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中国人群中BTNL2基因多态性与结核病易感性研究
目的 探讨嗜乳脂样蛋白2(BTNL2)基因多态性与中国人群结核病发病的关系.方法 在中国人群中进行病例对照研究,用SNaPshot SNP分型技术分析94例结核病样本(病例组)和95例健康对照者(对照组)的7个BTNL2基因单核苷酸多态性(SNP)位点(rs9405098、rs3763317、rs3763313、rs9268494、rs9268492、rs2076523、rs2076530),使用SHEsis软件进行数据处理,进行Hardy-Weinberg遗传平衡检验,计算各组等位基因频率和基因型频率,用χ2检验计算P值比较2组分布频率的差异,并计算各等位基因比值比(OR)及95%可信区间(CI)分析疾病与基因的关联强度,以及BTNL2基因多态性位点连锁不平衡系数(D'值)和单倍体型频率.结果 研究显示:(1)所研究的7个多态性位点与结核病的易感性均无显著关联.(2)BTNL2基因的C-A-T-GC-G单倍体型和C-G-T-G-C-G单倍体型与中国人群结核病发生的易感性显著相关,P值分别为0.007和0.049,其OR值(95%CI)分别为0.39(0.19～0.79)和3.50(0.93～13.18).结论 (1)BTNL2基因多态性单个位点与中国人群结核病的易感性无显著相关.(2)BTNL2基因的单倍体型可能与中国人群结核病发生的易感性相关.
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基于人CD105分子的酵母展示系统的构建
目的：构建基于人 CD105分子的酵母表面展示系统。方法以人 CD105 cDNA为模板，扩增 CD105基因片段，转化到酵母表面展示载体 pYDs，构建 pYDs-CD105重组质粒；将重组质粒转化酵母细胞，测序鉴定，并通过流式细胞仪分析 CD105的表达。结果测序表明 CD105基因片段转入 pYDs质粒，流式细胞仪检测到酵母细胞表面有 CD105分子的表达。结论成功构建了基于人 CD105分子的酵母表面展示系统，为本实验室获得 CD105单克隆抗体杂交瘤细胞株提供了新的筛选平台。
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单纯疱疹病毒Ⅰ和Ⅱ型共同抗原gD在大肠埃希菌中的重组表达
目的克隆人单纯疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ(HSV-Ⅰ、Ⅱ)型共同性抗原gD基因,构建重组表达载体pMAL-c2/gD,诱导融合蛋白MBP-gD的表达.方法提取病毒DNA,PCR扩增出gD基因,克隆于原核表达载体pMAL-c2并转化大肠埃希菌DH5α.PCR、双酶切及测序证实插入的gD基因序列正确后,IPTG诱导表达融合蛋白MBP-gD,并进行免疫学鉴定.结果构建的重组表达质粒pMAL-c2/gD在大肠埃希菌中能高效表达.经SDS-PAGE分析,表达产物约占菌体总蛋白35.5%,其中39%以可溶蛋白形式存在于胞质中,61%以包涵体形式存在.结论构建了pMAL-c\+2/gD表达质粒,Western blot证实,HSV-Ⅰ gD单克隆抗体DL6可特异识别表达的gD蛋白,该蛋白具有天然gD的抗原性.
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Toll样受体与临床疾病关系的研究进展
Toll样受体(Toll like receptors,TLRs)是一类表达于细胞膜上与微生物识别有关的受体家族.它们能够识别特定类型微生物保守的分子成分,即病原体相关分子模式(pathogen associated molecular patterns,PAMPs),通过激活细胞信号传导途径,激活天然免疫反应,还可以通过提供刺激分子和诱导T细胞分化的细胞因子,帮助机体建立获得性免疫[1].TLRs在机体防御反应中的重要性受到越来越多的关注,成为近年来的一个研究热点.本文就TLRs的结构及信号传导途径与一些临床疾病的关系及研究前景等进行综述.
