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铁皮石斛优良亲本杂交F1代苗期选择
目的:揭示铁皮石斛优良种源杂交F1代苗期多糖与生物碱含量变异规律,早期选择F1代优良家系.方法:利用4个种源26个优良亲本设计得到26个交配组合,用苯酚-硫酸法与酸性染料比色法分别测定F1代苗期总多糖与总生物碱含量,结合前期农艺性状研究结果,运用相关性分析和聚类分析方法筛选优良家系.结果:不同交配组合间多糖与生物碱含量差异极显著(P＜0.01),半同胞家系间多糖含量差异显著(P＜0.05),生物碱含量差异不显著,全同胞家系内多糖与生物碱变异显著小于半同胞家系;铁皮石斛苗期叶片数量与多糖含量,叶长宽比、根冠比与生物碱含量呈显著正相关关系;26个交配组合划分为5个类群,其中类群Ⅱ植株综合性状表现较好.结论:铁皮石斛F1代优良家系选择时,应同时重视父母本的选择,在全同胞家系间选择比半同胞家系能获得更好的遗传增益与家系内稳定性;结合前期农艺性状成果,筛选出6个苗期优良家系(66 ×9,68 ×2,91×69,66×65,69 ×91,66×17),表现出苗高,茎粗且分枝少,叶片大而狭长,根系较发达,多糖含量高等特点,为后期选择奠定了基础.
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铁皮石斛挥发油化学成分的SPME-GC-MS分析
目的:对药用植物铁皮石斛的挥发油化学成分进行定性定量分析.方法:采用固相微萃取/气相色谱/质谱( SPME-GC-MS)联用技术对铁皮石斛挥发性成分进行分析,利用面积归一化法测定各个成分的相对百分含量.结果:共分离出19个峰,结合保留指数和匹配度后鉴定了其中的14种化合物,占挥发油总量的78.31%.铁皮石斛挥发油主要含烷烃类、醛类、酮类、烯烃类、醇类和酯类化合物,分别占挥发油总成分的28.57%、28.57%、14.29%、7.14%、7.14%和7.14%.其中的主要成分为反-2-辛烯醛(29.96%)、β-紫罗兰酮(15.78%)、芳樟醇(5.36%)、壬醛(4.39%)、β-环柠檬醛(3.40%)和正癸醛(3.14%).结论:铁皮石解挥发油含有多种生物活性物质,值得进一步开发利用.
关键词： 铁皮石斛 挥发油 固相微萃取/气相色谱/质谱 保留指数 -
铁皮石斛醇提不同萃取物对转化生长因子β1诱导的HSC-T6细胞的影响
目的:探讨铁皮石斛醇提不同萃取物对转化生长因子β1 (TGFβ 1)诱导的HSC-T6细胞增殖及相关细胞因子的影响.方法:建立TGF β1诱导HSC-T6细胞增殖模型,MTT法探讨萃取物对细胞增殖的影响;并采用RT-PCR、ELISA法测定其对细胞相关因子的影响.结果:MTT结果表明,正己烷层、氯仿层、乙酸乙酯层对TGF β1诱导的HSC-T6细胞增殖有显著的抑制作用(P＜0.05).RT-PCR、ELISA结果显示,与模型组比较,正己烷层显著降低α-SMA、CTGF、TβR-Ⅱ的mRNA含量和蛋白表达(P＜0.05),氯仿层能抑制CTGF、TβR-Ⅱ的mRNA含量和蛋白表达(P＜0.05),乙酸乙酯层组抑制CTGF的mRNA和蛋白表达(P＜0.05).结论:铁皮石斛醇提萃取物中的正己烷层可能通过抑制α-SMA、CTGF、TβR-Ⅱ抑制肝星状细胞的活化,氯仿层、乙酸乙酯层可能通过抑制CTGF、TβR-Ⅱ抑制肝星状细胞的活化.
