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miR-29、miR-200a在妊娠期糖尿病者外周血中表达及临床意义
目的:探讨miR-29、miR-200a在妊娠期糖尿病(GDM)患者外周血中的表达特征及临床意义.方法:选取本院接诊的80例GDM患者与80例糖耐量正常孕妇分别作为观察组与对照组,对两组孕妇进行外周血miR-29、miR-200a、miR-375检测,并进行血浆FINS、FPG、2hPG、HbAlc检测.分析miR-29、miR-200a、miR-375与血糖相关指标的相关性.结果:观察组FINS水平低于对照组,FPG、2hPG、HbAlc水平高于对照组(P＜0.05).观察组外周血miR-29表达量低于对照组,miR-375、miR-200a表达量均高于对照组(P＜0.05).相关性分析显示,miR-29表达与FPG、2hPG、HbAlc均呈正相关,与FINS呈负相关(P＜0.05);miR-375、miR-200a表达均与FPG、2hPG、HbAlc呈负相关,与FINS呈正相关(P＜0.05).结论:外周血中miR-29、miR-200a、miR-375表达与血糖相关指标密切相关,miR-29、miR-200a、miR-375表达异常预示着GDM易感性,临床可通过测定外周血miR-29、miR-375表达为临床早期诊断GDM提供一定的参考依据.
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潜伏结核感染者CD4+T细胞miR-29家族、靶基因IFN-γ的表达及生物信息学分析
目的 探讨潜伏结核感染和活动性肺结核感染对患者外周血CD4+T细胞内miR-29家族及其靶基因IFN-γ表达的影响.方法 于2012年3-12月,在山东省潍坊市某两家医院选取调查对象并分为3组:活动性肺结核组(30例)、潜伏结核感染(LTBI)组(25例)和健康对照组(30名).分离纯化3组受试者外周血中的CD4+T细胞；用核酸杂交与荧光定量PCR检测CD4+T细胞内miR-29a、miR-29b和miR-29c的表达；用定量PCR检测miR-29靶基因IFN-γ的表达；用TargetScan与PicTar联合预测miR-29家族的靶基因；用David数据库和Cytoscape软件对miR-29家族的预测靶基因进行基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)生物通路富集分析.结果 miR-29a、miR-29b和miR-29c在活动性肺结核组、LTBI组和健康对照组CD4+T细胞中的表达水平均不同(P ＜0.05):miR-29b和miR-29c在活动性肺结核组的表达(561.63±65.36,281.85±42.78)高于健康对照组(260.74±38.69,128.21±19.98),低于LTBI组(2030.29±321.68,620.93±79.14)；miR-29a在对照组的表达水平(913.95±104.73)高于活动性结核组(323.37±54.38),低于LTBI组(4782.13±567.81).靶基因IFN-γ在3组之间的表达水平亦不同(P ＜0.05):LTBI组(0.45±0.09)低于健康对照组(1.00),而高于活动性结核组(0.11±0.03).miRNA-29家族的预测靶基因的GO功能富集于细胞外基质结构成分、转录调节活性等分子功能方面；在KEGG的通路数据库中,miR-29家族预测靶基因集合显著富集于局部黏附信号通路、调节细胞骨架与mTOR信号通路等方面.结论 LTBI和活动性结核感染明显增加了患者外周血CD4+T细胞内miR-29家族的表达,降低了其靶基因IFN-γ的表达,从而影响了信号通路等生物学过程.
