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HPAEC-PAD法测定石斛属植物单糖组分与主成分聚类分析
目的:建立一种高效阴离子交换色谱-脉冲安培(HPAEC-PAD)检测方法,直接用于检测石斛属植物单糖组分,并对其进行主成分聚类分析.方法:通过单因素试验筛选石斛多糖水解条件,使用DIONEX-ICS-5000*型离子色谱进行检测,梯度洗脱;并通过主成分聚类分析20种石斛属植物.结果:建立的HPACE-PAD法能在15 min之内实现7种单糖(甘露糖、鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、果糖、乳糖)的分离,精密度、稳定性、重复性RSD＜5.0％,各成分平均加样回收率为141.95％,平均RSD 3.4％;对单糖组分分析结果表明,单糖组分差异显著,高相差961倍,低相差38.5倍;20种石斛均检测出甘露糖、鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖和木糖,球花石斛、滇金石斛、尖刀唇石斛3种未检测出果糖和乳糖;长距石斛、长苏石斛未检测出果糖;景洪石斛、小黄花石斛、玫瑰石斛未检测出乳糖;通过主成分聚类分析,能将铁皮石斛、鼓槌石斛、金钗石斛、线叶石斛、姬竹叶石斛、小黄花石斛、玫瑰石斛、长苏石斛、长距石斛、尖刀唇石斛、蜻蜓石斛、滇金石斛、景洪石斛聚为一类,此类单糖组分含量较低,其他石斛种含量相对较高.结论:建立的HPAEC-PAD法灵敏度高、重复性好,样品处理简单,分析快速准确,仪器使用便利,可用于石斛单糖或其他植物、微生物单糖组分测定,为石斛多糖成分质控提供参考,通过组分分析也为高多糖种质选择、选育提供重点关注材料.
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基于ITS序列的中国药用石斛及其混伪品的分子鉴定
目的:通过测定17种药用石斛的rDNA ITS全序列,构建分子系统树,在分子水平对待检种进行鉴别,为石斛的分子鉴定提供依据.方法:采用改良的CTAB法提取石斛叶片DNA,PCR扩增rDNA ITS区全序列,产物回收纯化后直接测序,运用Bioedit,MEGA 4.0等软件分析石斛属植物的rDNA ITS序列的特征.结果:建立了17种药用石斛rDNA ITS区碱基全序列数据库,其中,ITSl的长度为228～234 bp,GC量为45.7%～53.0%,变异位点167个,占总位点67.34%,信息位点106个,占总位点42.74%;ITS2长度为241～247 bp,GC量为44.8%～55.7%,变异位点165个,占总位点66.27%,信息位点115个,占总位点46.18%.属间的遗传距离为0.295,石斛种间的平均遗传距离为0.142,种内各居群间的平均遗传距离为0.002.结论:利用17种石斛的全序列数据库及遗传分析软件,通过对待检种rDNA ITS区进行序列测定,可以在分子水平对石斛不同种质进行鉴别,为石斛的分子鉴定提供依据.
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石斛属RAPD分析及鉴定铁皮石斛的特异性引物设计
目的：对石斛属植物亲缘关系进行分析，并设计一对能方便准确地鉴别铁皮石斛的特异性引物。方法：用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术对石斛属内26个种和金石斛属的1个种进行了基因组DNA多态性分析，并构建聚类树状图。根据筛选到的DNA片段序列，将Sangon18引物从3'端延长至20 bp,得到所要的特异性引物。结果和结论：设计成的特异性引物能方便快捷地鉴别出铁皮石斛。此技术为药材的分子鉴定提供了一个新思路。
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石斛总DNA的提取及鉴定
目的:探讨不同DNA提取方法对石斛属DNA质量及分子标记结果的影响.方法:对提取的DNA进行紫外光谱分析、总DNA电泳及RAPD分析.结果:不同方法提取的DNA质量及产率存在显著差异,对RAPD结果影响很大.结论:石斛属植物在DNA提取前加入无CTAB缓冲液抽提多糖等杂质,可获得较高质量的DNA.
