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超敏CRP单克隆抗体制备及其ELISA体系的初步建立
目的 获得CRP特异性单克隆抗体并建立能够检测超敏CRP(hs-CRP)的双抗体夹心ELISA免疫定量检测方法.方法 从NCBI核酸数据库中获得人CRP编码序列并进行密码子偏嗜性改造,利用E.coli表达系统表达CRP重组蛋白.用pET22b-CRP重组质粒表达的CRP重组蛋白(rhCRP-22b)作为免疫原免疫Balb/c小鼠并通过杂交瘤技术制备CRP特异性单克隆抗体,鉴定并筛选能够建立双抗体夹心ELISA系统的抗体配对.以pET28a-CRP重组质粒表达的CRP重组蛋白(rhCRP-28a)作为标准品,对该系统线性范围、灵敏度、精密度和准确度(回收试验)进行分析和评价.结果 获得5株CRP单克隆抗体,筛选得到2株单克隆抗体可用于hs-CRP的ELISA免疫检测.通过鉴定2株抗体具有良好的效价和特异性.ELISA检测系统线性范围为0～166 ng/ml,灵敏度为5.2 ng/ml,批内CV≤6.43％,批间CV≤5.93％,平均回收率为98.9％,与Orion公司hs-CRP诊断试剂检测结果有良好的可比性.结论 本研究制备了高效特异的CRP单克隆抗体并建立了能够检测hs-CRP的双抗体夹心ELISA方法,该方法灵敏度、精密度和准确性良好,能够达到hs-CRP的检测要求,为进一步研发和建立具有自主知识产权的免疫检测试剂盒及其他检测方法体系奠定了良好的基础.
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<中国普外基础与临床杂志>随机对照临床试验文献方法学评价
目的:通过检索<中国普外基础与临床杂志>中所有临床随机对照试验论文,了解目前普外医师临床科研设计的方法学现状.方法:对<中国普外基础与临床杂志>1994年(创刊)-2000年中发表的临床研究文献进行逐页手检,严格筛选RCT和CCT,并对之进行评价.结果:在七卷32期中共刊登临床研究论文252篇,其中RCT和CCT共22篇(8.7%).RCT/CCT文章1999年以后明显多于1999年以前.结论:<中国普外基础与临床杂志>刊登的临床研究论文中RCT/CCT文章日益增多,说明普外医师的临床研究,已开始从经验医学向循证医学转变.
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《中国疼痛学杂志》随机对照临床试验文献评价
目的：了解我国疼痛治疗临床科研状况。方法：手检1995(创刊)～1999年中国疼痛学杂志，对中国疼痛学杂志中的临床研究论文进行分类及评价。结果：5卷17期共载临床研究论文220篇，其中随机对照试验83篇(37.7%)。结论：疼痛治疗领域临床研究数量较少，RCT质量仍有待进一步提高。
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糖尿病及其并发症治疗随机对照试验文献方法学评价
目的:评价国内医学文献中有关糖尿病及其并发症(以下简称糖尿病)治疗研究随机对照试验(RCT)的质量,为改变和提高临床治疗试验的水平提供依据.方法:选择国内6种糖尿病核心期刊:用手工检索调查1995-1999年间发表的糖尿病治疗的RCT数共30卷250期,各杂志发表的RCT数分别为:中华内分泌杂志18篇;中华内科杂志5篇;中国糖尿病杂志19篇;中国新药与临床杂志4篇;中国中西医结合杂志35篇;中国中西医实用临床急救13篇.发表的RCT年代分布为:1995-1997年49篇,1998-1999年45篇.调查内容包括研究对象选择、随机化方法、盲法、组间可比性、样本大小、依从性、统计学处理、疗效评价指标、副反应观察及随访等.结果:6种杂志5年发表的糖尿病治疗RCT共计94篇.调查表明,选择研究对象有明确的纳入标准的有52篇占55.3%,有排除标准的有22篇占23.4%.仅有9篇RCT交待了随机分组的方法,没有1篇交待随机方案隐藏,盲法试验有9篇(9.6%),其中双盲为5篇(5.3%);80%采用药物对照;17篇采用空白对照(18.10%);2篇采用安慰剂作对照(2%).治疗组平均样本含量为32.3±1(11-669)例;对照组平均样本含量为28.7±1.05(6-707)例.57.45%有组间可比性,仅1篇RCT交待了对治疗组的依从性.93篇RCT有统计学处理.处理方法多为X2、t检验.临床疗效判断以生化指标、症状、体征为主.43%报告了治疗的毒副作用和不良反应.几乎未有交待随访观察.结论:国内几年来开展的糖尿病及其并发症治疗的RCT数量的不断增多,多为中、小样本试验,鲜见多中心、大样本试验研究.RCT质量仍待提高,安慰剂和盲法采用均较少,随机分组方法需严格执行,以避免假随机和半随机,在研究对象和疗效指标选择上还有待改进,应提倡严格科学设计的多中心、大样本前瞻性的长期协作研究,逐步与国际接轨.