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miR-29下调AKT信号通路中多个基因的表达
目的 AKT信号通路在心力衰竭的病理机制中扮演重要角色,本研究旨在筛选调节AKT信号通路的microRNA,为进一步研究microRNA在心力衰竭发生发展中的作用奠定基础.方法 首先用GeneSet Enrichment Analysis方法及Targetscan和RNAhybrid软件寻找可能调节AKT信号通路的microRNA,然后用双荧光素酶报告系统验证microRNA对AKT信号通路基因3′-UTR的调节作用.结果 Gene Set Enrichment Analysis分析提示:miR-15/16、miR-21、miR-29、miR-103、miR-126、miR-128、miR-129、miR-200和miR-493共9个microRNA家族可能调节AKT信号通路;利用Targetscan和RNAhybrid软件反向验证以上9个候选microRNAs,miR-29与AKT信号通路中的10个基因(TGFβ3、HDGF、VEGF、LEP、PDGFRB、PIK3RI、AKT1、AKT2、AKT3和HIF1A)的3′-UTR杂交分值较高,进一步实验验证发现TGFβ3、VEGF、LEP、AKT1、AKT2、AKT3和HIF1A都是miR-29的靶基因.结论 AKT信号通路中的多个基因都是miR-29的靶基因,可受到miR-29的负调节作用.
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miR-29通过调节抗凋亡蛋白Mcl-1表达参与胃癌细胞多药耐药的发生
目的 研究miR-29在胃癌多药耐药细胞株[SGC7901/长春新碱(vincristine,VCR)及SGC7901/阿霉素(adriamycin,ADR)]及其亲本细胞(SGC7901)中的表达差异,探讨其在胃癌多药耐药发生中的作用及可能机制.方法 qRT-PCR检测miR-29在不同胃癌细胞系中的表达差异,通过细胞转染调控miR-29的表达水平,MTT法检测不同化疗药物对转染后胃癌细胞的IC50值变化;流式细胞术检测细胞凋亡及周期变化;并应用Western blot、双荧光素酶报告基因实验等方法探讨其可能机制.结果 SGC7901/VCR及SGC7901/ADR细胞中miR-29家族(miR-29a/b/c)相对表达量均显著低于其亲本细胞SGC7901(P＜0.05);MTT实验表明,下调miR-29表达后SGC7901细胞对不同化疗药物的IC50值显著增高(P＜0.05);而上调miR-29表达后SGC7901/VCR及SGC7901/ADR细胞对不同化疗药物的IC5o值则显著降低(P＜0.05);流式细胞术检测结果显示,miR-29表达变化可显著改变5-氟尿嘧啶诱导胃癌细胞的凋亡水平(P＜0.05);Western blot、双荧光素酶报告基因实验等证实髓细胞白血病因子-1 (myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)是miR-29直接调控靶基因.结论 miR-29表达下调是人胃癌细胞多药耐药发生的机制之一,其可能与负性调控抗凋亡蛋白Mcl-1表达有关.
关键词： miR-29 胃癌 多药耐药 凋亡 髓细胞白血病因子-1 -
抑制miR-29对胰腺癌PANC1细胞生长、侵袭和转移的影响
目的 观察抑制miR-29对胰腺癌PANC1细胞生长、侵袭和转移能力的影响,探讨其可能机制.方法 以抑制miR-29表达的寡核苷酸(anti-miR-29)及对照寡核苷酸(miR-NC)转染PANC1细胞,构建anti-miR-29-PANC1细胞及miR-NC-PANC1细胞,并采用瞬时转染PUMA-siRNA、E-cadhenn-siRNA或NC-siRNA方法构建共转染的anti-miR-29+PUMA-siRNA-PANC1细胞及anti-miR-29+E-cadherin-siRNA-PANC1细胞.观察各组细胞的克隆形成数,MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭能力,划痕试验检测癌细胞迁移能力.采用anti-miR-29-PANC1细胞皮下注射建立裸鼠移植瘤模型,静脉注射建立肺转移模型,以注射PANC1细胞作为对照.观察移植瘤的生长情况及肺转移结节数量,TUNEL法检测移植瘤的细胞凋亡,免疫组织化学法检测移植瘤的PUMA、E-cadherin表达.