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RECK在消化系统肿瘤中的研究进展
当前肿瘤生物学、分子生物学研究水平的飞速提升,使从分子水平观察和理解肿瘤成为了可能,进而对于肿瘤发生机制的理解愈发深入.现已证实,肿瘤的发生是原癌基因的激活、抑癌基因的失活以及凋亡相关基因的改变导致细胞增殖、分化和凋亡失调的结果.RECK( reversion-inducing cysteine-richprotein with Kazal motif)作为一种新发现的抑癌基因,可以抑制多种基质金属蛋白酶,同时抑制血管生成,进而抑制肿瘤的侵袭与转移.这为人们进一步了解肿瘤的分子生物学行为提供了新的思路[1].本文就RECK及其在消化系统肿瘤领域的研究现状总结如下.
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冠心病患者血小板表面GPⅥ及活化分子的表达
目的 探讨冠心病患者血小板表面GPⅥ、CD62P和CD63的表达水平及其相互关系.方法 选择急性冠状动脉综合征患者43例、稳定性心绞痛患者21例及健康对照者33例,采用流式细胞术分别检测血小板表面GPⅥ、CD62P和CD63的表达水平,并作三者之间的相关性分析.结果 急性冠状动脉综合征组GPⅥ、CD62P及CD63较对照组(P分别为0.001、0.005和0.001)、稳定性心绞痛组显著升高(P分别为0.037、0.014和0.039),并且血小板表面GPⅥ的表达水平与CD62P和CD63的表达水平均呈明显正相关(r分别为0.712和0.633,P分别为0.001和0.001),相关分析证实CD62P及CD63表达的升高与心肌坏死标志物肌钙蛋白(r分别为0.256和0.291,P分别为0.021和0.008)及CK-MB(r分别为0.222和0.240,P分别为0.046和0.031)的升高相关.结论 急性冠状动脉综合征患者血小板表面GPⅥ、CD62P和CD63的表达水平明显升高,并且血小板表面GPⅥ的表达水平与CD62P和CD63的表达水平呈明显正相关,其表达水平的升高可能是预示急性冠状动脉综合征的重要指标.
关键词： 冠心病 膜糖蛋白类 P选择素 溶酶体相关膜糖蛋白质类 -
外源性一氧化碳分子对脓毒症时血小板膜糖蛋白过度表达和血小板活化的抑制作用及机制
目的 探讨外源性一氧化碳释放分子(CORM-2)对脓毒症时血小板膜糖蛋白表达和血小板活化的抑制作用.方法 将120只雄性BALB/c小鼠按随机数字表法分为正常对照组、盲肠结扎+穿孔术(CLP)组、CLP+无活性CORMS(iCORM-2)组和CLP+CORM-2组.CLP+CORM-2组除伤后使用CORM-2外,其他处理同CLP组.于伤后6 h、12 h、24 h分别检测小鼠血浆纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体(D-D)的水平;全血电阻法检测血小板聚集功能;用流式细胞术检测血小板膜糖蛋白CD61和CD62p的表达水平;同时Western Blot检测造血系细胞特异蛋白-1(HS1)分子磷酸化水平.结果 与假手术组比较,12 h、24 h CLP组血浆FIB、D-D的水平明显增加[分别为(4.65±0.73)g/L,(5.76±0.88)g/L和(229.93±62.91)mg/L,(182.96±46.32)mg/L,P<0.01)],血小板聚集率明显增高,血小板膜糖蛋白CD61和CD62p的表达增加[分别为(94.87±11.22)%,(95.93±7.43)%和(34.81±4.76)%,(32.88±6.94)%,P<0.05)].HS1分子磷酸化水平增加;CLP+CORM-2组血浆FIB、D-D的水平均显著降低[分别为(3.32±0.42)g/L,(3.68±0.46)g/L和(169.57±35.14)mg/L,(141.82±18.46)mg/L,P<0.05)],血小板聚集率下降明显,膜糖蛋白CD61和CD62p的表达也得到有效下调[分别为(72.12±11.67)%,(73.68±8.76)%和(21.38±1.61)%,(24.65±5.96)%,P<0.05],HS1分子磷酸化水平得到有效抑制.结论 外源性CORM-2能明显下调脓毒症时血小板膜糖蛋白CD61和CD62p的表达以及HS1分子磷酸化水平,并抑制血浆NB、D-D的升高,继而降低血小板黏附及聚集率,有效抑制脓毒症时血小板的过度活化.
