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抗人Apo B100单克隆抗体的制备及夹心ELISA检测方法的建立
目的:制备抗人载脂蛋白B100( Apo B100)单克隆抗体(mAb),建立入Apo B100双抗体夹心ELISA检测方法.方法:将人Apo B100抗原免疫小鼠,通过细胞融合、筛选后得到杂交瘤细胞株.将细胞株用无血清培养基扩大培养并纯化上清获得抗体,测定抗体亲和力、亚型、特异性及表位,后建立双抗体夹心ELISA方法.结果:获得4株抗人Apo B100的杂交瘤细胞株(4-1-2、4-2-2、4-3-2、4-6-3),其分泌的抗体不与其他相关蛋白交叉反应,亲和力达到1×109 L/mol.用4-3-2和4-6-3建立的双抗体夹心法的检测范围为(1.3 ～80)ng/mL,灵敏度1.24 ng/mL,批内变异系数均小于10％,批间变异系数均小于15％,回收率在90％以上.结论:成功制备了抗人Apo B100 mAb,建立了定量检测人Apo B100的双抗体夹心ELISA方法,为Apo B100检测及疾病的诊断奠定基础.
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用于制备抗体芯片的抗人甲胎蛋白单克隆抗体的制备及特性分析
目的:制备抗人甲胎蛋白(AFP)单克隆抗体(mAb),并用于制备抗体芯片.方法:利用杂交瘤技术建立能稳定分泌抗人AFP mAb的杂交瘤细胞株;对抗体的亲和力、特异性等特性进行分析;利用抗体相加实验,双抗体夹心ELISA、胶体金免疫层析实验以及抗体芯片技术对抗体表位及其配对情况进行分析研究.结果:共获得16株稳定分泌抗人AFP mAb的杂交瘤细胞株,从中筛选出多组性能优良的配对抗体,结合抗体芯片技术,终筛选出适合制备抗体芯片的配对抗体.结论:当抗体包被材料或包被方法发生改变时,会引起mAb构象发生变化,从而影响抗体的配对效果.因此,筛选适合制备抗体芯片的配对mAb时,需要对mAb的特性进行综合分析,选取特异性好,亲和力高的mAb进行配对筛选.
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检测结核分枝杆菌蛋白抗原b夹心ELISA的建立及其应用
目的 建立定量检测脑脊液中结核分枝杆菌蛋白抗原b的夹心ELISA,以便用于诊断结核性脑膜炎.方法 制备抗结核分枝杆菌蛋白抗原b鼠源性单克隆抗体(mAb)及兔多克隆抗体；以单克隆抗体为包被抗体,多克隆抗体为检测抗体,建立检测结核分枝杆菌蛋白抗原b的双抗体夹心ELISA；应用此方法检测正常人(n=6)、非结核性脑膜炎患者(n=26)及临床确诊结核性脑膜炎患者(n=42)的脑脊液标本中蛋白抗原b的含量,并分析其与结核性脑膜炎活动性感染的相关性.结果 成功建立了检测蛋白抗原b的夹心ELISA,敏感度可达0.4 μg/L.应用该方法在正常人及非结核性脑膜炎患者脑脊液中未检测到蛋白抗原b；在结核性脑膜炎患者脑脊液中蛋白抗原b含量显著升高.结论 建立了敏感、特异检测结核分枝杆菌蛋白抗原b含量的ELISA,为活动性结核性脑膜炎的诊断提供一种有效手段.
关键词： 结核分枝杆菌蛋白抗原b 结核性脑膜炎 抗体制备 夹心ELISA -
检测肌糖蛋白C夹心ELISA方法的建立及初步应用
目的:以已经制备的抗肌糖蛋白C(TN-C)的单克隆抗体(mAb)为基础,建立能定量检测肌糖蛋白C浓度的夹心ELISA方法,并初步于临床血清标本检测.方法:将3株mAb(克隆号分别为:1A8、3H7和4D6)制备腹水后纯化,分别与辣根过氧化物酶交联后,两两配对,以重组肌糖蛋白C 蛋白为检测抗原,分析抗体之间佳组合;利用建立的夹心ELISA方法检测收集的临床骨肉瘤患者和正常人血清标本.结果:包被1A8 mAb,HRP-4D6配对敏感性高;骨肉瘤患者血清中肌糖蛋白C浓度明显高于正常人.结论:成功建立检测肌糖蛋白C的夹心ELISA方法,并利用其检测到肌糖蛋白C在骨肉瘤患者中的浓度异于正常人.
