首页 > 文献资料
-
黄花蒿HMGR启动子活性表达及核心序列分析
目的 分析研究黄花蒿3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)启动子的活性表达及其核心序列.方法 以β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因作为报告基因,通过构建包括HMGR启动子全长序列在内的5个不同长度表达载体,并采用农杆菌介导法转化烟草以及对转化烟草进行GUS染色.结果 转HMGR启动子烟草的根、茎、叶、花、果荚均发现蓝色;脱水和高温胁迫会降低该启动子的表达,低温胁迫对其影响不明显;启动子片段AaGPX1、AaGPX2和AaGPX3具有驱动GUS报告基因表达的功能,而AaGPX4和AaGPX5则未有此功能.结论 HMGR启动子在烟草整个生长期内均能够稳定表达;该启动子对低温不敏感,而对高温和脱水条件敏感;该启动子的核心序列在P-HMGR-3区域,而AaGPX2与AaGPX3片段的非重叠区则存在与HMGR启动子活性强弱相关的调控元件.
-
黄花蒿cyp71av1启动子的分离及表达特性分析
目的 从黄花蒿中分离鉴定青蒿素生物合成途径关键酶--细胞色素P450单加氧酶编码基因(cyp71av1)的启动子序列并研究其表达特性,探索提高该基因表达量并进一步促进青蒿素合成的途径.方法 采用热不对称嵌套PCR法从黄花蒿DNA中分离cyp71avl 5'端非翻译区序列,构建与β-葡萄糖苷酸酶(GUS)报告基因融合的植物表达载体,通过农杆菌介导转化烟草.采用GUS组织化学染色法和分光光度法分别定性和定量检测cyp71av1 5'端非翻译区序列调控GUS基因在正常条件和胁迫条件下的表达.结果 从黄花蒿中分离出长短2个cyp71av1 5'端非翻译区序列,分别获得与GUS基因融合表达的转基因烟草,均能检测到GUS活性且两者无明显差异.GUS活性定量检测结果还显示,在脱水、4℃和紫外辐射条件下,转化烟草GUS活性提高1.4～2.7倍.结论 从黄花蒿分离出的2个cyp71av1 5'端非翻译区序列都具有启动子功能,并且具有环境诱导表达特性.
关键词： 黄花蒿 CYP71AV1 启动子 青蒿素 β-葡萄糖甘酸酶(GUS) -
青蒿素分子印迹聚合物分子识别性研究
目的 合成对青蒿素具有特异识别能力的分子印迹聚合物.方法 采用分子印迹技术合成了以青蒿素为模板分子,丙烯酰胺为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂的青蒿素分子印迹聚合物.运用平衡结合试验研究了聚合物的吸附特性和选择识别能力.结果 Scatchard模型分析表明,该分子印迹聚合物在识别青蒿素分子的过程中存在两类不同的结合位点.高亲和力结合位点的离解常数Kd1=1.87 mmol/L,大表观结合常数QMAX1 =27.99 μmol/g;低亲和力结合位点的离解常数Kd2 =48.5 mmol/L,大表观结合常数QMAX2=334.4 μmol/g.结论 结合底物的实验结果表明,青蒿素分子印迹聚合物对青蒿素具有良好的特征吸附和选择识别性能,为天然产物中高效分离纯化活性成分青蒿素提供了一种新型材料.
-
青蒿丛生芽诱导影响因素的研究
目的对影响青蒿丛生芽诱导因素进行基础性研究.方法把常规的植物组织培养技术应用于调控青蒿中次生代谢产物青蒿素的生物合成代谢.结果青蒿的基因型,激素和基本培养基对丛生芽的发生有显著影响,而光强在1000～6000lx和温度在20℃～30℃对丛生芽的发生影响不大;在5种基因型的青蒿中,025丛生芽的诱导率高;诱导丛生芽的激素组合是6-BA 2.0mg/L和NAA 0.15mg/L;另外,离子在青蒿丛生芽的诱导和青蒿素的生物合成过程中起着非常重要的作用.结论组织培养条件下,青蒿丛生芽的诱导及青蒿素的生物合成可以通过理化因子有效地进行调控.
-
青蒿素提取条件研究
以干青蒿叶末为原料,分别用乙醚、氯仿、正己烷、石油醚(30 ℃～60 ℃)搅拌提取青蒿素,结果表明石油醚是较适宜的提取介质.对石油醚提取青蒿素的工艺条件,如温度、时间、溶剂量及搅拌速度等进行了较系统研究,确定了较佳的工艺操作条件.