关键词： 脓毒症 一氧化碳 血小板 膜糖蛋白类 造血系细胞特异蛋白-1 -
血浆可溶性白细胞介素6受体β糖蛋白链检测试剂盒的研制
目的研制血浆或细胞培养上清可溶性白细胞介素6受体糖蛋白130(sgp130)的酶联免疫吸附测定(ELISA)检测国产试剂盒,为sgp130ELISA的检测提供便利条件.方法单克隆抗体(单抗)经生物素标记后,采用双抗体夹心法,显色系统选用辣根过氧化物酶(HRP)-亲和素/邻苯二胺(OPD)溶液,对7株小鼠抗人sgp130单抗进行不同的组合配对,选择佳配对用以检测sgp130.结果以单抗BT12包被,二抗为生物素标记的BT2.这一配对可用于血浆或细胞培养上清sgp130水平的检测,检测灵敏度为3.12 ng/ml.结论利用识别sgp130不同表位的2株单抗可建立其ELISA检测方法.本法灵敏度高,方法简便,适合临床使用.
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唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素1在冠状动脉粥样硬化性心脏病患者外周血单个核细胞的表达及临床意义
目的 观察唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素1(sialic acid-binding immunoglobulin-likelectin 1,Siglec-1,也称CD169)在冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)患者外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞上的表达水平,并探讨其与冠状动脉粥样硬化发生发展的关系.方法 流式细胞术检测57例CHD患者及38名健康对照者外周血CD14CD169双阳性细胞的表达率;生化常规测定所有入选者血脂水平;实时荧光相对定量逆转录(FQ-RT)-PCR方法检测入选对象外周血单个核细胞(PBMCs)中CD169 mRNA的含量.结果 流式细胞仪检测发现,CD169在健康对照组及CHD组淋巴细胞和中性粒细胞上均无表达;CHD组单核细胞CD14CD169双阳性率为(12.7±2.4)%,显著高于健康对照组[(1.0±0.3)%,t=23.2,P<0.01];CHD组CD169 mRNA的拷贝数显著高于健康对照组拷贝数(t=6.59,P<0.01),为健康对照组的3..倍;而CHD血脂正常组和血脂异常组的CD169阳性率[分别为(12.2±2.3)%和(13.4±2.5)%,t=1.87,P>0.05]和mRNA平均拷贝数(分别为健康对照组的3.64和2.79倍,t=0.98,P>0.05)差异均无统计学意义.结论 CD169组成性表达于特定组织巨噬细胞上,健康人外周血单核细胞上并不表达,单核巨噬细胞受到炎症刺激时,CD169表达迅速上调.CD169蛋白及mRNA含量在CHD患者外周血单核细胞上表达显著升高,CHD患者外周血单核细胞已发生巨噬细胞化,单核巨噬细胞介导的免疫炎症反应在CHD发生发展过程中起重要作用.
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实时荧光定量PCR测定人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因表达
目的 建立检测人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因表达含量的实时荧光定量逆转录(FQ-RT)-PCR法,探讨其在健康对照者、乙型病毒性肝炎肝硬化患者及原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达状况.方法 设计TRAIL基因的特异性引物和TaqMan-MGB探针,以β-actin基因为内参,RT-PCR扩增目的 片段.胶同收纯化目的 片段,构建克隆载体作为定模板,在ABI Prism7000型荧光定量分析仪上进行扩增,建立标准曲线;同时检测30名健康对照者、30例PBC患者及25例乙型病毒性肝炎肝硬化患者外周血PBMC中TRAIL基因的荧光强度和循环阈值,计算样本中TRAIL基因的起始拷贝数.结果 FQ-RT-PCR检测TRAIL mRNA的线性范围为103-106拷贝/ug RNA(r=-0.997);高浓度样本批内和批间变异系数(CV)分别为5.6%和6.3%.低浓度样本批内及批间CV分别为12.5%和14.6%.PBC患者TRAIL mRNA表达量为[(3.3±2.5)×105拷贝ug RNA],高于健康对照组[(0.5±0.2)×105拷贝/ug RNA],两组差异有统计学意义(t=5.994,P<0.01);乙型病毒性肝炎肝硬化患者TRAIL mRNA的表达[(2.1±0.9)×105拷贝/ug RNA]亦高于健康对照组,且差异有统计学意义(t=8.536,P<0.01),而两疾病组间差异无统计学意义(t=1.988,P>0.05).结论 成功建立检测TRAIL mRNA的FQ-RT-PCR法,并初步发现TRAIL mRNA在PBC及乙型病毒性肝炎肝硬化患者外周血PBMC中表达升高,这将对肝硬化肝损伤机制研究提供新的思路.