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我国麻醉领域随机对照试验文献方法学评价
目的:为提高临床麻醉科研设计水平,对中国有关麻醉的临床研究状况进行初步调查.方法:选择国内2种麻醉领域核心期刊中华麻醉学杂志、临床麻醉学杂志,用手工检索调查1994～1998年间临床研究论文.结果:84期共载临床研究论文2528篇,RCT650篇(占25.7%).采用盲法29篇(占4.46%),392篇(60.3%)比较组间可比性,对试验结果进行统计学处理共387篇(占59.5%),其中119篇(占30.7%)统计方法有错.结论:国内近年来临床麻醉领域RCT数量不断增多,以中、小样本试验为主,盲法采用率较低.RCT质量仍有待提高.
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病毒性肝炎治疗随机对照试验文献方法学评价
目的:评价国内医学文献中有关病毒性肝炎(以下简称为肝炎)治疗研究随机对照试验(RCT)的质量,为改进和提高临床治疗试验的水平提供依据.方法:选择国内9种肝脏病核心期刊,用手工检索调查1990～1998年间发表的肝炎治疗的RCT数共77卷542期,各杂志发表的RCT数分别为:中华肝脏病杂志20篇、中华传染病杂志13篇、中华内科杂志6篇、中华实验和临床病毒学杂志6篇、中华消化杂志4篇、临床肝胆病杂志18篇、中国中西医结合杂志47篇、中医杂志8篇、中西医结合肝病杂志77篇.发表的RCT年代分布为:1990～1992年25篇,1993～1995年64篇,1996～1998年110篇.调查内容包括研究对象选择、随机化方法、盲法、组间可比性、样本大小、依从性、统计学处理、疗效评价指标、副反应观察及随访等.结果:9种杂志9年发表的肝炎治疗RCT共计199篇.调查表明,选择研究对象有明确的纳入标准的有119篇占59.8%,有排除标准的有19篇,占9.5%;有肝穿刺活检病理诊断者占19.6%.仅17篇 RCT交待了随机分组的方法,3篇有随机方案隐藏,盲法试验有9篇(4.5%);94.5%采用药物对照,5.0%采用安慰剂对照.治疗组平均样本含量为51.8±52.2(7～647)例,对照组为46.3±39.9(5～360)例.86.9%试验有组间可比性比较.15篇RCT交待了对治疗组的依从性.194篇RCT有统计学处理,处理方法主要是χ2、t检验.临床疗效判断以生化指标、病毒学标志、症状、体征为主.45.7%报告了治疗的毒副作用和不良反应.随访观察者占29.1%.结论:国内近年来开展的肝炎RCT数量不断增多,以中、小样本试验为主,少有多中心、大规模协作研究.RCT质量仍有待提高,安慰剂和盲法采用率较低,随机分组方法需严格执行,以避免假随机和半随机,在研究对象和疗效指标选择上还有待改进,应提倡严格科学设计的多中心、大样本前瞻性的长期协作研究,并与国际接轨.
