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哺乳动物雄性生殖系及其来源的干细胞系
哺乳动物两性配子(精子和卵子)相互结合形成双倍体合子(也称受精卵),启动新一代个体的整个发育过程,不仅形成子代成体中所有组织的干细胞,而且还形成子代生殖细胞的干细胞.在这个意义上,生殖细胞是物种的"干细胞",是哺乳动物连接亲代与子代的唯一桥梁,它们将遗传信息一代代传递下去,对于种族延续是必需的,又是独一无二的.生殖系中的双倍体细胞在形成单倍体配子的过程中,将发生遗传重组:①同源染色体联会;②同源染色体随机分配.
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基因重组和同源重组技术在生殖工程中的应用前景
从理论上讲,任何外源基因在载体介导下通过基因重组技术和同源重组技术均可以转移至体细胞、生殖细胞或早期胚胎细胞和胚胎干细胞(ES细胞)中.由于早期胚胎细胞具有全能性,因此,经过遗传重组可以获得包括生殖系在内的任何转基因组织.现仅就其应用价值做一简述.
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表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位基因减毒鼠伤寒沙门疫苗菌的构建和鉴定
目的构建表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B亚单位(ureB)基因的重组减毒鼠伤寒沙门疫苗菌.方法用PCR扩增ureB基因,经适当酶切-连接反应将其克隆入高效原核表达质粒pTrc99A,进行基因测序,重组质粒鉴定后再导人减毒鼠伤寒沙门菌SL3261,提取重组疫苗菌质粒,PCR和酶切鉴定,筛选阳性克隆.重组ureB能在宿主菌中表达,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和薄层扫描进行蛋白分析.重组菌C57BL/6小鼠喂灌,分批2 d和10 d后处死小鼠,取脾和末段回肠进行细菌培养,挑菌落提质粒鉴定.结果构建携带ureB的重组原核表达质粒pTrc99A-ureB,并将后者成功转化入减毒鼠伤寒沙门菌SL3261,阳性克隆经PCR和酶切证实.SDS-PAGE电泳和薄层扫描分析表明,重组菌SL3261(pTrc99A-ureB)表达相对分子质量为66×103的ureB,约占菌体蛋白总量的26%.小鼠重组菌喂灌2 d或10 d后,脾和末段回肠均发现携目的基因的菌落.结论构建表达Hp ureB的减毒鼠伤寒沙门疫苗菌,为探索制备Hp口服活疫苗奠定了基础.
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放线菌遗传重组育种研究进展
放线菌是一类革兰阳性菌,能够产生丰富多样的天然产物.传统用于选育高产菌,或产新型天然产物的菌的主要方法是通过诱变育种.近年来,遗传重组技术的发展已有取代传统育种技术的趋势.本文综述了遗传重组技术应用于选育高产放线菌及产新型代谢产物放线菌的研究进展.
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登革病毒中国株E基因重组的生物信息学分析
目的:了解我国登革病毒(Dengue virus,DV)包膜蛋白基因(Envelope,E)重组的发生情况.方法:从GenBank收集共70个DV中国株的E基因序列,Clustal-W比对后,重组检测软件包RDP3检测E基因中可能存在的重组事件,并经Mega4构建系统发生树验证所检测的重组事件的可靠性和真实性.结果:DV-1型中E基因区存在3个重组事件,共4个重组子,分别是1995、1997、1999年和2004年分离的DV病毒株,在其它3个血清型的DV病毒株中没有检测到重组,也未检测到血清型间重组.结论:我国DV 1型血清型E基因区域存在基因重组.
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无精子症患者减数分裂遗传重组的研究
目的 探讨无精子症患者精母细胞减数分裂过程中染色体联会与遗传重组的情况.方法 对7名汉族正常人(对照组)和7例汉族无精子症患者,包括2例梗阻性无精子症(obstructive azoospermia,OA)和5例非梗阻性无精子症(non-obstructive azoospermia,NOA)进行睾丸组织精母细胞免疫荧光染色.联会复合体蛋白3(synaptonemal complex protein 3,SCP3)抗体标记联会复合体,DNA修复蛋白(human mutL homologl,MLHl)抗体定位遗传重组位点.结果 OA组和NOA组偶线期细胞比例较对照组均显著增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).详细分析粗线期精母细胞MLH1位点数目及分布情况,发现NOA组患者中每个细胞MLH1位点数较对照组显著减少(P＜0.05),常染色体上无MLH1位点的染色体数目较对照组显著增加(P＜0.01),含有至少1条染色体臂上无MLH1位点的细胞比例较对照组增高.分析粗线期精母细胞中SCP3形态时发现,NOA患者中SCP3不完全联会的粗线期精母细胞比例显著高于对照组(P＜0.01).结论 无精子症患者减数分裂过程有延迟现象；NOA患者精母细胞遗传重组MLH1位点的数目和分布出现异常,染色体联会不完全现象增加,这些异常事件可能与NOA患者精子发生障碍有关.
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可育男性减数分裂遗传重组分析
目的 探讨可育男性减数分裂前期Ⅰ同源染色体的联会和重组.方法 应用铺展技术制备精母细胞联会复合体,以SCP3抗体、MLH1抗体和CREST抗血清孵育来显示联会复合体侧轴、重组位点和着丝点.结果 5例可育男性中,粗线期细胞的比例介于67%～78%;每个细胞中重组位点数平均为46.1±3.9,范围为34～61,具有显著的个体差异;联会复合体上出现缺口(gap)或未配对区(split)的细胞比例分别为14.3%和2.9%.结论 可育男性的遗传重组频率具有显著的个体差异.