结果 PANC1、miR-NC-PANC1、anti-miR-29-PANC1组的细胞存活率分别为100％、(96.8±2.8)％、(24.4±3.2)％;细胞克隆形成数为(213 ±36)、(196±28)、(37±6)个/100倍视野;穿膜细胞数为(56.3±9.6)、(49.8±7.3)、(11.2±3.4)个/400倍视野;细胞的迁移距离为(260±48)、(247±46)、(53±7) μm;细胞凋亡率分别为(1.5+0.9)％、(2.6+0.9)％、(22.4+2.8)％,anti-miR-29-PANC1组细胞与其他2组差异均有统计学意义(P值均＜0.05).anti-miR-29+ PUMA-siRNA-PANC1组的细胞存活率为(84.7±10.9)％,细胞凋亡率为(1.3±0.8)％;anti-miR-29+E-cadherin-siRNA-PANC1的穿膜细胞数为(49.7±6.4)个/400倍视野,细胞迁移距离为(182±36) μm,均消除抑制miR-29表达对PANC1细胞所带来的影响(P值均＜0.05).PANC1、anti-miR-29-PANC1细胞移植瘤的体积分别为(3 800±270)、(1 890±160)mm3,细胞凋亡指数为0.93±0.14、8.26±1.15,肺转移结节为(26.4±6.5)、(8.6±2.7)个,PUMA阳性表达率为(7.2±1.6)％、(43.8±7.6)％,E-cadherin阳性表达率为(8.3±3.6)％、(47.4±5.7)％.anti-miR-29-PANC1组移植瘤体积、肺转移结节较对照组显著减小或减少,而细胞凋亡、PUMA及E-cadherin表达显著增加,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).结论 抑制miR-29表达后PANC1细胞的增殖、侵袭、转移能力下降,其机制可能与上调PUMA及E-adherin表达有关.
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微小RNA29在乳腺癌中的研究进展
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,占女性肿瘤发病率的23%,严重威胁着广大女性的身体健康.目前,亟需寻找新的特异性靶点或方法以便能更好地从基因或细胞水平对乳腺癌进行预防、诊断和治疗.微小RNA (microRNA, miRNA)是一类新发现的内源性非蛋白编码的单链小分子RNA,由约20～25个核苷酸组成,广泛存在于真核生物中.miR-29也属于miRNA,是Lagos-Quintana等[1]于2001年在人HeLa细胞中首次发现的.miR-29表达异常对乳腺癌及多种恶性肿瘤的发生发展会产生重要影响.
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miR-29家族调控乳腺癌形成、发展和转移分子机制的研究进展
微小RNA（miRNA）是体内内源性的非编码小分子RNA，具有转录后水平调节基因表达的能力，并已在肿瘤发生、生长、增殖、进展及转移的各个阶段起关键的调控作用。 miR-29家族包括miR-29a、miR-29b和miR-29c，在乳腺癌中有独特的调控作用。文章就miR-29家族在乳腺癌各个关键阶段调控作用及分子机制，并评价miR-29作为一种新的诊断、预后生物标志物或治疗靶点的应用价值。
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miR-29s通过下调大麻素受体1抑制ACEA促J774A.1细胞迁移的活性
目的 研究miR-29a-3 p、miR-29b-3p和miR-29c-3p是否可以影响J774A.1细胞中大麻素受体1(cannabinoid receptor type 1,CB1)的表达以及其迁移功能.方法 RT-qPCR法检测CB1 mRNA表达;Boyden chamber法检测J774A.1细胞迁移能力的变化.结果 本研究证明了在J774A.1细胞里,CB1的激动剂ACEA(Arachidonyl-2’-chloroethylamide)可以上调CB1 mRNA的表达,而分别转染了miR-29a-3p、miR-29b-3p和miR-29c-3p的mimics后可以抑制这一过程;同时对J774A.1细胞转染miR-29a-3p、miR-29b-3p和miR-29c-3p的mimics可以阻碍ACEA诱导的J774A.1细胞的迁移.结论 miR-29s通过下调CB1的表达抑制了ACEA促J774A.1细胞迁移的活性.