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针灸治疗老年性痴呆临床随机对照试验方法学评价
目的:评价国内针灸治疗老年性痴呆临床随机对照试验(RCT)的质量,为改进和提高临床治疗水平提供依据.方法:依据中国医学生物资料库(CMB)中"针灸"与"痴呆"的结合主题词查找到65篇文章;手工检索了7种中医核心杂志1990～1998年间所发表的文章,检索到9篇文章;从已查找到的文章的参考文献处查到6篇文章.依据防治性研究的临床对照试验原则,查找到符合RCT标准的文章19篇,进行分析评价.结果:近年发表的针灸治疗老年性痴呆RCT共计19篇,占所有针灸研究痴呆文章的25%.其中15篇有明确的诊断纳入标准,4篇有明确的排除标准;4篇论文中描述了具体的随机分组方法;8篇文章描述有组间可比性的统计学分析;无一篇述及盲法的运用;临床疗效判定均以各种积分量表评定,以总有效率表示;结果均作统计学处理,处理方法主要是t检验.结论:近年来老年性痴呆的针灸RCT数量不断增加,但RCT质量需待提高,应努力提倡有资金资助的大样本前瞻性的长期的协作性研究.
关键词： 针灸 老年性痴呆 临床防治随机对照试验 方法学评价 -
脲酶-亮氨酸脱氢酶偶联法测定尿素的方法学评价
目的对脲酶-亮氨酸脱氢酶偶联法测定尿素方法学进行系统评价.方法通过线性试验、灵敏度试验、精密度试验、回收试验、干扰试验及方法学比较试验来分析.结果线性范围为0.32～46.20mmol/L;批内和日间CV%分别为1.8%和3.2%;平均回收率为97.1%;胆红素≤400μmol/L、血红蛋白≤6.6g/L、NH4+≤6.5mmol/L对测定无明显干扰;本方法(y)和脲酶-谷氨酸脱氢酶偶联法(x)对比相关性良好(y=1.0834x-0.5382,R2=0.999).结论该方法抗内源性氨干扰的能力强于脲酶-谷氨酸脱氢酶偶联法,为一种值得推广、简单、快速、准确、精密、线性范围宽,可应用于全自动分析仪的新方法.
关键词： 尿素 脲酶-亮氨酸脱氢酶偶联法 方法学评价 -
全自动酶联免疫分析系统的临床应用评价
目的评价酶联免疫自动化的临床应用价值.方法使用全自动酶联免疫分析系统、普通酶标仪及洗板机分别对130份质控标本和低值弱阳性标本进行HBsAg检测,比较全自动法、普通比色法和手工法的检测速度和检测质量.结果全自动酶联免疫分析系统能明显加快实验速度(比普通比色法加快16分钟),提高显色强度(与普通比色法相比,0.5ng/mL的标本OD值从0.139增加到0.149,P＜0.05),消除边缘效应,检测的灵敏度和特异性等方法学评价指标均有不同程度的提高(与普通比色法相比,符合率从98.5%提高到100%),多数评价指标优于普通比色法和手工法.结论全自动酶联免疫分析系统不但能降低劳动强度,提高劳动效率,而且能明显提高检测质量.酶联免疫吸附试验的自动化是现代化实验室发展的主要趋势之一.
关键词： 酶联免疫吸附试验(ELISA) 自动化 方法学评价 质量 -
新生血管抑制剂VEGFR2-Fc的检测方法建立与方法学验证
目的 建立重组人血管内皮生长因子受体Fc融合蛋白(VEGFR2-Fc)血药浓度的检测方法并进行验证,为该药物的动力学研究提供方法学.方法 以羊抗人IgG-Fc作为捕获抗体,以生物素标记羊抗人VEGF R2为检测抗体,建立双抗夹心的BA-ELISA检测方法,并开展方法学试验.结果 标准品的线性范围为28～0.4375ng/ml,相关系数达到0.999;质控浓度(20ng/ml、10ng/ml和5ng/ml)的回收率分别为103.159%、116.092%和102.528%,板内和板间精密度分别是8.87%、3.27%、15.41%和12.38%、7.97%、16.74%;灵敏度为0.25ng/ml.结论 建立的BA-ELISA检测VEGFR2-Fc方法符合生物技术药物的方法学标准,可以用于体内药代动力学研究的分析方法.