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铁皮石斛内生菌的分离及代谢产物活性的初步研究
目的:分离纯化铁皮石斛的内生菌,对其代谢产物进行抑菌活性和抗肿瘤活性的研究.方法:采用组织块分离法分离铁皮石斛的内生菌,通过形态学观察,初步鉴定分离的内生菌.采用对峙法和牛津杯法分别对内生菌及其发酵代谢产物进行抑菌实验;采用MTT法检测内生菌TG2代谢产物的抗肿瘤活性.结果:共分离得到内生菌31株,其中根9株、茎17株、叶5株.内生菌中真菌22株,细菌9株;且细菌中革兰氏阴性菌7株,革兰氏阳性菌2株.所得31株铁皮石斛内生菌,其中有14株对至少1种供试菌有抑菌作用,占总分离菌株的45.16％.8株内生菌代谢产物的乙酸乙酯相对至少1种供试菌有抑菌作用,占总分离菌株的25.81％.MTT实验表明,内生菌TG2代谢产物具有良好的抗肿瘤效果,且呈剂量依懒性.结论:铁皮石斛含有丰富的内生菌资源,部分内生菌具有代谢抑菌和抗肿瘤活性物质的特性,这可为寻找新型抑菌抗肿瘤物质提供资源.
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人工栽培铁皮石斛种质资源遗传多样性的SCoT分析
目的:将目标起始密码子多态性分子标记(SCoT)技术应用于铁皮石斛的遗传多样性研究.方法:采用SCoT分子标记技术和非加权平均距离法(UPGMA)对20份不同来源的人工栽培铁皮石斛样品进行遗传多样性分析.结果:从备选的56个引物中筛选出20个SCoT引物,对共扩增共获得226个条带,平均每个引物产生11.3个条带,其中多态性条带204条,多态性比率达到90.3％.结论:本实验发现不同来源的铁皮石斛人工栽培种存在较大的遗传差异,目前药材市场中的人工栽培铁皮石斛遗传多样性丰富,SCoT技术可有效应用于铁皮石斛的遗传多样性研究.
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铁皮石斛的药理研究新进展
铁皮石斛为兰科植物的干燥茎,是中医传统的养阴药物,具有良好的补益功能和清虚热、降虚火作用.近年来对铁皮石斛的药理研究较多,在临床上有新的应用和发现,主要表现在其抗肿瘤、抗氧化、抗疲劳、增强免疫以及对体内糖和脂类、消化系统的影响等方面的作用,本文就铁皮石斛在药理研究方面的新进展进行总结.
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超微铁皮石斛对脾虚便秘小鼠血常规的影响
目的：观察超微铁皮石斛对脾虚便秘小鼠血常规的影响,以期揭示超微铁皮石斛对脾虚便秘的疗效作用机理。方法通过灌胃番泻叶水煎液7 d,控制饮食、饥饱失常8 d建立小鼠脾虚便秘模型,造模成功后,灌胃给药铁皮石斛传统汤药和50%量超微汤药,治疗7 d,以灌胃等量无菌水的正常组和模型组做对照。眼球采血,用CA-500血液自动分析仪进行检测,观察其对血常规的影响。结果经铁皮石斛治疗后,血小板数量和比容显著高于正常组(P＜0.01,P＜0.05)；红细胞数量和比容增加；红细胞体积分布宽度降低；血红蛋白含量、白细胞和淋巴细胞数量均降低；红细胞平均血红蛋白含量和浓度均降低,但仍显著高于正常组(P＜0.01,P＜0.05)。超微50%量组红细胞数量和比容显著高于模型组(P＜0.05),达到正常组水平；白细胞和淋巴细胞数量显著低于模型组和传统汤组(P＜0.01,P＜0.05),与正常组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。结论铁皮石斛超微50%量汤药总体疗效优于传统汤药。
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湖南铁皮石斛营销前景分析及策略研究
铁皮石斛是我国传统珍稀名贵中草药之一，具有滋养阴津、增强体质、补益脾胃、护肝利胆、强筋降脂、降低血糖、抑制肿瘤、明亮眼睛、滋养肌肤、延年益寿等多种功效。利用SWOT分析法，分别从铁皮石斛的优势、劣势、机遇和挑战几方面对铁皮石斛在湖南省的营销前景进行全方位分析，并在此基础上提出促进铁皮石斛在湖南发展的前期策略和后期策略，以充分发挥铁皮石斛的药用价值、经济价值和社会价值。
