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肝癌相关基因的分子克隆和可变剪切分析
目的：：获取肝癌相关基因(hepatoma associated gene，HTA)的mRNA分子全长序列并对其可变剪接进行分析，检测其转录本在各肝癌细胞系中的表达，为进一步研究该基因在肝癌发生、发展中的作用奠定基础。方法：用3'RACE和5'RACE方法扩增HTA基因的全长序列并对其序列信息和可变剪接进行扩增和测序分析，用Northern印迹检测该基因转录本在不同肝癌和正常肝细胞系中的表达。结果：HTA基因全长序列为1414 bp，经分析该序列包含3个外显子，2个内含子，其中2号内含子在可变剪接中被作为外显子表达。Northern印迹显示HTA基因1.7 kb转录本和1.4 kb转录本均表达于恶性肝癌细胞系，而不表达于正常细胞系。结论：成功获得了HTA基因的全长序列并对其可变剪接进行了分析，2个大小不同的转录本均在肝癌细胞系中特异性表达，作为一个肝癌相关基因值得进一步深入研究。
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肝癌相关基因HTA的重组表达及蛋白功能研究
目的:将肝癌相关基因HTA基因(hepatoma associated gene)进行重组表达,并对HTA蛋白功能进行初步研究.方法:从肝癌细胞系HepG2细胞中扩增得到HTA338-616cDNA,再将其克隆到原核表达载体pET21a(+)-MBP内,诱导表达MBP-HTA融合蛋白及MBP蛋白,His-tag磁珠纯化试剂盒纯化2种蛋白,并用Western 印迹及ELISA方法进行活性鉴定.分别用MBP,MBP-HTA蛋白刺激并培养HepG2细胞,采用MTT法、平板克隆形成实验观察细胞增殖情况,流式细胞术检测刺激前后细胞周期分布的改变.结果:成功地构建了表达分子质量约为52 kD的MBP-HTA融合蛋白的原核表达质粒pET21a(+)-MBP-HTA.与MBP刺激后的HepG2细胞及阴性对照组相比,MBP-HTA刺激后的HepG2细胞增殖明显;流式细胞术显示MBP-HTA刺激后的HepG2细胞G1期细胞减少,S期细胞增多,细胞增殖活性增强.结论:HTA蛋白可以明显地促进HepG2细胞增殖,这可能与其促进细胞从G1期过渡到S期有关.
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肝癌相关基因的分子遗传学研究进展
随着科学的发展,人民生活水平的提高,危害人民健康的疾病已由传染病转为心血管疾病及肿瘤,而肝癌又是我国常见的恶性肿瘤之一.今天,分子生物学技术日益提高,尤其是肝癌相关基因的研究不断取得新进展 [1],现就此研究简述如下.
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基因芯片在肝癌研究中的应用进展
肝癌是一种常见的恶性肿瘤,居我国癌症死亡的第2位.它的发生发展是一个复杂的多阶段、多因素、多基因参与的过程.面对错综复杂的基因分析,一次只能研究少量基因且操作复杂费时的传统方法已显局限.新近发展的基因表达分析平台--基因芯片技术能克服传统方法的缺点,已成为肝癌发生发展中的基因表达及表达程度方面研究的强有力工具,用它可以随意获取肝癌生长各期与肝癌相关基因的表达模式,确定肝癌发生发展中基因突变位点;同时,根据基因型将肝癌分类,寻找新的药物作用靶点以及进行药物筛选,在肝癌发生的分子机制研究和临床诊断治疗中都具有非常重要的应用价值.本文综述了基因芯片技术及其在肝癌研究中的应用进展.