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溃疡性结肠炎患者外周血单个核细胞中TREM-lmRNA 的表达水平
目的 通过比较髓系细胞触发受体-1(TREM-1)mRNA在活动期和缓解期溃疡性结肠炎(UC)患者以及健康体检者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达水平,探讨TREM-1与UC疾病活动性的关系.方法 依据结肠镜检和病理活检结果,将UC患者分为活动期和缓解期2组,采用实时荧光定量逆转录(FQ-RT)-PCR检测70例UC患者(活动期患者38例,缓解期患者32例)和20名健康体检者PBMC中TREM-1 mRNA的表达水平,采用相对定量ACt值比较基因表达水平的高低,并比较TREM-1 mRNA表达水平与ESR和C反应蛋白(CRP)的相关性.结果 UC活动期患者PBMC中TREM-1 mRNA的表达水平(4.19±1.86)显著高于uC缓解期患者(5.29±1.71,P=0.007)和健康体检者(5.19±1.04,P=0.032),而UC缓解期患者与健康对照组差异无统计学意义(P=0.892);TREM-1 mRNA表达的受试者操作特性曲线(ROC)下面积为0.763(P<0.001),表明TREM-1 mRNA表达水平对UC疾病活动性具有诊断价值;当△Ct值为4.63时,是判断UC活动性的佳临界点,其诊断的敏感度和特异度分别为73.7%和68.7%;UC活动期患者中TREM-1 mRNA的表达与ESR显著相关(r=0.582,P=0.03),而与血清中CRP水平不相关(r=0.447,P=0.055).结论 TREM-1mRNA的表达与UC的活动程度明显相关,TREM-1可能参与了UC的炎症进程.TREM-1 mRNA的表达水平可能与ESR相关,而与血清中CRP水平不相关.
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2型糖尿病家系膜糖蛋白PC-1基因多态性的研究
目的探讨膜糖蛋白PC-1基因多态性与胰岛素抵抗(IR)特征和2型糖尿病(T2DM)的关系. 方法选择T2DM家系中的T2DM患者(216例)、非DM一级亲属(133例),运用PCR-RFLP技术进行PC-1基因编码区K121Q多态性研究,同时检测临床和生化指标,并与正常人(106名)相比较. 结果 (1)T2DM患者基因型频率和等位基因频率与正常对照无明显差异.携带Q等位基因的DM患者,收缩压、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、空腹胰岛素(FIns)水平等较后者明显增高.(2)非DM一级亲属的基因型频率和等位基因频率与正常对照比较差异无显著意义.携带KQ基因型者虽然其体质指数明显低于KK基因型者,但前者舒张压、TG、TC、FIns、餐后2 h胰岛素(2 hIns)、空腹血浆C肽(FCP)水平等显著高于后者.(3)合并高血压的DM患者(84例)和无高血压的DM患者(132例)比较,QQ基因型只见于前者. 结论 (1)T2DM患者、非DM一级亲属和正常人中该多态性分布没有明显差异.(2)PC-1基因Q121K基因型与家族性T2DM家系成员的IR表型相关.(3)PC-1基因Q121K基因多态性与T2DM患者的高血压无关.
