首页 > 文献资料
-
异种肝移植术后组织因子激活介导受体凝血功能障碍的机制
目的 探讨异种肝移植术后导致受体凝血功能障碍的组织因子(TF)激活机制.方法 实施3例α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)小型猪-藏酋猴异种脾窝异位辅助性肝移植术.观察受体术后凝血功能变化情况.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织化学染色检测移植术前及术后不同时间点受体原肝和移植肝组织的猴TF及猪TF 信使核糖核酸(mRNA)和蛋白的表达情况.检测正常对照猴、移植术前受体猴及移植术后2 h受体猴的外周血单核细胞(PBMC)的复钙时间以评价受体凝血状态.结果 3例受体在术后均出现了不同程度的凝血功能障碍,表现为纤维蛋白原水平降低、血小板计数减少.猴TF蛋白在术后受体原肝中呈阳性表达,在术前及术后的移植肝中呈阴性表达;而猪TF蛋白在原肝和移植肝中始终为阴性表达.术后2 h,猴TF mRNA在原肝中较术前上调(2.10±0.24)倍,而猪TF 在移植肝中较术前上调(1.42±0.15)倍,两者比较差异有统计学意义(P=0.014).与正常对照猴PBMC和移植术前受体猴PBMC比较,术后2 h受体猴PBMC复钙时间明显缩短,差异均有统计学意义(均为P<0.001).结论 在异种肝移植术后凝血功能障碍发生时,受体原肝TF激活程度显著高于移植肝TF.受体原肝TF激活是导致异种肝移植术后凝血功能障碍的主要原因.
-
SCARB1介导异种肝移植术后受体凝血功能调节障碍的研究
目的 探讨清道夫受体B组1型分子(SCARB1)在异种肝移植手术前、后移植肝组织内的表达变化及其与受体凝血功能调节障碍的关系.方法 以α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)五指山小型猪为供体,藏酋猴为受体,建立异种异位辅助性肝移植模型,并收集移植手术前、后移植肝脏组织标本.以胶原酶消化法提取原代猪肝细胞,免疫磁珠分离人外周血单核细胞,将两者混合培养并加入人血浆,建立异种肝移植术后凝血功能调节障碍的细胞模型.以实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测并对比组织及细胞标本中SCARB1的信使核糖核酸(mRNA)及蛋白质表达情况.后在细胞水平以慢病毒载体干预SCARB1的表达,并检测凝血时间以验证其对凝血功能的影响.结果 与术前组织标本比较,术后移植肝组织内SCARB1的mRNA和蛋白表达均显著下调(均为P＜0.05).在细胞模型中,与未干预猪肝细胞比较,经人单核细胞共培养后的猪肝细胞内SCARB1的mRNA和蛋白表达也出现显著下调(均为P＜0.05).与干预组比较,应用慢病毒过表达猪肝细胞内SCARB1的表达后,凝血时间显著延长(均为P＜0.05).结论 移植肝组织内SCARB1的下调是介导受体凝血功能调节障碍的重要原因之一,对其干预有助于纠正异种肝移植术后受体凝血功能调节障碍.
-
人工饲养三种猕猴属实验动物生理指标初步测定
目的:测定并比较人工饲养条件下三种猕猴属实验动物的生理指标,为实验动物研究与应用提供参考数据.方法:分组测量人工繁育的藏酋猴(Macaca thibetana)23(♂21,♀2)只,恒河猴(Macacus Rhesus)10(♂9,♀1)只,食蟹猴(Macaca fascicularis)10(♂5,♀5)只,各自的体重、身长、腿长、臂长、尾长、胸围、腹围、呼吸频率等生理指标,使用SPSS17.0软件进行统计分析,比较各组间的差异.结果:三种猴随年龄增大,体重、胸围和腹围增大,尾长差异显著(P＜0.001),藏酋猴性格平静,呼吸频率低于恒河猴和食蟹猴(P＜0.001),其它几项测量无显著差异(P＞0.05).结论:灵长类猕猴属的同属动物生物学特性有极高一致性,也存在差异性.
-
藏酋猴类似人clock基因片段的克隆
目的:在藏酋猴中,寻找和克隆与人clock基因类似的基因.方法:提取藏酋猴外周血白细胞RNA,逆转录为全基因组cDNA,利用人clock基因保守序列设计相关引物,克隆,测序,进行生物信息学分析.结果:扩增得到1994bp的核酸序列.该序列与人,苏门答腊猩猩,绵羊,小鼠,褐家鼠,原鸡和蟾蜍clock基因核酸序列同源性分别为99%,98%,94%,90%,90%,82%和75%.结论:藏酋猴基因组中存在与人clock基因相似的基因,该基因可能为藏酋猴clock基因.
