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黄葵胶囊对阿霉素肾病肾组织炎症信号通路p38MAPK的干预作用
目的:阐明黄蜀葵花(Abelmoschus manihot,AM)提取物制剂——黄葵胶囊(Huangkui capsule,HKC)调节阿霉素肾病(adriamycin-induced nephropathy,ADRN)模型p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路从而改善肾组织炎症性损伤的机制.方法:将19只SD大鼠随机分为假手术组、对照组和HKC组.对HKC组和对照组大鼠行右侧肾摘除术,并在4周内分2次经颈静脉注射阿霉素(adriamycin,ADR)建立ADRN模型.HKC组大鼠于第2次注射ADR后经灌胃给予HKC悬浊液,对照组和假手术组大鼠同时经灌胃给予蒸馏水,共干预4周.在HKC和蒸馏水干预前和干预后第1,2,3,4周末,分别称量大鼠体重,并检测24 h尿蛋白排泄量(24 h urinary protein excretion,Upro).肾摘除术后第8周末处死全部大鼠,抽取血液,摘除左肾并称重,观察血清生化指标、肾小球形态特征、肾小球α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ)表达特征、肾小球巨噬细胞(macrophage,Mφ)浸润特征等,并且检测肾组织转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1,p38MAPK,磷酸化p38MAPK(phosphorylated p38MAPK,p-p38MAPK)蛋白相对表达量.结果:与对照组大鼠比较,HKC改善了模型鼠的蛋白尿和血清白蛋白(albumin,Alb),抑制了模型鼠系膜细胞(mesangial cell,MC)增殖、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)及其胶原成分沉积,减轻了肾小球α-SMA,Ⅰ型胶原表达,减轻了肾小球ED1+,ED3+浸润,下调了模型鼠肾组织TGF-β1,p-p38MAPK蛋白表达.结论:HKC在体内具有减轻肾组织炎症性损伤的作用;HKC通过下调肾组织p38MAPK信号通路中关键信号分子——p-p38MAPK的蛋白表达,干预其相关信号通路的信号转导途径,减少肾组织内TGF-β1的表达和炎症细胞的浸润、活化,从而改善肾组织的炎症性损伤.
关键词： 黄葵胶囊 阿霉素肾病 炎症信号通路 p38MAPK 磷酸化p38MAPK -
磷酸化p38MAPK在实验性自身免疫性脑脊髓炎轴索损伤中的作用
目的 观察p38MAPK在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE )中的活化及其与早期神经元轴索损伤的关系和变化规律,以及p38MAPK阻滞剂SB203580对轴索损伤的调节作用.方法 使用SJL雌性小鼠建立EAE模型,分别对模型组、SB203580组和对照组各时间点取脑和脊髓,行HE和Luxol Fast Blue(LFB)染色,并行磷酸化p38MAPK抗体染色;对相邻脑组织切片同时行淀粉样前体蛋白(APP)免疫组化检测.用图像分析系统对脑白质病灶内神经元胞浆阳性信号数目、覆盖面积及阳性信号平均密度值进行测量.结果 PLP肽段免疫的小鼠发病具有缓解-复发的特点,局部白质区域出现脱髓鞘改变.与模型组比较,SB203580组改变较轻,符合其行为学观测结果,且小鼠的体重增加明显高于模型组( P<0.01).除对照组,其余各组在各时间点均有APP蛋白表达.与模型组相比,SB203580组干预后APP蛋白表达较轻,阳性细胞数目与强度均明显下降( P<0.01);磷酸化p38MAPK在EAE小鼠免疫后第7天就有明显表达.与模型组相比,SB203580组p38MAPK表达较轻,阳性数目与强度均明显下降( P<0.01).结论 p38MAPK阻滞剂SB203580不仅能够抑制EAE中p38MAPK活化,而且可以有效下调EAE轴索损伤的标志性指标APP的表达;p38MAPK可能参与了EAE的轴索损伤过程.
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美诺环素对沙鼠脑缺血再灌注模型的神经保护作用机制研究
目的 探讨美诺环素通过抑制P38促分裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)途径在沙鼠脑缺血再灌注模型中神经保护作用机制.方法 采用夹闭双侧颈总动脉的方法 制作沙鼠脑缺血再灌注模型;在电镜下观察不同时间海马CA1区及额叶脑组织超微结构的变化;用免疫组织化学方法 检测各组沙鼠脑内磷酸化P38MAPK的表达情况.结果 ①在电镜下观察随着缺血再灌注的时间延长神经元损伤逐渐加重,美诺环素干预组明显减轻;②美诺环素干预组磷酸化P38MAPK表达趋势同缺血再灌注组,但其表达明显低于缺血再灌注组,差异有显著性(P<0.05).结论 美诺环素可能通过抑制P38促分裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)途径保护神经元.