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负荷剂量双重抗血小板药物对老年急性冠状动脉综合征患者血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa及P选择素表达的影响
目的 探讨负荷剂量氯吡格雷与阿司匹林联合应用对老年急性冠状动脉综合征(ACS)患者血小板膜表面糖蛋白表达率的影响.方法 2周内未曾服用抗血小板药物的32例老年ACS患者给予负荷量双重抗血小板药物氯吡格雷与阿司匹林,在入院时、服药2 h及4 d后运用流式细胞仪测定体外经二磷酸腺苷(ADP)及花生四烯酸共同活化的血小板膜表面糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)及P选择素的阳性表达率,并观察其变化.结果 入院时GPⅡb/Ⅲa及P选择素的阳性表达率为57%±16%与60%±9%,服药后2 h时为44%±14%与56%±16%,4d时为43%±14%与40%±17%.服药2 h及4 d后血小板GPⅡb/Ⅲa下降明显,与人院时相比差异有统计学意义(P<0.05);P选择素服药2 h时与人院时比较差异无统计学意义(P>0.05),但服药4 d后与2 h及入院时比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 负荷量氯吡格雷与阿司匹林联合应用可以快速降低老年ACS患者血小板膜GPⅡb/Ⅲa表达率;GPⅡb/Ⅲa可以较好地直接反映负荷量氯吡格雷与阿司匹林联合应用对血小板活化功能的影响.P选择素在血小板膜表面的表达率与GPⅡb/Ⅲa不同步,可能不是理想的血小板活化的早期标记物.
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脑梗死患者外周血CD34+细胞水平与脑血管病危险因素的相关性
目的 观察急性脑梗死患者外周血CD34+细胞水平的变化,探讨其与脑血管病危险因素、神经功能缺损评分及颈动脉内膜-中层厚度(IMT)的相关性.方法 选择急性期脑梗死(发病72 h内)患者45例(梗死组)和具有脑血管危险因素的非脑梗死患者27例(高危组)为研究对象.记录两组患者脑血管病危险因素,包括酗酒史、吸烟史、冠心病、高血压、糖尿病、血清三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;通过流式细胞仪测定两组患者外周血CD34+细胞水平,再将两组外周血CD34+细胞水平与脑血管病危险因素进行相关性分析;分别记录梗死组神经功能缺损评分及颈动脉IMT,将外周血CD34+细胞水平与神经功能缺损评分及颈动脉IMT进行相关性分析.结果 (1)脑血管病危险因素中冠心病、高血压、糖尿病和LDL-C水平均与外周血CD34+细胞水平呈显著负相关(r分别为-0.749,-0.717,-0.688,-0.764),差异均有统计学意义(P＜0.01);(2)通过多元线性回归分析得出外周血CD34+细胞水平可以作为急性脑梗死的独立影响因素(P＜0.05);(3)梗死组患者外周血CD34+细胞水平低于高危组,其与神经功能缺损评分呈负相关(r=-0.721,P＜0.01),与颈动脉IMT亦呈负相关(r=-0.695,P＜0.01).结论 外周血CD34+细胞水平可以作为急性脑梗死的独立影响因素;急性脑梗死患者外周血CD34+细胞水平与神经功能缺损评分及颈动脉IMT呈显著负相关;外周血CD34+细胞水平可以作为缺血性脑卒中患者早期血管内皮功能的细胞学标志物.
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造血干细胞移植后巨细胞病毒感染患者糖蛋白B基因分型的初步研究
目的初步探讨造血干细胞移植(HSCT)后巨细胞病毒(CMV)感染患者CMV糖蛋白(G)B基因分型及其与致病性的关系.方法研究了2001年3月至2003年12月在我院行HSCT的患者38例,均采用巢式PCR方法检测CMV-GB DNA为阳性,对PCR产物用RsaⅠ和HinfⅠ内切酶进行了酶切分型.结果Ⅰ型19/38例(50.0%),Ⅱ型3/38例(7.9%),Ⅲ型14/38例(36.8%),Ⅰ与Ⅲ混合型2例.Ⅰ型感染预后良好,Ⅲ型与致死性间质性肺炎(IP)发生有明显的相关性.Ⅰ、Ⅲ型患者移植物抗宿主病(GVHD)的发生率差异无统计学意义.结论 CMV GB蛋白的基因分型与CMV的IP发生有关,与GVHD的发生无明显相关性.