-
用超临界CO2萃取技术提取青蒿素的研究
用超临界CO2萃取技术对植物黄花蒿进行萃取研究,考察了萃取压力、温度及时间对青蒿素收率的影响.萃取产物经简单的分离后得到纯度≥95%青蒿素产品,经TLC、IR、MS、1HNMR和13CNMR分析确认.
-
青蒿素组合生物合成的研究进展
青蒿素是来自菊科艾属植物青蒿Artemisia annua中的一种抗疟有效成分,近年国际市场对其需求量快速增长.组合生物合成法将成为制备青蒿素的主要有效手段,在该研究领域也取得了重要进展.综述了青蒿素生物合成途径、高产青蒿素工程菌的构建以及青蒿素组合生物合成的基因调控等方面的新研究进展,分析了该领域目前面临的新问题与困难,并探讨未来的发展趋势.
-
青蒿素代谢调控研究进展
青蒿素是治疗疟疾的特效药并被广泛使用.黄花蒿中青蒿素的量很低,远不能满足需求,开展青蒿的代谢调控研究是提高青蒿素产量的有效手段.总结了影响青蒿素产量的多种因素,包括青蒿素生物合成及支路途径关键酶基因、转录因子、植物激素、逆境、诱导因子和腺毛等.通过概述各因素在青蒿素代谢调控中的研究进展,归纳出基于青蒿素生物合成途径的常规次生代谢调控策略和基于腺毛的新型代谢调控策略,丰富了青蒿素代谢调控的路径,为培育优质高产转基因青蒿品系和改良青蒿种质遗传提供新思路.
-
青蒿素产量影响因素的研究进展
青蒿素(artemisinin)是抗疟特效药,其原料植物黄花蒿Artemisia annua的生产是亟需解决的问题.从黄花蒿的分布、种质资源,以及气候因素、土壤条件、人工栽培措施、采集时间、采集方式等方面对影响青蒿素产量的因素研究进行综述.不同地理环境中的青蒿素产量高低存在差异,气候、种质对其有影响,而土壤的影响则不显著;采集方式以及人工栽培措施的改进,可以提高青蒿素的量.并对今后研究方向予以展望.
-
提高青蒿素产量的生物技术研究进展
青蒿素是目前治疗疟疾的特效药,主要来自于中药黄花蒿.由于自然资源有限,人们试图通过各种栽培方法来获得高产量的青蒿素.对自青蒿素大量应用以来的获得高产量青蒿素的生物技术研究进行了比较详尽的综述,包括育苗栽培多次收割法、组织培养法、转基因克隆法.
-
青蒿素生物合成与基因工程研究进展
青蒿素因其在植物中的量很低并不能满足患者需求,提高青蒿中青蒿素的量是植物次生代谢研究领域的热点之一.综述了青蒿素生物合成途径的相关酶与基因,青蒿素生物合成的部位及特异性基因表达研究,植物激素和诱导子对青蒿素生物合成的影响,以及利用基因工程对青蒿进行遗传改良;提出了基因工程技术是提高青蒿素的理想途径之一.
-
HPLC-ELSD法测定黄花蒿提取物中青蒿素
目的建立HPLC-ELSD法对黄花蒿提取物中青蒿素的测定方法.方法采用HPLC-ELSD法.色谱柱:Inertsil ODS-3(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水(69:31,用三氟醋酸调pH至3);体积流量:1.0 mL/min;检测器漂移管温度:45 ℃;载气体积流量:1.0 L/min;分流:开;柱温:25℃.结果青蒿素在0.589 3～5.893 5mg/mL时面积的常用对数值与其质量浓度的常用对数值线性关系良好(r=0.989);样品平均回收率为98.71%(RSD为0.42%,n=6).结论该方法灵敏、准确可靠,可作为黄花蒿提取物中青蒿素的定量方法.
-
青蒿素和青蒿琥酯对人乳腺癌MCF-7细胞的体外抑制作用比较研究
目的对比研究青蒿素及其衍生物青蒿琥酯对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响并探讨其作用机制.方法采用体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞株,利用SRB法测定青蒿素和青蒿琥酯对MCF-7细胞增殖的影响,FCM法测定细胞周期的变化,亚G1期含量测定和DAPI荧光染色法观察细胞凋亡.结果10μmol/L青蒿素和1μmol/L青蒿琥酯能明显改变MCF-7细胞的细胞周期,使S期细胞显著减少,G0+G1期细胞明显增加.青蒿素对MCF-7细胞增殖仅有微弱抑制作用,但其衍生物青蒿琥酯却有显著的抑制作用,IC50为0.31μmol/I.同样,1 μmol/L青蒿琥酯引起MCF-7细胞的凋亡和直接的细胞毒作用明显强于10μmol/L青蒿素的作用.结论体外研究表明,对肿瘤细胞增殖的抑制青蒿琥酯比青蒿素作用强.