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湖南开发铁皮石斛中医药文化旅游产品潜力分析
铁皮石斛是一种名贵中药材，在抗衰老、抗肿瘤、降低血糖等方面有较好的作用，被列为中华“九大仙草”之首，具有很强的中医药文化特色。湖南在铁皮石斛种植、加工及文化基地建设等方面已取得很好成绩，进一步将铁皮石斛与中医药文化融合发展，能够开发出一系列具有携带方便、服用习惯、适用人群广等特点的中医药文化旅游产品。合理地将铁皮石斛种植与生态休闲有机结合，加强铁皮石斛科普馆建设，将“现代养生宜养阴”当代养生观纳入湖南中医药文化旅游的重要内容之一，具有很好的旅游产品开发潜力，符合现代人们生活的需要，有望带动湖南旅游产业的发展。
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石斛属RAPD分析及鉴定铁皮石斛的特异性引物设计
目的：对石斛属植物亲缘关系进行分析，并设计一对能方便准确地鉴别铁皮石斛的特异性引物。方法：用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术对石斛属内26个种和金石斛属的1个种进行了基因组DNA多态性分析，并构建聚类树状图。根据筛选到的DNA片段序列，将Sangon18引物从3'端延长至20 bp,得到所要的特异性引物。结果和结论：设计成的特异性引物能方便快捷地鉴别出铁皮石斛。此技术为药材的分子鉴定提供了一个新思路。
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铁皮石斛降血糖作用及其机制的研究
目的:研究铁皮石斛的降血糖作用及其机制.方法:采用正常小鼠,肾上腺素性高血糖小鼠,链脲佐菌素性糖尿病(STZ-DM)大鼠,用放射免疫分析和免疫组化HRP-SPA染色等方法进行研究.结果:铁皮石斛对正常小鼠血糖及血清胰岛素水平无明显影响,但可使STZ-DM大鼠的血糖值降低、血清胰岛素水平升高、胰高血糖素水平降低.免疫组化染色显示,给药大鼠胰岛β细胞数量增多,α细胞数量减少.它还可使肾上腺素性高血糖小鼠血糖降低、肝糖原含量增高.结论:铁皮石斛对肾上腺素性高血糖小鼠及STZ-DM大鼠有明显的降血糖作用.其降血糖的胰内机制是促进胰岛β细胞分泌胰岛素,抑制胰岛α细胞分泌胰高血糖素,胰外机制可能是抑制肝糖原分解和促进肝糖原合成.
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丹霞地貌生境中铁皮石斛的繁殖生物学研究
目的:揭示丹霞地貌生境中铁皮石斛的繁育系统及濒危机制.方法:对该地区铁皮石斛的生境、生长特性、开花物候、繁殖特性以及资源破坏状况等进行了调查.结果:丹霞地貌铁皮石斛生长环境恶劣,春季为其生长高峰;2～3年生茎开花,花后及时授粉,结实率较高;授粉后4～5 d子房开始膨大,果实成熟期为185 d左右;自然有性繁殖的结实率(0.31%)极低;无性克隆繁殖1丛仅1年生1茎.结论:丹霞地貌生境下铁皮石斛群体自然更新主要是通过分蘖繁殖实现的;人为掠夺性采集是该地区铁皮石斛野生资源濒危的主要因素.
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F型、H型居群的铁皮石斛rDNA ITS区序列差异及SNP现象的研究
目的:研究铁皮石斛主产区F型和H型居群rDNA ITS碱基序列的差异.方法:运用PCR直接测序法对广西、贵州、云南铁皮石斛主要居群的rDNA ITS区(包括ITS1,5.8S rDNA,ITS2)碱基序列进行了序列测定.结果:在铁皮石斛各居群中,F型居群与H型居群植株的rDNA ITS区碱基序列有2个位点差异,且变异分别发生在ITS1区及5.8S区内.研究表明:铁皮石斛居群内部rDNA ITS区的差异与植物生活型的差异呈一定的相关性, H型居群的铁皮石斛是F型的变种.在F型与H型居群间,其5.8S rDNA区存在单核苷酸多态(SNP)现象.首次报道了铁皮石斛ITS区的碱基序列,ITS区总长度为634 bp,其中ITS1为231 bp,5.8S为163 bp,ITS2为240 bp.结论:rDNA ITS区碱基序列的比较分析进一步证明铁皮石斛F型居群与H型居群间具有显著的差异性.