-
藏酋猴人工繁育中腹泻疾病治疗体会
猕猴中的四川短尾猴(学名Macaca speciosa thibetanas)又称藏酋猴,是我国特有野生保护动物品种,至今无人按实验动物标准化进行人工繁育研究,我们在饲养繁育中体会到,腹泻是动物的常见病,在诊断和治疗获得一些经验体会.
-
藏酋猴脊柱的解剖学研究
目的 对藏酋猴脊柱进行系统的解剖学研究,了解其与其他灵长类动物的异同.方法 对3具成年雌性藏酋猴脊柱标本进行形态学观察,对其主要椎骨进行形态学测量.结果 藏酋猴脊柱由颈椎7块、胸椎12块、腰椎7块、骶椎3块、尾椎9块构成.颈椎全长为(6.0±0.2)cm;胸椎全长(16.4±0.8)cm,第8胸椎棘突伸向后下方,第9～12胸椎的棘突变短、变宽,伸向后方,第10～12胸椎有副突;腰椎全长为(17.5±0.8)cm,第1～7腰椎的横突逐渐增宽且延长,弯向颅侧,第1～6腰椎有发达的副突;骶骨是由3块骶椎融合而成,其形态变化很大.结论 藏酋猴脊柱及各椎骨的形态结构与金丝猴、猕猴、懒猴及人类存在着明显差异,本研究结果可为后续藏酋猴研究提供解剖学基础数据.
-
五指山小型猪-藏酋猴异种肝移植的术前检测
目的 本研究为了减少五指山小型猪-藏酋猴异种肝移植手术的超急性排斥反应(hyperacute rejection,HAR)和急性排斥反应(acute rejection,AR)发生率,进行全面术前检测.方法 分别利用PCR技术和植物凝集素细胞染色对供体GGTA1基因敲除类型进行鉴定;30只藏酋猴分别与五指山小型猪进行淋巴细胞毒实验;供受体ABO血型鉴定.结果 供体为GGTA1基因敲除猪,GTKO猪外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)植物凝集素细胞染色未检测出荧光,表明GGTA1基因敲除成功,与基因型鉴定结果一致.通过淋巴细胞毒实验选定28#与供体PBMC毒性小的藏酋猴做为备选受体.血型鉴定显示供受体血型一致.结论 通过对GTKO五指山小型猪-藏酋猴异种肝移植的术前检测选定合适的受体,可有效减少异种移植HAR和AR的发生率.
-
异种肝移植手术前后移植肝差异表达基因的筛选及验证
目的 探讨异种移植手术前后移植肝内差异表达基因的变化,并且进行筛选及验证.方法 以α-1, 3-半乳糖苷转移酶基因敲除(GTKO)小型猪为供体、藏酋猴为受体,完成4例异种脾窝辅助性肝移植手术.于供肝修整时切取适量术前标本,于移植肝开放血流后48小时以肝穿刺活检获得术后标本.对手术前后的移植肝标本进行miRNAs 和mRNAs 的高通量芯片分析,筛选出关键的差异表达miRNAs 和mRNAs,并进行实时定量PCR及Western Blot实验验证.结果 与术前相比,有165 个miRNAs在术后出现差异表达,其中上调分子112 个,下调分子53 个.筛选并验证mi-23b 等12个出现显著差异表达的miRNAs,除miR-150和miR-126-3p外,其他miRNAs 的表达变化情况与miRNAs 芯片结果基本相符.与术前相比,有2 035 个mRNAs 在术后出现显著差异表达,其中922个表达上调、1 113个表达下调,筛选IGFBP6、CDK2AP1、TNFAIP6、FⅦ、NKG2D等5个生物学功能与肝脏移植密切相关的差异表达基因进行mRNA 和蛋白水平验证.除NKG2D 外,其他4 个基因的蛋白水平表达变化与mRNA 水平变化基本一致(均P＜0.05),但CDK2AP1 的蛋白变化幅度较小,差异无统计学差异(P＝0.073).结论 异种肝移植术后移植肝的miRNAs 和mRNAs 表达出现较大变化,这些差异表达基因可能与免疫损伤及凝血功能障碍有关.
