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热处理后HeLa细胞张力原纤维在不同时间段的变化比较
高温热疗能导致细胞骨架解聚、变短[1],而停止热疗后,又可以在一定程度上重新装配、再聚而延长[2,3],这是由细胞骨架的独特特性所决定的[4].其再聚又因加热的温度、时间和细胞种类等的不同而不一致,各种细胞骨架成分的恢复情况也不尽相同,显示它们具有不同的热敏感性.热疗后细胞骨架的变化和细胞内部的各种变化密切相关[2],细胞骨架的重排也是凋亡的一个必须过程[5].
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转染Bax基因提高BcaCD885颊癌细胞热敏感性的研究
目的:探讨Bax基因对BcaCD885颊癌细胞热敏感性的影响.方法:采用脂质体Lipofectamine 2000转染人Bax-α基因重组质粒pORF-hBax-α于人颊癌细胞株BcaCD885细胞中,再对细胞进行43 ℃ 40 min水浴加温处理,用流式细胞仪检测BcaCD885细胞的凋亡率及Bax蛋白的表达水平;用RT-PCR技术检测BcaCD885细胞的Bax mRNA的表达水平.结果:Lipofectamine 2000能将人Bax-α基因重组质粒pORF-hBax-α导入BcaCD885颊癌细胞中,Bax-α基因重组质粒pORF-hBax-α能在BcaCD885颊癌细胞中表达,提高BcaCD885颊癌细胞内Bax 蛋白质及mRNA的水平,促进热诱导BcaCD885颊癌细胞凋亡的发生.结论:转染Bax基因于BcaCD885颊癌细胞内,能提高细胞对热杀伤的敏感性.
关键词： bax基因 BcaCD885细胞 热敏感性 -
阻断内源性bcl-2蛋白表达提高BcaCD885颊癌细胞热敏感性的研究
目的:探讨与bcl-2翻译起始部位碱基互补的反义bcl-2寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN)对BcaCD885颊癌细胞热敏感性的影响.方法:以脂质体Lepofectin为载体,转染20μM 反义bcl-2 ODN于BcaCD885细胞内, 阻断内源性bcl-2蛋白表达,再以43℃ 40min加热后,以流式细胞术-抗体及DNA分析对bcl-2蛋白、bax蛋白和细胞凋亡进行检测.结果:反义bcl-2 ODN阻断BcaCD885细胞内源性bcl-2蛋白表达后,bax/bcl-2升高,细胞凋亡率明显提高.结论:阻断BcaCD885细胞内源性bcl-2蛋白表达能提高其热敏感性.
关键词： 反义寡脱氧核苷酸 Bcl-2基因 BcaCD885细胞 热敏感性 -
人良性脑膜瘤细胞热敏感性的实验研究
目的 探讨人良性脑膜瘤细胞的热敏感性及其机制.方法 15例人脑膜瘤原代培养细胞进行温水加热体外实验.采用Western blot法检测HSFl蛋白表达;免疫组织化学法检测HSF1、HSP27、HSP70和HSP90蛋白表达;MTT法检测细胞增殖抑制率、TUNNEL法检测细胞凋亡率.结果 15例人良性脑膜瘤在44℃温水加热60 min后细胞增殖抑制卒仅为(8.33±0.18)%,凋亡率(%)为(2.4±0.16)%.温水加热后,人脑膜瘤增殖能力没有受到抑制,没有诱导细胞凋亡或细胞坏死(P＞0.05).在热刺激下,HSFI蛋白发生活化,由单体(80kD)转化为三聚体(260kD).加热后6h出现HSP27、HSP70与HSP90表达明显增加,持续24h高表达,显著高于加热前对照组(P＜0.05).结论 人脑膜瘤热敏感性低,单纯温水加热(42～44℃)无抑制细胞增殖和增加细胞凋亡的作用.其机制可能是在加热刺激下,人脑膜瘤细胞HSF1蛋白发生三聚体活化,诱导型HSP27、HSP70和HSP90在加热后24 h内持续高表达.保护和修复了热损伤的人脑膜瘤细胞.
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多发性硬化新药:Ampyra
多发性硬化是一种慢性致残性自身免疫性疾病.据国际多发性硬化学会统计显示,在全世界范围内有超过250万人被诊断罹患此病,其中仅美国就有40万患者深受其害.多发性硬化症的临床表现主要包括进行性行走困难,容易疲劳,身体协调性丧失以及视力、记忆力的下降,并伴有热敏感性.
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硫代反义Bcl-xL寡脱氧核苷酸对BcaCD885颊癌细胞凋亡及热敏感性的影响
目的探讨硫代反义Bcl-xL寡脱氧核苷酸(AS-sODN)对BcaCD885颊癌细胞凋亡及热敏感性的影响.方法以脂质体Lipofectin为载体,转染AS-sODN于BcaCD885细胞内,倒置显微镜观察细胞形态学改变,TUNEL原位末端标记检测细胞凋亡,流式细胞技术(FCM)测定细胞凋亡率及Bcl-xL蛋白表达水平;转染AS-sODN于BcaCD885细胞内,再以43 ℃,40 min加热细胞,FCM检测细胞凋亡率.结果AS-sODN转染后,BcaCD885颊癌细胞出现皱缩、呈浮起状,TUNEL原位末端标记阳性,Bcl-xL蛋白表达明显下降(P<0.05),热诱导细胞凋亡率明显提高(P<0.05).结论硫代反义Bcl-xL 寡脱氧核苷酸能诱导BcaCD885颊癌细胞凋亡并能提高其热敏感性.
关键词： 反义寡脱氧核苷酸 Bcl-xl BcaCD885细胞 凋亡 热敏感性 -
脊髓辣椒素受体1(VR1)参与热敏感性的证据:老龄大鼠行为学和形态学相结合观察结果
以往的研究表明外周热伤害性感受器辣椒素受体1(VR1,也称为TRPV1)在热伤害性感觉中发挥着重要作用,但是脊髓VR1在其中扮演的角色尚不清楚.因此本实验利用老龄大鼠蜜蜂毒(BV)模型热痛敏(仅持续24 h)和机械性痛敏(持续1月以上)时程分离的行为学特点研究了在老龄大鼠中脊髓VR1在外周组织损伤和炎性痛状态下的热敏感性中扮演的角色.在BV注射后4 h(即热痛敏和机械性痛敏均存在时)、2周(即热痛敏消失而机械性痛敏存在时)和2月(即两种痛敏均消失时),验证了热敏感性(辐射热刺激)和机械敏感性(von-Frey纤维刺激),随后进行脊髓背角的VR1免疫组织化学染色.结果如下:(1)在未处理老龄大鼠组,VR1样免疫反应产物(LI)在脊髓背角主要分布于Ⅰ、Ⅱ层;(2)在经BV处理老龄大鼠组,外周损伤后4 h脊髓背角VR1-LI有轻微增加,但在2周后VR1-LI表达水平明显低于对照水平,而且在BV注射2月后,即两种痛敏均消失时,VR1-LI表达水平下调仍非常明显.本结果表明脊髓背角的VR1在空间分布上不随年龄改变而改变,但在周围化学组织损伤或炎症状态下,VR1-LI的表达水平可能与热敏感性的变化有动态相关性.由此我们提出除了外周位点,脊髓背角的VR1也可能参与了热痛阈水平的维持和热痛敏的产生.