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兜唇石斛酚类化学成分研究
目的:对兰科石斛属植物兜唇石斛Dendrobium aphyllum的酚类化学成分进行研究.方法:采用硅胶、凝胶及反相柱色谱和重结晶等技术进行分离纯化,并根据理化性质和波谱数据并参考文献鉴定化合物结构.结果:分离并鉴定了11个芳香族类成分,其中9个为芪类化合物:4,4'-二羟基-3,3',5-二甲氧基联苄(1),3',4-二羟基-3,5'-二甲氧基联苄(2),3,3'-二羟基-5-甲氧基联苄(3),3,4,5-三羟基-3-甲氧基联苄(4),3,5,4'-三羟基联苄(5),3,5-二甲氧基4,4'-二羟基-联苄(6),2,5-二羟基4-甲氧基菲(7),2,4,7-三羟基-9,10-二氢菲(8)和2,5-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲(bircinol,9)和2个苯乙烷类衍生物:对羟基苯乙醇葡萄糖苷(10)和对羟基苯乙酸(11).结论:以上化合物均为首次从该种植物中分离得到,化合物10,11为首次从石斛属分离得到.
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11种石斛植物的FTIR直接测定和主成分分析
目的:建立中药材石斛的分析方法.方法:采用直接测定法测得了样品的FTIR,并结合主成分分析法进行排序比较.结果:发现石斛的不同种类具有一定的相关性,从石斛的茎上部发现新鲜石斛与干燥品有较大区别,这可能与新鲜石斛含有较多黏液质及水分有关;茎中、下部分析结果中滇桂石斛与其他石斛有差别.结论:可以采用FTIR直接测定法并结合主成分分析法分析石斛的数据特征,本法简便、快速、准确.
关键词： 石斛属 傅里叶变换红外光谱法 主成分分析 -
金钗石斛试管苗仿野生栽培技术研究
金钗石斛Dendrobium nobile Lindi为兰科石斛属多年生附生草本植物,是我国传统的名贵中药,在<神农草本经>中,石斛列为上品,具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳、明目强身等功效,现代药理研究表明,石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强机体免疫力、扩张血管及抗血小板凝集等作用,在临床上和中药复方中被广泛应用.
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兰科石斛属植物分子生物学研究进展
随着分子生物学技术的进步,石斛属植物在分子方面的研究快速发展,不仅为石斛属植物的快速鉴别提供了新途径,较全面的揭示了其种群的遗传多样性和亲缘关系,更为揭示石斛属植物生长发育、代谢调控机制奠定了重要的分子基础.鉴于此,该文从分子鉴定、遗传多样性、功能基因等方面对近年来石斛属植物分子生物学方面的研究现状进行综述,以期为该领域的进一步研究及石斛属植物的有效保护、开发和利用提供理论依据.
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中国石斛类药材的原植物名实考
该文简述了中国石斛类药材原植物的名实考证结果,并重点阐述了细茎类石斛植物的分类处理结果.梵净山石斛Dendrobium fanjingshanense、曲茎石斛D.flexicaule、河南石斛D.henanense、霍山石斛D.huoshanense、广东石斛D.kwangtungense、细茎石斛D.moniliforme、铁皮石斛D.officinale、琉球石斛D.okinawense、滇桂石斛D.scoriarum、始兴石斛D.shixingense、大花石斛D.wilsonii等11种石斛属植物得到确认,建议铁皮石斛使用名称Dendrobium officinale.
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基于DNA条形码分析的霍山石斛及其常见混伪品的初步研究
该研究选择叶绿体基因rbcL,matK及核基因组ITS2序列初步探讨石斛属植物的系统发育关系,筛选可用于石斛属药用植物鉴定的DNA条形码通用序列,分析应用DNA条形码对霍山石斛及伪品进行品种鉴定的可能性.使用ITS2,rbcL,matK序列的通用引物对石斛属植物进行扩增测序,通过比较各序列的扩增和测序成功率,种内和种间的变异等指标,运用Bi-oEdit,MEGA 5.0等软件分析序列,构建NJ分子系统树,进而评价不同序列的鉴定能力.结果表明ITS2序列不仅在石斛属种内变异和种间变异大,而且有明显的条形码间隙,种内变异和种间变异重合较少,ITS2序列不同石斛种形成单系分支的百分比也高,能较好地区分不同种类的石斛.rbcL和matK序列扩增成功率低、NJ系统树可靠性不高,rbcL和matK序列构建的系统树中形成单系的物种支持百分比例均较低.因此ITS2序列可以作为DNA条形码用来鉴别霍山石斛和铜皮石斛、铁皮石斛.