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miR-29家族在深低温停循环相关性神经元损伤中的作用
目的 观察miR-29家族在低温糖氧剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R) HT22细胞中的表达,进而探究miR-29家族在深低温停循环(deep hypothermic circulatory arrest,DHCA)相关性神经元死亡中的特异性作用及其相关机制.方法 将HT22细胞随机分为对照组、低温OGD/R组、类似物组(agomir-NC组、agomir-29a组、agomir-29b组和agomir-29c组)和抑制剂组(antamir-NC组、antamir-29a组、antamir-29b组和antamir-29c组);运用一个密闭容器和一个厌氧产气袋建立OGD/R模型;定量PCR检测HT22细胞内miR-29家族的表达;CCK-8方法检测活细胞数目;Western blot法检测HT22细胞内Bax和PUMA蛋白含量;JC-1和H2DCFDA法分别测定HT22细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量和线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP).结果 低温OGD/R模型中miR-29家族表达显著下降(P＜0.01).miR-29家族过表达显著抑制了低温OGD/R诱导的HT22细胞死亡,以及Bax和PUMA蛋白的表达(P均＜0.01);同时减轻了ROS含量和MMP水平(P均＜0.01).结论 miR-29家族可以通过减轻氧化应激从而对DHCA介导的神经元损伤产生保护性作用.
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LncRNA TCF7通过调控miR-29和激活JAK/STAT2信号通路促进肺癌细胞的恶性生物学行为研究
目的 探讨LncRNA TCF7通过调控miR-29和激活JAK/STAT2信号通路促进肺癌细胞的恶性生物学行为及其机制.方法 qPCR检测TCF7和miR-29在肺癌组织和不同肺癌细胞株中的表达情况;分析TCF7和肺癌患者的临床病理资料之间的关联;双荧光素酶报告基因检测TCF7与miR-29之间的相互作用;MTT增殖实验和Transwell侵袭实验检测抑制TCF7后肺癌细胞的增殖和侵袭能力的变化情况以及过表达miR-29的表达后对肺癌细胞增殖和侵袭能力的恢复情况;Western blotting检测抑制TCF7后JAK/STAT2信号通路蛋白的表达情况;裸鼠体外成瘤实验检测TCF7对体内成瘤的影响.结果 与其他肺癌细胞株相比,A549细胞中TCF7表达高,miR-29的表达水平高;TCF7的表达与肺癌的病理分期相关以及淋巴结转移情况有关,随着分期越高,TCF7在肺癌组织中表达越高,淋巴结转移的患者中TCF7的表达也相对较高;双荧光素酶实验证实TCF7能与miR-29的靶点特异性结合,可以调控miR-29的表达与活性;抑制TCF7的表达后可以促进肺癌细胞的增殖和侵袭能力;同时抑制miR-29的表达水平过后,肺癌细胞的增殖和侵袭能力得到一定程度的恢复;抑制TCF7的表达后,JAK/STAT2信号通路被相应地激活;与NC组相比,TCF7-siRNA组移植瘤的平均肿瘤体积和质量均相应降低.结论 TCF7可以调控miR-29的表达通过JAK/STAT2信号通路影响肺癌细胞的增殖和侵袭能力.
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miR-29在肿瘤中的研究进展
微小RNA（microRNA，miRNA）是生物体内一种重要的基因调控分子，参与多种疾病的发生过程，与肿瘤关系密切，已成为近年来肿瘤学研究的新方向。研究发现，miRNA-29（miR-29）在多种肿瘤中均有涉及，具有抑癌和促癌双重作用，且其表达水平在肿瘤组织和非肿瘤组织中也存在差异。因此，miR-29有望成为恶性肿瘤诊断及预后的生物标记物或治疗靶点。本文就miR-29家族在恶性肿瘤中的研究进展进行综述。
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miR-29靶向调控CDK6对宫颈癌细胞生物学行为的影响
目的 探讨miR-29靶向调控细胞周期蛋白依赖性激酶6( CDK6)对宫颈癌细胞生物学行为的影响.方法 收集20例接受手术且术前未行任何治疗的宫颈癌患者肿瘤组织和癌旁正常组织,经细胞培养生长至80%左右时消化细胞进行传代和冻存.行定量实时聚合酶链反应检测miR-29 在宫颈癌组织与癌旁正常组织中的表达差异;行四甲基偶氮唑盐比色实验检测miR-29对宫颈癌细胞增殖能力的影响,平板克隆实验检测miR-29对宫颈癌细胞凝聚功能的影响;行双荧光素酶实验观察miR-29对CDK6转录活性的影响.结果 miR-29在宫颈癌组织中表达较癌旁正常组织显著降低[(1.23 ±0.45)vs(1.91 ±0.35),P<0.001];LV-miR-29和LV-miR-Ctrl转染Hela、Siha细胞后,MTT实验证实miR-29显著抑制Hela、Siha细胞的增殖能力,平板克隆实验证实miR-29显著抑制Hela、Siha细胞的凝聚能力;双荧光素酶实验结果显示miR-29和CDK6之间有直接的结合位点,miR-29靶向调控CDK6 的转录活性.结论 miR-29 通过靶向调控CDK6 可抑制宫颈癌细胞的增殖和凝聚能力,可能作为新的宫颈癌靶向标志物.
