别为(40.0±3.5)%和(26.0±1.2)%,高剂量海生多糖肽组分别为(23.9±3.8%)和(6.0±1.5)%,差异有统计学意义(P＜0.01)结论:海生多糖肽可抑制辐射引发的小鼠肝细胞POD和Caspase-3异常表达,抑制肝细胞损伤和凋亡.
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阿克拉霉素对HeLa细胞染色体形成及细胞凋亡的影响
目的: 探讨阿克拉霉素对HeLa细胞染色体形成的影响机制及与细胞凋亡的关系.方法: MTT方法测定阿克拉霉素对HeLa细胞的IC 50值.不同浓度阿克拉霉素作用于HeLa细胞24 h后,制备染色体,Giemsa染色,观察;应用吖啶橙和嗅乙啶双荧光染色及DNA凝胶电泳检测细胞凋亡;Western-blot分析半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)含量变化. 结果: 阿克拉霉素对HeLa细胞的IC 50值为6.83 μg / ml.染色体分析表明,阿克拉霉素作用于HeLa细胞一定时间后,染色体不规则凝集,正常M期染色体形成受阻.细胞凋亡检测可见10 μg / ml药物组与0.1 μg / ml组及对照组相比,差异显著.Western-blot分析表明,10 μg /ml药物组caspase-3表达比0.1 μg / ml组和对照组显著增加. 结论: 阿克拉霉素能够阻止HeLa细胞染色体形成与分离,导致细胞G 2 / M期阻滞,诱导细胞凋亡.caspase-3在HeLa细胞凋亡中发挥重要作用.