关键词： 铁皮石斛 rDNA ITS区 DNA序列 单核苷酸多态(SNP) 居群差异 -
铁皮石斛的种胚萌发及其离体繁殖研究
目的:研究铁皮石斛种胚萌发和快速繁殖的组织培养技术,为铁皮石斛的繁殖建立佳培养条件.方法:以成熟的铁皮石斛种胚为研究材料,以1/2MS为基本培养基,接种到含有不同植物生长物质BA(6-苄基腺嘌呤)和NAA(萘乙酸)组合及含有马铃薯提取液、香蕉提取物及活性碳的培养基上,诱导铁皮石斛种胚的萌发、原球茎增殖、分化及试管苗生根.结果与结论:添加20%马铃薯液有利于种胚的萌发,种胚萌发率为79.37%;BA 1.0mg·L-1和NAA0.1mg·L-1有利于原球茎增殖,培养基中添加2%活性碳原球茎增殖倍数高;NAA有助于试管苗的生根,不同含量NAA以0.5mg·L-1时试管苗平均根数多和平均根长长.
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铁皮石斛中11种金属元素含量的研究
目的:全面了解不同种质、采收年龄以及市场销售的石斛类药材中11种金属含量与变异规律,为铁皮石斛药材质量评价与优质药材培育提供依据.方法:采集浙江人工栽培骨干基地一至三年生铁皮石斛11个种质32个样品,购买市场销售的石斛类药材11个样品;经湿法消化后采用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)、原子吸收光谱法(AAS)测定11种金属元素含量.结果:铁皮石斛中钾、钙、镁、锰、锌、铬、铜平均质量分数分别为1205.23,766.82,158.25,31.06,4.28,8.28,0.97mg·kg(-1),砷、汞、铅、镉4种重金属元素含量除1个样品镉元素超过限量指标0.07 mg·kg(-1)外,均在规定限度范围内;种质与生理年龄对金属元素的积累存在显著的影响.结论:铁皮石斛含有丰富的人体必需金属元素,浙江产的铁皮石斛与市场销售的石斛类药材重金属限量指标整体上是安全的;通过品种选育可望增加人体必需的金属元素含量,降低有害金属元素含量;生理年龄对金属元素的影响与各种元素承担的生理生化作用有关.
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铁皮石斛对异丙肾上腺素诱导心肌肥厚的保护作用
该文研究铁皮石斛对异丙肾上腺素(ISO)诱导的大鼠心肌肥厚影响及其作用机制.取健康SD大鼠60只,雌雄各半,随机分为5组,每组12只,即正常组,模型组,铁皮石斛样品低、中、高剂量组(0.09,0.18,1.1 g·kg-1).除正常组外,其余各组每天背部皮下注射ISO(5 mg·kg-1)连续10 d,在注射ISO的同时,样品组开始灌胃给予不同剂量的铁皮石斛样品共30 d,模型组给予同等量的生理盐水.颈总动脉插管检测各组左心室收缩压(LVSP)、计算左心室(LW)/胫骨长、心脏质量指数(HWI)和心肌羟脯氨酸含量(Hydro);心肌组织HE染色观察心肌结构,MASSON染色观察心肌纤维化程度;酶联免疫分析(ELISA)检测血浆中心房利尿肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、心肌肌钙蛋白I(cTN-I)浓度.结果显示,与正常组相比,ISO诱导大鼠心肌肥厚明显,且血浆中ANP、BNP和cTN-I的水平显著上升(P<0.05);与模型组相比,铁皮石斛样品能显著抑制ISO诱导的心室压力升高(P<0.05)和心室肥厚,改善心肌纤维化,减少心肌胶原合成(P<0.05),同时显著下调血浆ANP,BNP和cTN-I的水平(P<0.05).结果提示,铁皮石斛对异丙肾上腺素诱导的心肌肥厚具有保护作用.