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miR-29在妊娠期肝内胆汁淤积症中的表达及意义
目的 研究miR-29在妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)患者中的表达及其在妊娠期肝内胆汁淤积症中的作用.方法 提取50例ICP患者及50例同期正常妊娠妇女外周血RNA,Realtime PCR检测表达.结果 miR-29在ICP患者中明显高于正常妊娠妇女.血清miR-29水平与ICP患者的年龄、孕周、经产与否、胎数无关,但是与围产儿预后相关.结论 血清miR-29在ICP的诊断和围产儿预后预测中发挥重要作用.
关键词： 妊娠期肝内胆汁淤积症 miR-29 临床意义 -
miR-29与miR-375在妊娠期糖尿病中的表达水平及临床意义研究
目的 探讨妊娠期糖尿病(GDM)患者外周血miR-29、miR-375的表达情况及临床意义.方法 以该院2013年1月～2014年12月期间收诊的135例GDM患者为研究对象,设为研究组,并以同期糖耐量正常的孕妇作为正常组,分别检测血浆空腹胰岛素(FINS)及其外周血miR-29、miR-375的表达水平.结果 ①研究组及正常组的FINS分别为(15.21±5.88) mIU/L和(27.15±11.21) mIU/L (P＜0.01);②研究组外周血miR-29表达量(24.83±11.24)低于正常组(76.01±12.52) (P＜0.05);③研究组外周血miR-375的表达量(66.58±21.56)显著高于正常组(22.54±8.80) (P＜0.05).结论 妊娠期糖尿病患者中miR-29、miR-375的异常表达与GDM易感性有一定相关,二者在GDM的筛查诊治中的作用值得更深层次的探讨研究.
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miRNA-29调节Wistar大鼠脑缺血再灌注损伤的研究
目的:探讨微小RNA29(miR-29)在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型中的保护作用及机制.方法:建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,选择健康成年雄性Wistar大鼠65只,随机分为假手术对照组和缺血1.5h再灌注2h,3h,6h,12h,1d,2d,3d,7d组,每组6只,建立线栓法大鼠脑缺血再灌注模型(MACO),采用定时定量PCR法(real time PCR)比较各组病灶组织的miR-29表达;反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)观察凋亡相关基因Bcl-2表达的动态变化.结果:MACO组脑缺血病灶组织的miR-29表达较假手术组降低,而Bcl-2 mRNA表达水平明显上调(P＜0.05).脑缺血再灌注2h后,大鼠脑缺血周围区出现凋亡细胞,同时Bcl-2 mRNA开始表达,随着缺血再灌注时间的延长呈增高趋势,1d达高峰,7d接近假手术组水平.Wistar大鼠脑部MACO后miR-29显著下降,同时Bcl-2的表达上调(P＜0.05),经回归计算,相关系数R2=-0.9928.结论:miR-29对Bcl-2负调控可能是抑制脑缺血再灌注损伤的一种机制.