-
长春花及银杏植物细胞悬浮培养对青蒿素的生物转化研究
目的对抗疟药物青蒿素(Ⅰ)进行了生物转化研究.方法利用长春花及银杏植物细胞悬浮培养细胞进行生物转化.用硅胶柱色谱进行产物的分离,波谱方法鉴定产物的结构.结果此两种植物悬浮细胞体系均能将青蒿素转化成3α-羟基去氧青蒿素(Ⅱ).结论此两种植物悬浮细胞体系均能有效转化青蒿素.
-
青蒿素的组织化学定位及其含量相关性研究
目的确定青蒿素储存部位并为高青蒿素含量黄花蒿植株筛选提供选择指标.方法应用组织化学方法确定青蒿素的储存结构,应用统计学方法确定储存结构腺毛状分泌腺密度与青蒿素含量的相关性.结果青蒿素储存于腺毛状分泌腺(BGT)和T-型网状分泌腺(NTFT)中,在叶中腺毛状分泌腺的密度与青蒿素含量正相关.结论腺毛状分泌腺密度可作为高青蒿素含量黄花蒿育种筛选指标.
-
华根霉和雅致小克银汉霉对青蒿素的生物转化研究
目的探讨微生物对青蒿素(Ⅰ)的转化作用.方法通过华根霉和雅致小克银汉霉在土豆培养基中发酵产酶,对青蒿素进行转化.结果两株菌对底物均有转化作用,分离出去氧青蒿素deoxyartemisinin(Ⅱ),3α-羟基去氧青蒿素3α-hydroxydeoxyartemisinin(Ⅲ)和9β-羟基青蒿素9β-hydroxyartemisinin(Ⅳ)共3个产物,其中Ⅳ为一新化合物,同时振荡条件下底物在无菌培养基中也能发生微量转化得到产物Ⅱ.结论青蒿素易被实验两株真菌转化,同时过氧桥也易断裂而失去一个氧原子成为去氧青蒿素,丧失抗疟活性,起作用的可能是土豆培养基中的铁元素.
-
天然药物化学史话:天然产物化学研究的魅力
在研究天然产物过程中,无论发现新天然产物并将其作为药物应用,还是因此产生的各种理论、各门学科等都为人类的科学进步做出了极其重要的贡献.通过对科学家们在天然产物研究方面取得的成就进行简要回顾和总结,展现天然产物研究的魅力,期待为年轻研究者开阔眼界,增加兴趣.
-
天然药物化学史话:青蒿素——中药研究的丰碑
我国科学家屠呦呦研究员荣获2015年度诺贝尔奖填补了中国本土科学家在诺贝尔自然科学奖的空白.青蒿素的发现必将在世界科学史上留下一个辉煌的记录,是对我国科学界特别是天然药物工作者的巨大鼓舞.通过对历史文献的总结,回顾了青蒿素的研发历史,表达了对老一辈科学家的衷心敬佩,同时给年青科学工作者以激励.
-
创新中药研究与开发模式探讨
中药创新是中药现代化、国际化的灵魂.如何借助现代生命科学和医药学新理论技术实现创新中药研发是中药研究中亟待解决的关键问题.基于我国近百年的中药现代研究的历史和经验,借鉴西方天然药物研发的思路,以中药创新研究中的几个成功的先例,总结和归纳了创新中药研究的6种主要模式:青蒿素模式、培养基模式、GBE761-Veregen模式、PHY906模式、复方丹参滴丸模式、PC-SPES模式,评述了各个模式在创新中药研究中的应用、特点、优缺点等,并对其发展前景进行了展望.
-
青蒿的专利格局分析
青蒿为一年生菊科植物黄花蒿Artemisia annua的干燥地上部分,在我国应用历史悠久,以青蒿素为代表的现代研究成果使其在世界范围内受到广泛关注,进而带来大量的相关研究,并产生大量成果及专利.从多个专利数据库系统中收集有关青蒿的专利信息,并利用计算机辅助统计评价指标,全面分析该领域内的专利及产业格局.分析表明该领域尚有较大专利申请空间,专利申请者可以此制定符合自身的专利申请策略.