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铁皮石斛专属性成分的分离制备及质量标准研究
采用色谱和光谱技术首次从铁皮石斛追踪分离并鉴定专属性成分佛莱心苷.对铁皮石斛药材粉末特征进行描述.采用薄层色谱法对铁皮石斛中佛莱心苷进行定性分析,硅胶SGF254薄层板,展开剂乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(4∶3∶1∶1),显色剂三氯化铝,结果铁皮石斛中佛莱心苷的薄层色谱鉴别特征明显,具有一定专属性,可实现铁皮石斛药材与易混淆的齿瓣石斛、杯鞘石斛、兜唇石斛等石斛的加工品区分鉴别.对铁皮石斛的粉末特征进行描述.采用高效液相色谱法对铁皮石斛药材中的活性成分柚皮素进行定量分析,Bischoff Chromatography HIPAK NC-04 ODS AB色谱柱(4.4mm×250mm,5μm),流动相乙腈-0.1％磷酸梯度洗脱,检测波长226 nm,柱温25℃;结果柚皮素的定量测定在3.90～250.00 mg·L-1呈良好的线性关系,r =0.999 9;平均回收率99.20％(RSD 0.17％),20批铁皮石斛药材质量分数在0.190～0.498 mg·g-1.所建立的定性和定量方法简单灵敏,准确可靠,重现性好,为提高铁皮石斛的质量控制方法提供了实验依据,对于保证其质量和临床疗效具有重要意义.
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铁皮石斛种质和附生立木对其内生真菌菌群的影响
为探讨铁皮石斛种质、附生立木对其内生真菌物种多样性及分布状况的影响.该研究分别从不同附生立木和不同种质铁皮石斛的根、茎、叶中分离到内生真菌3 835株,根据菌株的培养特征及5. 8S和ITS区片段序列相似性比较和系统发育分析,将其鉴定为152个分类单位,归属到2个门5个纲21个目35个科60个属.结果表明,立体栽培铁皮石斛内生真菌具有极为丰富的物种多样性,内生真菌的优势类群在临安和义乌两地的分布存在较大差异,存在具有地理特异性的优势类群, Arthrinium,Coniochaeta,Fusarium,Neofusicoccum,Zopfiella仅为临安潘山的优势属,Alternaria,Bjerkandera,Cercophora,Nigrospora, Trichoderma仅为义乌上溪的优势属;种质、附生立木对铁皮石斛内生真菌丰富度及多样性无显著影响,而组织类型对其有显著影响(P＜0. 05);种质、附生立木对菌种组成和分布的影响小于组织类型,大部分菌种具有组织特异性;不同种质、附生立木铁皮石斛内生真菌优势类群相对频率均存在一定的差异,具有种质、附生立木特有的菌种,这可能与种质遗传背景、附生立木上微环境差异导致铁皮石斛生长性状、化学成分等差异有关.研究结果为立体栽培模式下铁皮石斛与内生真菌的相互关系研究提供基础.
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开花对铁皮石斛多糖质量分数及单糖组成的影响
目的:揭示开花对铁皮石斛多糖质量分数及单糖组成的影响,为优质铁皮石斛培育提供依据.方法:采集铁皮石斛开花前样品、开花结束时经人工摘除花蕾与未摘花蕾的样品,采用苯酚-硫酸法测定铁皮石斛中多糖质量分数,柱前衍生HPLC检测多糖中的单糖组分.结果:摘花蕾样品与未摘花蕾样品比较,总多糖及多糖中的甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖绝对量分别高30.35％,26.44％,20.78％,57.80％,木糖,阿拉伯糖分别低28.33％,24.37％,半乳糖差异不显著.结论:开花显著消耗铁皮石斛药材中的多糖及多糖中甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖的量,而开花过程可能有利于木糖、阿拉伯糖积累.
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铁皮石斛叶片多糖和醇溶性浸出物动态积累规律研究
该文通过揭示铁皮石斛叶片多糖和醇溶性浸出物含量的动态变化规律,为铁皮石斛叶片资源的开发利用提供依据.采用苯酚-硫酸法和醇溶性浸出物热浸法测定铁皮石斛3个优良品系不同月份的叶片中多糖和浸出物含量.结果表明,铁皮石斛叶片多糖质量分数为4.45％ ～ 12.17％,约为茎的1/4,醇溶性浸出物质量分数为7.45％ ～29.34％,约为茎的1.5倍.铁皮石斛叶片多糖含量变化与物候期密切相关,冬季、萌芽初期和落叶期植株代谢水平降低,叶片多糖含量减少;植株生长旺盛期,叶片多糖含量较高.叶片中浸出物含量在萌芽前达到高值,促进了新芽的萌动.