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基质金属蛋白酶1、3,基质金属蛋白酶组织抑制剂1和miR-29在大鼠肺纤维化中及活性维生素D3处理后的表达与作用
目的:探讨大鼠肺纤维化发生发展中基质金属蛋白酶1(MMP1)、MMP3、基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)及miR-29的表达和作用以及活性维生素D3[1,25(OH)2D3]处理对这些基因表达的影响.方法:雄性SD大鼠随机分为预防组和治疗组.预防组分为对照组Ⅰ、模型组Ⅰ和给药组Ⅰ,治疗组分为对照组Ⅱ、模型组Ⅱ和给药组Ⅱ.模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ经气管注入博莱霉素,对照组Ⅰ/Ⅱ经气管注入生理盐水.预防组和治疗组分别于术后第2和14天腹腔注射给药,给药组给予活性维生素D3,模型组给予活性维生素D3溶剂,对照组给予生理盐水.预防组的各组分别于术后第14、21、28天处死大鼠取材,治疗组的各组分别于术后第21和28天处死大鼠取材.实时定量PCR检测大鼠肺组织中miR-29a及TIMP1 mRNA表达水平,免疫组织化学检测组织中MMP1、MMP3和TIMP1的表达水平.结果:模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ中的MMP1、MMP3和TIMP1的表达均明显高于相同时间点对照组Ⅰ/Ⅱ中的表达,而miR-29a的表达明显低于相应的对照组Ⅰ/Ⅱ;给药组Ⅰ/Ⅱ中MMP1、MMP3和TIMP1的表达均低于相应时间点的模型组Ⅰ/Ⅱ的表达,而给药组Ⅰ/Ⅱ中miR-29a的表达则高于模型组Ⅰ/Ⅱ中的表达.结论:MMP1、MMP3、TIMP1和miR-29在大鼠肺纤维化发生发展中具有重要作用,活性维生素D3可以促进miR-29表达,抑制MMP1、MMP3、TIMP1的表达;可能是通过miR-29调节包括MMP1、MMP3、TIMP1在内的多种靶基因来发挥抑制纤维化的作用.
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胃癌组织中miR-29的表达及其临床意义
目的:研究胃癌组织中miR-29的表达情况及其与临床病理特征和预后的关系.方法:收集2005年至2010年中国人民解放军第324医院收治的进展期胃癌113例患者的手术标本,定量PCR检测胃癌组织及癌旁组织内miR-29的表达,并分析其与胃癌患者临床病理特征的关系.结果:胃癌组织内miR-29的表达显著低于对应的癌旁组织(2.62±1.17 vs 3.14±1.70,P=0.006),伴淋巴结转移的胃癌患者低表达miR-29百分率显著高于无淋巴结转移组(58.9% vs 32.5%,P=0.007),miR-29低表达胃癌患者中位生存率显著低于miR-29高表达者(33.0 vs 44.0个月,P=0.013).结论:胃癌组织低表达miR-29,miR-29有可能成为胃癌的预后判断指标及治疗靶标.
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miRNA-29c-3p对体外慢性光损伤皮肤成纤维细胞COL1A1和COL3A1基因表达及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白合成的影响
目的 研究miRNA-29 (miR-29)家族对人慢性光损伤(光老化)皮肤Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的影响.方法 将人皮肤成纤维细胞分为未照射组和慢性光损伤组,后者给予长波紫外线(UVA)连续照射以构建慢性光损伤细胞模型,并用流式细胞仪及β半乳糖苷酶染色法验证模型.Western印迹检测两组Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-29家族3个成员(miR-29a-3p、miR-29b-3p和miR-29c-3p)在两组细胞中的表达,选择表达具有显著差异的miR-29c-3p进行功能试验.将人皮肤成纤维细胞分为4组,分别采用荧光标记的miRNA-29c-3p模拟物(过表达组)、抑制物(抑制组)及二者各自的对照RNA寡核苷酸(阴性对照组和抑制对照组)转染各组细胞,观察各组荧光细胞比例,qRT-PCR法检测各组miR-29c-3p的相对表达量,判定干扰效率.采用qRT-PCR法检测转染后4组COL1A1和COL3A1 mRNA水平,Western印迹法检测转染后Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白表达水平.结果 与未照射组相比,慢性光损伤组衰老染色细胞阳性率显著升高(36.47％±3.20％比12.56％±1.46％,P＜ 0.01),G1期细胞比例明显升高,S期细胞比例明显降低(均P＜0.01),慢性光损伤模型成功建立.慢性光损伤组Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白表达(0.40±0,19和0.52±0.10)明显低于未照射组(1.00±0.12和1.00±0.10,均P＜0.01),而miR-29c-3p(4.42±2.05)明显高于未照射组(0.89±0.10,P＜0.05),两组间miR-29a-3p和miR-29b-3p表达水平差异无统计学意义(均P＞0.05).转染后24 h,过表达组和抑制组的转染效率均大于90％,达到干预要求.过表达组miR-29c-3p的表达(224.17±2.00)明显高于阴性对照组(2.45±0.34),而抑制组(0.20±0.08)明显低于抑制对照组(2.24±0.14),干扰模型构建成功.评价转染效率显示,过表达组COL1A1和COL3A1 mRNA和Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达水平均明显低于阴性对照组和抑制组(均P＜ 0.05),而抑制组明显高于抑制对照组(均P＜0.01).结论 miR-29c-3p在慢性光损伤皮肤成纤维细胞中表达上调,可能通过调控COL1A1、COL3A1的表达影响Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白合成.