关键词： 脑缺血再灌注 美诺环索 磷酸化p38MAPK -
染料木黄酮对3T3-L1前脂肪细胞分化的作用及其机制研究
目的 观察染料木黄酮(genistein,GEN)对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,探讨GEN抑制3T3-L1细胞分化的作用及分子机制.方法 用含1-甲基-3-异丁基黄嘌呤、地塞米松和胰岛素的培养液(MDI)诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,同时用GEN或p38抑制剂SB203580干预.作用6 d后,用油红染色实验观察脂肪形成情况;检测细胞培养液中非酯化脂肪酸(NEFA)、甘油三酯(TG)的含量;用Western blotting技术检测细胞中脂肪酸合酶(FAS)的蛋白表达.用GEN预处理30min后,用胰岛素刺激3T3-L1细胞,检测磷酸化p38MAPK(p-p38)的蛋白表达.结果 GEN可以有效抑制3T3-L1细胞的脂肪形成,降低培养液中NEFA、TG的含量.胰岛素刺激后,3T3-L1细胞中P-p38的表达迅速增强,并在5min时达到高峰,GEN可以有效降低P-p38的表达.GEN、SB203580均能降低FAS的蛋白表达.结论 染料木黄酮能有效抑制3T3-L1前脂肪细胞的脂肪分化,其机制是通过p38途径对FAS的抑制发挥作用.
关键词： 染料木黄酮 3T3-L1前脂肪细胞 脂肪分化 磷酸化p38MAPK 脂肪酸合酶 -
抑制p38MAPK通路对帕金森病模型小鼠黑质BAD和caspase-3表达的影响
目的 研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路对亚急性帕金森病(PD)模型小鼠中脑黑质Bcl-xl/Bcl-2死亡相关因子(BAD)和半胱氨酸蛋白酶3(easpase-3)的表达调控作用,探讨PD中脑黑质多巴胺(DA)能神经元进行性变性丢失的可能机制.方法 健康雄性C57BL/6N小鼠45只,随机分为3组,(1)1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)模型组:腹腔注射MPTP(30 mg/kg,溶于生理盐水),1次/d,连续5 d;(2)抑制剂组:在每次MPTP注射前1h腹腔注射SB203580(10 mg/kg,溶于5mg/ml DMSO)1次/d,连续5 d;(3)对照组:注射与模型组和抑制剂组等量的生理盐水和DMSO.观察模型小鼠行为学变化,中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)、BAD、caspase-3和磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)的表达变化,及给予p38MAPK通路特异性抑制剂SB203580对上述表达变化的影响.结果 模型小鼠出现典型的PD行为学症状,中脑黑质区TH阳性神经元和蛋白水平分别下降约60%和65%(P<001).p-p381APK、BAD和caspase-3阳性细胞数及蛋白水平显著增加(P<0.01);经p38MAPK特异性抑制剂SB203580处理后,PD小鼠行为学症状改善,TH阳性神经元和蛋白水平下降程度明显减轻;中脑黑质BAD、caspase-3和p-p38NAPK阳性细胞数显著减少,蛋白水平下降明显(P<0.01).结论 p38MAPK通路在亚急性PD模型小鼠黑质BAD和caspase-3表达中可能有重要调控作用,p38MAPK通路特异性抑制剂SB203580对PD小鼠具有一定的神经保护作用.
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丹参酮ⅡA对脑缺血再灌注损伤大鼠磷酸化p38MAPK和MMP-9表达及细胞凋亡的影响
目的 探讨丹参酮ⅡA(Tanshinone,TanⅡA)对缺血再灌注(IR)损伤大鼠细胞凋亡和血脑屏障通透性的影响及与p38MAPK通路的关系.方法 60只大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)、TanⅡA低剂量治疗组、TanⅡA高剂量治疗组,线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型.TanⅡA高、低剂量组于术前连续灌胃给予高、低剂量TanⅡA3d,每日1次.各组于脑缺血120min再灌注24h,采用免疫组化法观察大鼠额顶部皮质磷酸化p38 MAPK和MMP-9表达；TUNEL法检测神经细胞凋亡,检测伊文斯蓝(EB)含量变化.结果 (1)与Sham组相比,IR组磷酸化p38MAPK和MMP-9明显升高(P＜0.05)；与IR组比较,TanⅡA高、低剂量治疗组磷酸化p38MAPK和MMP-9表达均降低,且高TanⅡA组明显低于低TanⅡA组(P均＜0.05)；(2)与Sham组相比,IR组凋亡细胞明显增加；与IR组比较,TanⅡA高、低剂量治疗组凋亡细胞均减少,且高TanⅡA组明显低于低TanⅡA组(P均＜0.05).(3)与Sham组比较,IR组脑组织EB含量明显升高；与IR组比较,TanⅡA高、低剂量治疗组脑组织EB含量明显降低(P＜0.05),且高TanⅡA组明显低于低TanⅡA组(P均＜0.05).结论 TanⅡA减少脑缺血再灌注后细胞凋亡,抑制MMP-9表达降低血脑屏障通透性,可能与抑制p38 MAPK信号通路有关.