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石斛与铁皮石斛关系的本草考证
该文通过历代"本草"有关"石斛"基原、产地与质量和性状描述的考证,根据 "石斛生六安、温台为上""味甘,平……""股短""细实"或"中实"等稳定的产地分布与性状描述,认为历代"本草"所指的优质"石斛"主要指石斛属的"铁皮石斛Dendrobium catenatum(D.officinale)"与"霍山石斛D.houshanense".针对铁皮石斛曾使用的D.candidum,D.officinale,D.catenatum 3个拉丁学名,通过名实考证,其学名应为D.catenatum,D.officinale为其后出同名,考虑到D.officinale已被广泛使用并约定成俗,建议将其作为保留名,并以"铁皮石斛"作为中文的通用名称.
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野生鼓槌石斛引种和栽培技术
鼓槌石斛Dendrobium chrysotoxum Lindl为兰科石斛属附生植物,以鲜茎或干燥茎入药,是我国民间习用药用石斛种类之一.鼓槌石斛除了具有生津益胃、清热养阴之功效外,传统上还用于治疗热病伤津、口干烦渴、病后虚热、阴伤目暗等.
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五种药用石斛内生真菌抑制HIV-1整合酶活性研究
目的 评价5种药用石斛内生真菌发酵产物抑制HIV-1整合酶的活性.方法 将分离自石斛的202株内生真菌提取物共404个采用高通量ELISA法评价其抑制HIV-l整合酶活性；对抑制活性大于100％的样品进行量效关系考察并进行体外抑制肿瘤细胞活性筛选.结果 筛选得到19个对HIV-l整合酶抑制活性大于80％的样品,其中样品5119F、5297F、5097F、5140J和5211F的抑制率分别达到117.96％、113.53％、108.62％、103.74％和109.02％,其对应的IC50值分别为0.02024、0.003125、0.00862、0.01007 和 0.01192 mg/ml.结论石斛属药用植物内生真菌是一个潜在的、丰富的用于筛选HIV-1整合酶抑制剂的资源库,值得进一步研究和开发.
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春石斛养育盆中的美丽
由于春石斛的美丽,很多人都想搞清它的来龙去脉.要弄明白这一点,还得从石斛属说起.
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中药黄草石斛rDNA ITS序列分析
目的研究黄草石斛ITS片段遗传多样性,分析该片段在黄草药材DNA分子鉴别和石斛属植物系统学研究中的意义.方法用一对引物进行PGR扩增,扩增产物纯化后用双脱氧终止法(Sanger dideoxy)测序.结果获得核糖体DNA中ITS和5.8S rDNA完整序列,14个石斛类群的ITS 1与ITS 2序列的长度分别为228-233 bp和242-247 bp.石斛种间ITS 1序列的差异百分率为11.79%-31.58%,ITS 2序列的差异百分率为10.29%-25.30%,金钗石斛种内ITS 1序列的差异百分率为0.87%,ITS 2序列无差异.石斛各类群与外类群的差异百分率ITS 1序列为23.56%-36.89%,ITS 2序列为26.52%-33.31%.用M法根据ITS 1与ITS 2序列数据重建系统发生树.结论两段序列在石斛种内保守,在种间有较大的差异,与外类群的差异大,可作为中药黄草石斛分子鉴定的标记,而石斛属的系统发生关系尚须进一步研究.