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妊娠期糖尿病妇女外周血miR-29、miR-375的表达及临床意义
目的:探讨广东省汉族妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)患者外周血miR-29、miR-375的表达情况及临床意义.方法:选取2012年12月～2013年5月在武警广东省总队医院就诊的90例GDM患者和糖耐量正常的孕妇,分别作为GDM组和对照组,检测血浆空腹胰岛素(fast insulin,FINS)及其外周血miR-29、miR-375的表达情况.结果:①GDM组及对照组的FINS分别为(15.67±5.75)mIU/L和(26.23±10.89)mIU/L(P＜ 0.01);②GDM组外周血miR-29表达量(25.16±10.05)低于对照组(75.26±13.43)(P＜ 0.05);③GDM组外周血miR-375的表达量(65.18±22.08)显著高于对照组(21.31±9.56)(P＜0.05).结论:GDM患者中miR-29、miR-375的异常表达与GDM易感性有一定相关.
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促炎性细胞因子对大鼠胰岛β细胞miR-29家族及抗凋亡蛋白表达水平的影响
目的:探讨促炎性细胞因子对胰岛β细胞miR-29家族及抗凋亡蛋白水平的影响.方法:将大鼠胰岛细胞系INS-1细胞在加或不加促炎性细胞因子混合物(IL-1β 10 ng/mL、TNF-α 50 ng/mL、IFN-γ 50 ng/mL)的培养液中培养24 h,设立对照组、促炎性细胞因子干预组.流式细胞仪测细胞凋亡,实时荧光定量PCR检测INS-1细胞miR-29a/b/c表达以及抗凋亡基因骨髓细胞白血病蛋白1 (myeloid cell leukemia 1,Mcl-1)mRNA、B细胞淋巴瘤蛋白2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)mRNA的表达水平,Western blot技术检测Mcl-1、Bcl-2蛋白的表达情况.结果:①促炎性细胞因子干预的INS-1细胞miR-29a/b表达水平较正常对照组增加,差异有统计学意义(P＜0.05),miR-29c表达水平较正常对照组有上升趋势,但无统计学差异(P＞0.05);②促炎性细胞因子干预组INS-1细胞Mcl-1 mRNA、Bcl-2 mRNA表达水平较对照组减少,但差异无统计学意义(P＞0.05);③促炎性细胞因子干预组INS-1细胞抗凋亡蛋白Mcl-1、Bcl-2表达水平较正常对照组明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01);④促炎性细胞因子干预组细胞凋亡率增高,与正常对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:促炎性细胞因子刺激处理的INS-1细胞miR-29a/b表达均上调,抗凋亡蛋白Mcl-1、Bcl-2下调,凋亡率上升,推测促炎性细胞因子可能通过调节miR-29家族及抗凋亡蛋白的表达水平诱导胰岛β细胞凋亡,从而促进1型糖尿病的发生.