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阿托伐他汀对高脂血症患者补体调节蛋白CD55、CD59表达的影响
目的观察高脂血症患者补体调节蛋白CD55、CD59的表达及其与补体活化、脂代谢紊乱之间的关系,并探讨阿托伐他汀对其的影响.方法高脂血症患者67例,年龄、性别、体重与其匹配的健康对照24例,使用流式细胞仪测定外周血白细胞CD55、CD59的表达,分析CD55、CD59表达水平与血脂、补体活化指标、炎症因子及相关临床指标间的关系,对其中24例高脂血症患者使用阿托伐他汀治疗8～12周,观察治疗前后CD55、CD59表达的变化.结果高脂血症患者CD55阳性淋巴细胞、单核细胞平均荧光强度(MFI)低于健康对照组(2.07±0.28 比2.29±0.44及3.45±1.02 比4.33±2.32,P<0.01及P<0.05),CD55阳性淋巴细胞MFI与腰围、腰臀比值、高敏C反应蛋白、补体C5a呈负相关,与血脂不相关;补体C5a 水平与CD55阳性淋巴细胞、单核细胞、粒细胞MFI负相关,与TG和舒张压正相关,与CD59表达指标不相关;阿托伐他汀治疗后CD59阳性淋巴细胞、单核细胞、粒细胞MFI增加(4.34±1.16比3.69±0.76,4.52±1.36比3.91±0.89,5.67±1.72比4.56±1.03,P<0.05,P<0.05及P<0.01),与血脂变化不相关.结论高脂血症患者补体调节蛋白CD55表达下调,可能与肥胖、腹型脂肪分布、炎症状态有关,不受血脂的直接影响;CD55表达水平与补体活化有关;阿托伐他汀干预可使CD59表达上调,与调脂作用无关.
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Survivin启动子调控腺病毒介导富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1基因治疗膀胱癌的实验研究
目的 探讨Survivin启动子驱动的重组腺病毒Ad-Surp-LRIG1对膀胱癌的治疗作用及机制.方法 用Ad-Surp-LRIG1和Ad-LRIG1分别感染人膀胱癌细胞BIU87及人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1,根据报告基因表皮生长因子受体(EGFR)表达的不同计算病毒的细胞转染率.MTT法评估Ad-Surp-LRIG1和Ad-LRIG1对BIU87细胞生长的抑制作用.建立膀胱癌裸鼠移植瘤模型,将成瘤裸鼠随机分为3组,Ad-Surp-LRIG1组(尾静脉注射Ad-Surp-LRIG1上清液)、AD-LRIG1组(尾静脉注射Ad-LRIG1上清液)、PBS组(尾静脉注射PBS),观察各组裸鼠移植瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线；RT-PCR检测各组肿瘤组织中LRIG1和EGFR mRNA的表达.结果 当感染复数(MOI) =25时,Ad-Surp-LRIG1在BIU87细胞中的转染效率为74.56％,在SV-HUC-1细胞中转染率为0,差异有统计学意义(x2 =58.640,P=0.000)；Ad-LRIG1在BIU87细胞中的转染效率为68.27％,在SV-HUC-1细胞中转染率为72.52％,差异无统计学意义(x2=0.075,P=0.784).Ad-Surp-LRIG1和Ad-LRIG1在BIU87细胞中的转染效率相比,差异无统计学意义(x2 =0.016,P=0.898).与PBS液对照组比较,Ad-Surp-LRIG1和Ad-LRIGI均能明显抑制BIU87细胞的生长,转染4d后这一差异有统计学意义(F=15.960,P=0.000),而Ad-Surp-LRIG1组和Ad-LR1G1组细胞生长速度无明显差异.Ad-Surp-LRIG1组肿瘤生长速度明显慢于其他2组,治疗结束后Ad-Surp-LRIG1组肿瘤质量小于其他2组,差异有统计学意义(F=97.860,P =0.000),Ad-LRIG1组与PBS组相比差异无统计学意义(t=1.73,P =0.06).与其他2组比较,Ad-Surp-LRIG1组LRIG1 mRNA表达水平明显升高(F=851.343,P=0.000),而EGFR mRNA表达水平则显著降低(F=591.205,P=0.000).结论 Ad-Surp-LRIG1能选择性转染人膀胱癌细胞BIU87,在体内外均能明显抑制膀胱癌的生长,其机制可能部分与LRIG1能下调EGFR的表达有关.