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毛细支气管炎磷酸化p38MAPK水平及与MCP-4的相关性
目的 观察毛细支气管炎患儿血清、鼻咽分泌物(NPS)中磷酸化p38MAPK(P-p38MAPK)水平与单核细胞趋化蛋白4(MCP-4)的相关性,探讨P-p38MAPK的临床意义.方法 毛细支气管炎患儿31例为观察组及同期体检健康儿童30例为对照组,毛细支气管炎急性期、恢复期分别抽取NPS标本,采用酶联免疫吸附法测定血清、NPS中P-p38MAPK、MCP-4含量.结果 在急性期毛细支气管炎患儿血清P-p38MAPK、MCP-4含量与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);中、重度组血清P-p38MAPK、MCP-4含量与轻度组比较差异均有统计学意义(P<0.01);毛细支气管炎患儿急性期NPS中P-p38MAPK、MCP-4含量与恢复期比较差异均有统计学意义(P<0.01).毛细支气管炎患儿血清中P-p38MAPK含量与MCP-4含量呈显著正相关(r=0.609,P<0.01,n=31).毛细支气管炎患儿急性期NPS中P-p38MAPK含量与MCP-4含量呈显著正相关(r=0.742,P<0.01,n=30).结论 毛细支气管炎患儿急性期血清、NPS中存在p38MAPK活化增加,并与MCP-4密切相关,提示p38MAPK通路参与调节毛细支气管炎的气道炎症.
关键词： 毛细支气管炎 磷酸化p38MAPK 单核细胞趋化蛋白4 -
雷公藤氯内酯醇对大鼠海马背侧注射Aβ25-35后胶质细胞及p38MAPK激活的抑制作用
目的 探讨雷公藤氯内酯醇(T4)对海马背侧注射Aβ25-35后模型大鼠神经元损伤的保护作用及可能机制.方法 通过Nissl和TUNEL染色法检测阳性神经元数量,采用免疫组化、蛋白印迹法观察ox-42、GFAP和p-p38MAPK的表达;ELISA法检测TNF-α、IL-1β的含量.结果 T4干预后(7 d),ox-42、GFAP、p-p38MAPK的表达减弱,Nissl阳性神经元增多,TUNEL阳性神经元减少,TNF-α、IL-1β的含量降低.结论 T4保护注射Aβ25-35后大鼠海马神经元损伤的机制可能与抑制小胶质细胞、星形胶质细胞和p38MAPK的激活有关.
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P38通路对帕金森病小鼠模型黑质环氧合酶-2、半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响
目的 研究P38MAPK通路在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)所致亚急性帕金森病(PD)小鼠模型中对黑质环氧合酶-2(COX-2)、半胱氨酸蛋向酶-3(caspase-3)表达调控作用.方法 采用MPTP制备PD小鼠模型,观察行为学、免疫组化和免疫蛋白印记法观察小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)、COX-2、caspase-3和磷酸化P38MAPK(P-P38MAPK)的变化,及给予P38MAPK抑制剂SB203580后对上述变化的影响.结果 模型7 d组小鼠出现典型的PD样症状,黑质区TH阳性神经元和蛋白水平分别下降约65%和75%(P<0.01);模型3 d组小鼠黑质区COX-2、P-P38MAPK、caspase-3阳性细胞数及蛋白水平显著增加.TH阳性神经元明显丢失;经P38MAPK抑制剂SB203580处理后,上述变化均显著减轻(P<0.01).结论 在MPTP所致亚急性小鼠PD模型中,P38MAPK通路对黑质区炎症与凋亡可能有重要调控作用,SB203580对PD小鼠具有一定神经保护作用.