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枫斗类石斛rDNA ITS区的全序列数据库及其序列分析鉴别
目的建立枫斗类石斛的rDNA ITS区碱基全序列数据库,利用该数据库对枫斗类石斛待检种进行准确鉴别.方法对枫斗类石斛的rDNA ITS区进行了PCR扩增、测序,运用CLUSTRAL,MEGA等软件以及枫斗类石斛rDNA ITS区全序列数据库对待检种rDNA ITS区进行序列分析鉴别.结果建立了21种枫斗类石斛的rDNA ITS区全序列数据库, 枫斗类石斛在该区的种间差异显著而稳定,转换和颠换总数为11～122,变异位点数为341,信息位点数为195.与外类群植物云南石仙桃间的差异较大,转换和颠换总数为131～161.枫斗类石斛居群间的差异较小,转换和颠换总数为0～6.结论利用枫斗类石斛的全序列数据库及遗传分析软件,通过对待检种rDNA ITS区进行序列测定,可以成功鉴别属于数据库中枫斗类石斛的待检种.
关键词： 石斛属 枫斗类石斛 rDNA ITS区全序列 DNA分子鉴别 -
枫斗类石斛cpDNA psbA-trnH的序列分析与鉴别
本研究对常见枫斗类石斛cpDNA的psbA-trnH区进行了测序,利用MEGA 4.0对该区序列进行了比较分析.结果显示:15种常见的枫斗类石斛的psbA-trnH序列长度为721～767 bp,变异位点42个,简约信息位点11个.以Kimura-2参数计算遗传距离,常见枫斗类石斛的种间遗传距离为0.001 3～0.018 3,平均遗传距离为0.014 8.不同石斛种间均存在序列差异,全序列中共出现6处indels,导致种间片段长度差异较大;暂未发现所检测的枫斗类石斛居群间在psbA-trnH区的序列存在差异.利用枫斗类石斛psbA-trnH序列数据库及遗传分析软件,通过对待检种的psbA-trnH序列的测定,成功鉴别了待检种.cpDNA的psbA-trnH区可作为枫斗类石斛分子鉴别的候选标记.
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基于叶绿体psbK-psbI序列的石斛属药用植物鉴定
本文对18种石斛属药用植物及其混伪品的叶绿体psbK-psbI序列进行PCR扩增和测序,比较分析其序列特征.石斛属药用植物叶绿体psbK-psbI基因间隔区长度为474～513 bp,GC含量25.4％～27.6％,变异位点71个,简约信息位点46个.石斛属种间K2P遗传距离为0.006 1～0.058 1,平均为0.0284,与混伪品密花石豆兰之间K2P遗传距离为0.093 2～0.1204.石斛属种间均能在NJ树中明显区分,6份待检样品均成功鉴定.叶绿体psbK-psbI序列可作为石斛属物种分子鉴定的候选标记.
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铁皮石斛化学成分的研究
目的 研究铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)的化学成分.方法 采用反相硅胶色谱柱色谱、聚酰胺色谱柱色谱、凝胶色谱柱色谱等方法分离化合物,运用现代光谱技术鉴定化合物结构.结果 从铁皮石斛中分离得到7个化合物,分别鉴定为:apigenin-6,8-di-C-β-D-glucopyranoside(Ⅰ),apigenin-6-C-α-L-arabinopyranosyl-8-C-β-D-xylopyranoside(Ⅱ),apigenin-6-C-(2"-O-β-D-glucopyranosyl)-α-L-arabinopyranoside(Ⅲ),apigenin-8-C-(2"-O-β-D-glucopyranosyl)-α-L-arabinopyranoside (Ⅳ),quercetin-3-O-β-D-rutinoside(Ⅴ),D-sucrose(Ⅵ),β-sitosterol-3-O-β-D-glucopyranoside(Ⅶ).结论 化合物Ⅰ～Ⅴ均为首次从该植物中分离得到.
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石斛属植物种子萌发的研究进展
目的 总结石斛属植物种子萌发的研究进展.方法 以国内外发表的相关文献为依据,进行归纳、总结.结果 有20多种石斛属植物开展了种子非共生萌发的研究,相关技术已用于种苗的生产;对该属植物种子共生萌发的研究方兴未艾,已经发现了一些萌发真菌,集中于胶膜菌、蜡壳菌等真菌类群,这些菌株在种苗生产上有很好的应用前景.结论 石斛属植物种子萌发的研究主要包括非共生萌发和共生萌发两方面内容;利用萌发真菌与种子共生萌发获得种苗,是石斛类药材人工栽培生产的发展趋势.