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反向溶出极谱法检测尿碘的方法学评价
目的:参照CLSI推荐的标准化评价方案对反向溶出极谱法检测尿碘进行方法学评价.方法:对反向溶出极谱法检测尿碘的精密度、准确度、线性范围分析,并比较与硫酸铵消化—砷铈催化分光光度法的相关性.结果:方法具有良好的精密度(批内、批间、日间、总变异系数均＜10％)、准确度(回收率90.9％～104.9％、平均回收率98.1％);线性范围45～850 μg/L;与硫酸铵消化—砷铈催化分光光度法的相关性良好(r=0.988).结论:反向溶出极谱法检测尿碘具有重复性好、准确度高、线性范围宽,与砷铈催化分光光度法有良好的相关性,操作简便,适合于各级基层医院使用.
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流式细胞仪检测结缔组织生长因子的方法学评价
目的:评价FACSArray流式细胞仪检测血清结缔组织生长因子(CTGF)的方法学性能.方法:用流式细胞仪测定血清高低浓度CTGF,计算两种浓度的批内变异系数、批间变异系数及相对偏差评价仪器的精密度、准确度及分析灵敏度,采用美国临床和实验室标准协会(CLSL)的有关要求进行评价;计算在校准品中加入聚苯乙烯微球、高浓度的甘油三酯(17 mmoL/L)、血红蛋白(12 g/L)、胆红素(170 umoL/L)或低浓度的甘油三酯(0.76 mmol/L)、血红蛋白(0.5 g/L)和胆红素(1.7 umol/L)干扰物对CTGF测定时的干扰率,对仪器分析性能进行验证和评价.结果:CTGF的高低两个浓度的批内变异系数分别为2.96％和3.75％,高低两个浓度的批间变异系数分别为9.02％和8.78％,CTGF的高低两个浓度的相对偏差分别为2.23％和1.85％,检测灵敏度为14.91 ng/L,均达到CLSL的有关要求;聚苯乙烯微球,高浓度的甘油三酯、血红蛋白及胆红素十扰物对CTGF测定时的干扰率分别为3.98％、12.76％、11.35％及11.14％,对检测有一定的干扰;低浓度的甘油三酯、血红蛋白及胆红素干扰物对CTGF测定时的干扰率分别为4.45％、3.49％和2.94％,对检测干扰相对于高值干扰物较小.结论:FACSArray流式细胞仪检测系统检测血清CTGF的性能指标可满足实验室认可的需求;高浓度的甘油三酯、血红蛋白和胆红素对CTGF的测定有一定干扰作用.