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吗啡耐受大鼠背根神经节磷酸化p38 MAPK的表达
[目的]观察蛛网膜下腔(鞘内)慢性注射吗啡是否激活背根神经节(DRG)神经元,使其p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38 MAPK)磷酸化水平发生改变.[方法]通过对成年雄性SD大鼠连续7 d鞘内注射吗啡15μg而建立吗啡耐受的动物模型,或连续7 d在吗啡注射前30 min预先鞘内注射p38 MAPK抑制剂SB203580 10μg,用50℃热水甩尾法观察吗啡的镇痛效果,并用免疫组织化学法观察DRG磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)的表达变化.[结果]慢性鞘内注射吗啡7 d后,吗啡镇痛作用明显下降(P<0.001).吗啡耐受形成;而SB203580预处理可明显抑制吗啡耐受的形成(P<0.001);免疫组织化学染色显示脊髓DRG p-p38 MAPK表达明显上调(P<0.01),且以小、中型神经元增加为主.[结论]鞘内慢性注射吗啡可激活脊髓DRG小型和中型神经元,使其p38 MAPK磷酸化水平增加,这可能是吗啡耐受的机制之一.
关键词： 吗啡耐受 背根神经节 磷酸化p38MAPK 大鼠 -
前列腺炎大鼠脊髓胶质细胞活化与兴奋性氨基酸的关系
目的:观察SB203580鞘内注射前列腺炎模型大鼠脊髓磷酸化p38MAPK(p-p38)表达、胶质细胞活化及兴奋性氨基酸(EAAs)的变化.方法:45只SPF雄性大鼠完全随机分为正常组5只,前列腺炎组10只和前列腺炎SB203580鞘内注射镇痛组30只(镇痛组).镇痛组前列腺注射完全弗氏佐剂(CFA)和脊髓鞘内给药(SB203580)制作大鼠前列腺炎镇痛模型,SB203580剂量分别为0.5、2.5、12.5 μg/10 μl,观察时间为术后第5 d和10 d,每组每观察点5只大鼠.分别用Western blot和ELISA法检测各组大鼠L5～S2脊髓背角组织p-p38及神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)含量,氨基酸分析仪测量谷氨酸(Glu)和天门冬氨酸(Asp)的变化.结果:前列腺炎组大鼠L5～S2脊髓背角中p-p38、GFAP、Glu和Asp随时间显著增高,镇痛组p-p38、GFAP、Glu和Asp显著降低.GFAP与Glu及和Asp均为正相关关系(r=0.457,P=0.0016和r=0.498,P=0.0005).结论:胶质细胞活化是慢性前列腺炎疼痛大鼠脊髓背角EAAs变化的重要原因,阻断p38MAPK信号通路可有效降低胶质细胞活化程度及EAAs水平.
关键词： 前列腺炎 脊髓 胶质细胞 兴奋性氨基酸 磷酸化p38MAPK -
p38MAPK通路参与亚急性帕金森病模型小鼠黑质iNOS表达的调控
目的:研究1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致Parkinson病(PD)小鼠模型黑质p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路对诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide,iN-OS)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达调控,以探讨PD多巴胺能神经元丢失的可能机制.方法:采用MPTP制备PD小鼠模型,观察行为学变化;采用免疫组化和免疫蛋白印迹法,观察黑质区酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)、iNOS、caspase-3和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)阳性细胞数和蛋白表达水平变化及给予p38MAPK特异性抑制剂SB203580后对上述变化的影响.结果:模型Ⅱ组TH阳性神经元明显丢失,小鼠出现典型的PD样行为学表现;模型Ⅰ组小鼠黑质区p-p38MAPK、iNOS、caspase-3阳性细胞数及蛋白水平显著增加.经SB203580处理后,上述变化明显减轻(P<0.01).结论:p38MAPK通路对PD模型小鼠黑质区细胞凋亡可能起重要的调控作用,抑制该通路具有一定神经保护作用.
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磷酸化ERK,p38MAPK在婴幼儿血管瘤组织中的表达及意义
目的:探讨磷酸化ERK和p38MAPK信号通路在小儿血管瘤增生、消退中的作用.方法 应用免疫组化SP法检测47例血管瘤（增殖期26例、消退期21例）组织中磷酸化ERK和p38MAPK的表达情况.结果 磷酸化ERK阳性定位于细胞核,其在增殖期和消退期的阳性细胞指数分别为(67.71±12.68)％和(21.54±6.85)％；磷酸化p38MAPK阳性定位于细胞核,其在增殖期和消退期的阳性细胞指数分别为(83.78±5.25)％和(57.79±7.63)％；增生期磷酸化ERK与p38MAPK阳性表达呈正相关,而消退期呈负相关.结论 磷酸化ERK和p38MAPK参与血管瘤的增生、消退过程；ERK通路可介导内皮细胞的增生和存活,而p38MAPK可能主要在消退期传递内、外源性凋亡信号,诱导内皮细胞凋亡.
关键词： 血管瘤 婴幼儿 磷酸化ERK 磷酸化p38MAPK 免疫组化