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妊娠早期阻断协同刺激分子诱导自然流产模型孕鼠脾脏细胞母-胎免疫耐受的研究
目的探讨阻断协同刺激分子--CD80和CD86对自然流产模型孕鼠妊娠结局及孕鼠脾脏免疫细胞对父系抗原免疫耐受状态的影响.方法将雌性小鼠(CBA/J)分别与BALB/c及DBA/2两种雄性小鼠合笼交配,分别建立正常妊娠模型CBA/J×BALB/c(20只,对照组)和自然流产模型CBA/J×DBA/2(20只,研究组).CBA/J小鼠于妊娠第4天(着床期)腹腔分别注射大鼠同型IgG 0.2 mg(10只),或大鼠抗小鼠CD80和CD86单克隆抗体(10只).妊娠第9天,采用单向混合淋巴细胞反应,分析孕鼠脾脏免疫细胞对父系抗原的增殖能力,并测定细胞培养上清液中白细胞介素2(IL-2)水平,以研究脾脏细胞母-胎免疫耐受状态;妊娠第14天观察两组的胚胎吸收率.结果 (1)研究组中,腹腔注射大鼠IgG的孕鼠胚胎吸收率为24.3%,而注射大鼠抗小鼠CD80和CD86单克隆抗体的孕鼠胚胎吸收率为9.8%,两者比较,差异有显著性(P<0.05).(2)应用大鼠抗小鼠CD80和CD86单克隆抗体,使妊娠 9 d的孕鼠脾脏免疫细胞对父系抗原的增殖能力及IL-2水平显著下降(P<0.05).结论孕早期阻断协同刺激分子,可诱导产生孕鼠脾脏免疫细胞对父系抗原的免疫耐受,从而使自然流产模型孕鼠的妊娠结局达到正常妊娠水平.
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内皮前体细胞转染TRAIL基因后治疗卵巢上皮性癌的实验研究
目的探讨内皮前体细胞(EPC)转染TRAIL基因后对卵巢上皮性癌细胞的体外杀伤作用.方法采用细胞表面特异性标志物CD133磁珠分离法,从脐血中分离EPC,并进行体外培养、扩增和鉴定.构建带有TRAIL基因的质粒(即TRAIL质粒),用脂质体将TRAIL质粒转染入EPC,酶标法测定培养上清液中EPC分泌的TRAIL蛋白的表达水平,流式细胞仪分析其对卵巢上皮性癌细胞的促凋亡作用.结果采用磁珠分离法可从脐血中分离出EPC,EPC占分离后细胞总数的(84±3)%.成功构建TRAIL质粒,转染TRAIL质粒后EPC分泌的TRAIL蛋白水平增加,转染72 h时可达532.8 pg/ml;而仅转染脂质体及转染绿色荧光蛋白者为12.4及9.2 pg/ml.将转染TRAIL质粒后的EPC培养上清液与卵巢上皮性癌细胞共同孵育24 h后,卵巢上皮性癌细胞凋亡率高可达24.1%.结论TRAIL基因转染EPC后,可使EPC分泌的TRAIL蛋白水平增加,并诱导卵巢上皮性癌细胞凋亡.提示,EPC可作为基因治疗的靶向性载体,有望应用于卵巢上皮性癌的治疗.
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子痫前期患者胎盘合体滋养细胞中Fas抗原及其配体、胎盘生长因子表达的研究
目的探讨Fas抗原(Fas)及其配体(FasL)、胎盘生长因子(PlGF)在子痫前期患者胎盘合体滋养细胞中的表达变化及其意义.方法采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)连接法检测24例正常晚期妊娠妇女(正常晚孕组)、24例轻度子痫前期产妇(轻度子痫前期组)及24例重度子痫前期产妇(重度子痫前期组)胎盘组织中Fas、FasL及PlGF表达水平.结果Fas、FasL及PlGF主要表达于胎盘合体滋养细胞胞质及胞膜中.FasL、PlGF在轻度子痫前期组(63±4、81±6)及重度子痫前期组(42±6、65±6)胎盘中的表达均低于正常晚孕组(73±9、88±8),分别与正常晚孕组比较,差异均有统计学意义(P<0.01).Fas在轻度子痫前期组(51±4)及重度子痫前期组(67±6)胎盘中的表达均高于正常晚孕组(43±6),分别与正常晚孕组比较,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 Fas、FasL及PlGF在子痫前期胎盘合体滋养细胞中表达失衡,可能与子痫前期的发病及发展有关.