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检测马白细胞介素-18双抗体夹心ELISA方法的建立
目的:建立检测马白细胞介素-18(equine interleukin-18,EIL-18)的双抗体夹心ELISA,为马传染病的免疫学研究提供新方法.方法:将识别不同表位的EIL-18的2株单克隆抗体(mAb)B1G1和S6A3纯化后,利用生物素标记试剂盒对B1G1株mAb进行标记,以重组马白细胞介素-18(rEIL-18)为捕获抗原进行ELISA检测来建立EIL-18双抗体夹心ELISA.结果:经过方阵滴定试验确定捕获抗体的佳浓度为4 mg/L,检测抗体的工作效价为1:2 000.建立的方法可检测马血清中的EIL-18,与猪、牛和羊血清中的IL-18不发生交叉性反应,此方法检测敏感度达到15 ng/L,特异性良好. 结论:成功建立了EIL-18的双抗体夹心ELISA,为马细胞免疫学研究提供了方法,也为下一步EIL-18 ELISA试剂盒的商品化开发奠定了坚实基础.
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甲状腺肿瘤患者血清中甲状腺球蛋白含量的检测
甲状腺是人体内重要的内分泌腺,其分泌的主要成份为甲状腺球蛋白(thyroglogulin,TG),TG在甲状腺激素的合成、分泌和贮存过程中起着重要作用.
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可溶型LAIR-1分子在冠心病患者血清中的ELISA检测
白细胞相关免疫球蛋白样受体1(leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor-1,LAIR-1)为Ⅰ型跨膜糖蛋白,属免疫球蛋白超家族(IgSF)成员,1983年首先发现9.1C3/LAIR-1参与杀伤细胞的功能[1],1997年基因克隆成功[2].
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外周血中可溶型P选择素的ELISA检测
P选择素是重要的选择素家族成员, 为高度糖基化的I型穿膜蛋白分子, 主要介导中性粒细胞在活化内皮细胞上的滚动, 在炎症早期甚为重要[1].可溶型P选择素(sP选择素)在正常人外周血中以单体形式存在.主要来源于血小板和内皮细胞[2].本实验以已录取军校学员作为研究对象, 获取外周血血清以夹心ELISA检测sP选择素的含量.
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肺炎球菌1型荚膜多糖多克隆抗体制备与夹心ELISA 法建立及其在多糖浓度测定中的应用
目的：利用肺炎球菌1型全菌体制备多克隆抗体，并且利用该抗体建立肺炎1型荚膜多糖夹心酶联免疫吸附分析法（ Enzyme-linked immunosorbent assay ，ELISA），用于检测发酵和纯化过程中的多糖浓度。方法用灭活的1型肺炎链球菌免疫家兔6周，获得高滴度的抗多糖血清，经过亲和层析纯化，获得高纯度的兔抗肺炎1型多糖抗体IgG。以纯化IgG作为包被抗体，加入多糖样品，再以生物素化的抗体作为检测抗体，建立夹心ELISA法检测肺炎1型多糖浓度。确定标准曲线的佳线性范围，并对该方法进行特异性、准确性和精密度验证。结果兔免疫血清经过双向免疫扩散检测抗体滴度可达1∶32；该方法的线性检测范围为1．56～50 ng/mL；低检测限为3．13 ng/mL。在标准品中混入其他型别多糖或培养基，回收率分别为102％和108％；该方法批内精密度和批间精密度分别为6．08％和7．01％。结论建立的夹心ELISA方法，其特异性、准确性和精密度均良好，可以特异地检测肺炎球菌1型多糖浓度。
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抗百日咳丝状血凝素单克隆抗体的制备、鉴定及其夹心ELISA方法的建立
[目的] 制备抗百咳丝状血凝素(FHA)的单克隆抗体(McAbs),并建立FHA定量检测方法.[方法]采用杂交瘤技术制备McAbs,以间接ELISA法筛选,对获得的稳定杂交瘤细胞株及其分泌抗FHA-McAbs进行了系统的鉴定和纯化,建立定量检测FHA的ELISA方法,并运用建立的ELISA方法测定了国内几大生产厂家送检的无细胞百日咳疫苗原液中FHA含量.[结果] 获得6株分泌抗FHA-McAbs的杂交瘤细胞株,抗体类别均为IgG1(κ),效价达1: 105和1: 106,并能特异识别百日咳丝状血凝素,与流感病毒血凝素及百日咳毒素无交叉反应,建立了检测FHA的ELISA,灵敏度为1.04 μg/L,批内变异系数5.49%,批间变异系数9.31%,平均回收率为94.18%,实验结果显示同一单位送检的每批原液之间FHA含量不是很一致.[结论] 成功地制备了抗FHA-McAbs,建立了一种特异、准确的定量检测FHA的ELISA方法,并用于无细胞百日咳疫苗原液中FHA含量的检测,为无细胞百日咳疫苗的质量控制提供了有力的手段,同时也为以后FHA的研究奠定了基础.