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流式细胞术检测VCAM-1的方法学性能评价
目的对流式细胞术（FCM）检测血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）进行方法学性能评价。方法参考美国临床和实验室标准化协会（CLSI）系列文件,结合工作实际,设计验证方案,对BDAria流式细胞仪检测系统测定血浆VCAM-1的精密度、准确度、分析灵敏度、分析测量范围和生物可参考区间5大分析性能进行验证和评价,并将实验结果与厂家（美国BD公司）提供的分析性能或公认的质量指标进行比较。结果 VCAM-1含量在39.06和10 000.00 ng/L时,批内变异系数分别为4.28%和7.97%,批间变异系数分别为4.76%和10.32%,准确度相对偏倚分别为4.72%和6.52%;检测灵敏度为5.84 ng/L,分析测量范围为5.84-762 590.00 ng/L,生物参考区间验证为4 765.00 ng/L-15 725.00 ng/L。结论 BD Aria流式细胞仪检测系统检测血浆VEGF的分析性能符合厂家提供的性能指标和公认的质量指标。
关键词： 流式细胞术 方法学评价 血管细胞黏附分子-1 -
仪器测量尿汞的方法学评价
汞及其化合物作为一种常用工业金属材料具有广泛的使用范围，汞在常温条件下即能蒸发，其蒸汽易经呼吸道进入人体产生毒性作用，主要通过肾脏由尿液排泄。因此，尿液中汞含量测定结果，是诊断职业性汞中毒重要的生物学评价指标。我单位采用酸性氯化亚锡还原法［1］，检测前需加酸消解样品后用冷原子吸收测汞仪测定；而DM A‐80直接测汞仪，目前还没有该仪器测定尿汞的国家卫生行业标准方法。两种仪器的测定结果有无差异未见文献报道。本研究对仪器测定结果进行方法学评价找出准确、高效、简便、省时的方法，满足大批量样品的检测需求。
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化学发光免疫法检测BNP的分析测量范围和临床可报告范围研究
目的 研究化学发光免疫法检测B型钠尿肽(BNP)的分析测量范围(AMR)和临床可报告范围(CRR).方法 参照美国临床和实验室标准化研究院(CLSI)发布的EP6-A文件要求制备实验样品,每个样品在西门子ADVIA Centaur化学发光免疫分析系统上重复测定2次,利用多项式回归法确定BNP的分析测量范围;通过稀释回收试验确定大稀释度,结合功能灵敏度和分析测量范围上限确定临床可报告范围.结果 ADVIA Centaur化学发光免疫分析系统的分析测量范围为2.0～5 094 pg/ml,临床可报告范围为2.5～10 188 pg/ml.结论 厂商声明的ADVIA Centaur化学发光免疫系统检测BNP的分析测量范围得到验证确认,但对于超过分析测量范围的高值标本建议用生理盐水做1∶2稀释.
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谷丙转氨酶37℃参考方法的建立及其应用研究
目的 通过建立37℃谷丙转氨酶(ALT)参考方法,对酶校准品定值,探讨血清ALT测定结果的准确性与可比性.方法 依据国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)推荐的参考测量程序建立ALT酶催化活性参考方法,用参考方法测定ERM(R)-AD 454 ALT参考品,验证参考方法的准确度,并对其精密度、线性范围和干扰因素进行方法学评价,同时用参考方法对制备的酶校准品进行准确定值,按照NCCLS EP9-A方案比较40份人血清用酶校准品校正的常规方法和参考方法ALT结果.结果 用参考方法测定ERM(R)-AD 454 ALT参考品结果186.4 U/L,在其给定的186±4U/L范围内.初步建立的37℃ALT参考方法总CV 0.89%～1.12%,线性范围1.3～300 U/L.ALT测定结果在32U/L左右偏差超过5%的干扰物浓度分别为游离胆红素205.2,μmol/L、结合胆红素136.8,μmol/L;ALT在123U/L左右洲定结果偏差超过5%的干扰物浓度分别为游离胆红素256.5μmol/L、结合胆红素273.6μmol/L.血红蛋白在2g/L和三酰甘油在10mmol/L以下时对两种浓度的ALT干扰分别均大于5%和仍然小于5%.用制备的酶校准品校准的常规方法和参考方法进行比较,相关良好(r2=0.999 2).前者结果与后者相对偏倚在±10%之内.结论 ALT参考方法基本建立,采用参考方法为酶校准品定值,可以提高血清ALT测定结果的准确度扣可比性.
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手持式血酮体分析仪的临床评价
目的 对T-1型国产手持式血酮体分析仪进行临床评价.方法 采用标准电阻条、标准β-羟丁酸(β-HB)溶液与新鲜静脉抗凝全血/指血系统评价仪器的准确度、精密度、可报告范围,并与常规生化分析仪的酶法进行方法学比较试验以及确定参考范围.结果 标准电阻测量结果的偏差均小于5%,4个不同水平的全血β-HB标本回收率为92.4%～96.3%;精密度试验:低高2个水平全血标本检测结果CV分别为9.90%和3.61%;检测系统可报告范围为0.30～5.77 mmol/L;三个批号试条的批间差为5.1%;该法与酶动力学法结果之间具有良好的相关性(r=0.992 6);该系统测试健康人群末梢全血乳酸参考范围＜0.30 mmol/L.结论 T-1型国产手持式血酮体分析仪进行全血酮体检测具有简便、快速、准确、重复性好等特点,与自动生化分析仪的酶法测定结果具有良好的相关性,各项性能指标均达到临床应用要求.
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手持式全血乳酸分析仪的临床评价
目的对H-1型国产手持式全血乳酸分析仪进行临床评价.方法采用标准电阻条、标准乳酸锂溶液与新鲜静脉抗凝全血/指血系统评价仪器的准确度、精密度、可报告范围,并与常规生化分析仪的酶法进行方法学比较试验以及确定参考范围.结果标准电阻测量结果的偏差均小于5%;高、中、低3个水平的乳酸回收率为88.5%～90.5%;精密度试验:低、高两个乳酸水平的变异系数分别为7.0%,5.4%;检测系统可报告范围为0.5～17.5 mmol/L;三个批号试条的批间差为6.6%;该法与传统的酶法之间结果具有良好的相关性(相关系数r=0.996 4);该系统测试健康人群末梢全血乳酸参考范围为0.44～21.6 mmol、L.结论 H-1型国产手持式乳酸分析仪进行全血乳酸检测具有简便、快速、准确、重复性好等特点,与自动生化分析仪的酶法测定结果具有良好的相关性,各项性能指标均达到临床应用要求.
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人降钙素原定量检测方法学评价
目的 评价深圳市晋百慧生物有限公司生产的人降钙素原(PCT)定量检测系统(简称晋百慧PCT定量检测系统)的检测性能.方法 以罗氏PCT检测系统为参比系统,晋百慧PCT定量检测系统为待评系统.在待评系统连续测定两浓度质控品(0.5 ng/ml,10 ng/ml)20次计算其变异系数(CV)评价其重复性,连续测定20个工作日计算其CV评价其天间不精密度;根据EP6-A文件配置不同标本浓度(0,0.5,1,2,5,10,20,50 ng/ml)计算其线性范围.收集200例患者血清标本,根据EP9-A3文件在待评系统与参比系统进行比对试验判断两者的可比性.结果 待评系统重复性为不同浓度质控品的CV分别为3.59％,1.57％,天间不精密度分别为7.02％,3.82％;在0～50 ng/ml范围为线性.比对试验线性决定系数R2 =0.968 6(Pearson相关分析α=0.05,P＜0.001),在有医学意义浓度0.5 ng/ml处相对偏差为9％.结论 晋百慧PCT定量检测系统精密度好,检测范围宽,与参比系统具有可比性,能满足临床检测要求.
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胶乳增强免疫比浊法测定糖化血红蛋白的方法学评价
目的 应用美国临床实验室标准化委员会的标准化评价方案对胶乳增强免疫比浊法测定HbA1c进行方法学评价.方法 依据标准化文件要求,分析胶乳增强免疫比浊法测定HbA1c的精密度、线性范围、回收率和干扰因素,并考察其与高效液相色谱法的相关性.结果 该法总变异系数为3.19％00(低值),3.53％(中值)和4.11％(高值).平均回收率100.2％,在4.4％～13.5％范围内线性良好.胆红素在884μmol/L,三酰甘油在13.5 mmol/L时对测定存在干扰.试剂和样本在低温保存时可稳定10天.该法与HPLC法结果明显相关,r=0.994,但整体略高于HPLC法的结果.结论 胶乳增强免疫比浊法测定HbA1c方法符合NCCLS标准要求,适应临床需要.临床实验室在建立或引进新的检验项目时需要进行系统的方法学评价以验证检测的有效性和完整性.
