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Pokemon基因对MCF-7细胞增殖的影响
目的 转染Pokemon 表达载体到MCF-7 细胞中,探究Pokemon 对乳腺癌细胞增殖的影响.方法 构建Pokemon 基因表达质粒,瞬时转染Pokemon 表达质粒到乳腺癌细胞中,Western blot 检测pokemon 的蛋白水平表达情况,通过MTT 和平板克隆形成试验法观察Pokemon 对乳腺癌细胞增殖及克隆形成能力的影响.结果 MTT 法显示,随着培养时间的增加,MCF-7 细胞在转染Pokemon 后的生长速度明显增加;细胞平板克隆形成试验显示,MCF-7 细胞在转染Pokemon 后克隆数明显增加,由此可以说明Pokemon 能增强癌细胞MCF-7 克隆形成能力.结论 Pokemon 作为一个致癌基因,能促进乳腺癌MCF-7 细胞系的增殖并增加其克隆形成能力.
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Pokemon对乳腺癌MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响
目的 建立稳定表达pokemon乳腺癌细胞系,并观察pokemon对乳腺癌细胞系MCF-7侵袭转移能力的影响. 方法 构建表达pokemon慢病毒载体,将Pokemon表达慢病毒载体转染MCF-7细胞,通过Westernblot方法检测稳定性表达pokemon MCF-7细胞中Pokemon-GFP融合蛋白的表达情况,应用Transwell试验及划痕实验观察pokemon的高表达对MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响. 结果 成功建立稳定表达pokemon的MCF-7细胞系,pokemon可抑制MCF-7细胞侵袭能力. 结论 Pokemon可抑制MCF-7细胞侵袭能力.
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Pokemon表达慢病毒载体的构建及鉴定
目的 构建Pokemon表达慢病毒载体.方法 通过PCR 扩增Pokemon cDNA,将Pokemon cDNA连接于GV165载体,经测序确认后,将GV165/ Pokemon与pHelper 1.0和pHelper 2.0共转染至293T细胞中,收获病毒,通过Real time PCR测定滴度; 将Pokemon表达慢病毒载体侵染293T细胞通过免疫荧光和Western blot检测Pokemon表达慢病毒载体的转染效率和Pokemon的表达能力.结果 在感染Pokemon 慢病毒载体293T细胞中能检查到Pokemon-GFP融合蛋白的表达.结论 成功构建表达Pokemon的慢病毒载体.
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siRNA干扰Pokemon基因影响A549细胞增殖的实验研究
目的 研究siRNA干扰Pokemon基因对肺腺癌A549细胞增殖抑制效应的变化.方法 专业设计合成3条针对Pokemon的siRNA,分别转染A549细胞后,RT-PCR检测转录水平Pokemon mRNA表达的变化,筛选出其中高效的1条siRNA;用MTT法检测该siRNA干扰Pokemon对A549细胞增殖的抑制作用；流式细胞技术检测该siRNA干扰Pokemon对A549细胞凋亡的影响.结果 3条siRNA均成功转染A549细胞,倒置荧光显微镜下观察细胞呈圆绿色.RT-PCR结果显示有2条siRNA使细胞中Pokemon的mRNA表达降低(P＜0.05).MTT法结果显示siRNA干扰Pokemon后对A549细胞增殖有抑制作用(P＜0.05),其中48 h抑制效率达(24.14±1.39)％.流式细胞技术检测结果显示该siRNA干扰Pokemon可增加A549细胞的凋亡,凋亡率为14.05％.结论 应用RNA干扰Pokemon基因能够抑制A549细胞的增殖,促进A549细胞的凋亡.Pokemon基因有可能成为肺癌治疗中的一个新靶点.
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Pokemon对乳腺癌细胞生长和阿霉素耐药能力的影响
目的 探讨Pokemon对乳腺癌细胞增殖和单克隆生长能力的影响,揭示Pokemon与乳腺癌细胞阿霉素耐药性产生的关系.方法 通过基因克隆方法获得Pokemon基因ROF序列,构建pcDNA3.1(-)/Pokemon表达质粒;通过MTT及单克隆形成实验观察Pokemon对乳腺癌细胞增殖和单克隆生长能力的影响;通过细胞毒性实验观察外源性Pokemon表达对乳腺癌细胞阿霉素耐药能力的影响.结果 外源性Pokemon表达能促进乳腺癌细胞增殖,提高乳腺癌细胞单克隆生长能力;Pokemon表达能增加细胞对阿霉素耐药的能力.结论 Pokemon能通过提高乳腺癌细胞的增殖能力和对阿霉素的耐药能力促进乳腺癌的发生和发展过程,Pokemon可作为乳腺癌治疗的潜在靶点.
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晚期非小细胞肺癌患者血清Pokemon表达水平及其在评估化疗效果和预后中的价值
目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中Pokemon的表达水平及其评估化疗效果、预后的价值.方法 选取61例晚期NSCLC患者(NSCLC组)和60例健康人(对照组)为研究对象,采用酶联免疫吸附试验检测两组血清中Pokemon的表达水平.比较两组间Pokemon表达差异,分析影响NSCLC患者Pokemon表达的因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估Pokemon预测预后的佳临界值;对比不同Pokemon表达水平NSCLC患者化疗的疗效,并分析影响NSCLC患者预后的因素.结果 NSCLC组血清中Pokemon表达水平高于对照组(P＜0.05).多因素分析结果显示,肿瘤大小、TNM分期是NSCLC患者Pokemon表达水平的影响因素(P＜0.05).NSCLC患者治疗前Pokemon预测预后的ROC曲线下面积为0.831,佳临界值为135.09 ng/ml,治疗前Pokemon＜ 135.09 ng/ml组患者疗效优于Pokemon≥135.09 ng/ml组(P＜0.05).生存分析结果显示,有淋巴结转移、治疗前Pokemon表达水平高是影响NSCLC患者生存情况的独立危险因素(P＜0.05).结论 晚期NSCLC患者血清Pokemon表达水平明显升高,其可用于NSCLC的化疗效果和预后评估.
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POK红系髓性致癌因子及其与肿瘤关系的研究进展
POK红系髓性致癌因子(Pokemon)是第一个被发现的可变阅读框(ARF)基因特异性转录抑制剂.其通过转录抑制多种肿瘤抑制因子,如ARF和视网膜细胞瘤基因,促进肿瘤生长.目前,已在多种肿瘤中发现Pokemon高表达,如肺癌、肠癌、鼻咽癌、前列腺癌等,其可作为肿瘤的总开关,通过补充募集组蛋白去乙酰酶共抑制复合体结合至靶蛋白,识别并结合特定DNA序列,调控癌基因及抑癌基因的表达.因此,Pokemon有望成为治疗肿瘤的新靶点.
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Pokemon蛋白在非小细胞肺癌中的表达及临床意义
背景与目的 原癌基因Pokemon是ARF特异性转录抑制剂,通过ARF-P53途径调节细胞生长和分化.Pokemon是多种肿瘤抑制基因和原癌基因的上游基因,因此有望成为重要的肿瘤监视靶点.本研究旨在探讨Pokemon基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达的临床意义及其对预后的影响.方法 应用SP免疫组化方法检测Pokemon蛋白在92例NSCLC肿瘤组织及20例癌旁组织中的表达,分析其与NSCLC临床病理学特征及预后的关系.结果 Pokemon在癌旁组织中不表达,92例肺癌组织中66例呈阳性表达(占71.7%).Pokemon表达与肺癌患者TNM分期有密切关系(P=0.011).Pokemon阴性表达者生存率显著高于Pokemon阳性表达者(P=0.0015).Pokemon表达是影响患者预后的独立因素.结论 NSCLC中存在Pokemon的表达,它有望作为NSCLC新的诊断标志.Pokemon高表达可能预示NSCLC患者预后较差.
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Pokemon在子宫内膜癌组织中的表达及其与突变型p53的相关性研究
目的 初步探讨Pokemon表达与子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)临床特征之间的关系,并分析不同类型EC组织中Pokemon表达与p53突变的关系,为寻求基因治疗的有效靶点提供理论基础.方法 收集四川大学华西第二医院病理科2012年7月至2014年7月的子宫内膜存档石蜡标本共98例(其中EC 58例,正常内膜组织20例,非典型增生内膜组织20例),采用免疫组化法检测每例切片中Pokemon蛋白的表达情况,分析其表达水平与临床病理特征的关系,并分析Pokemon和突变型p53两者之间的相关性.结果 Pokemon在正常内膜组织、非典型增生内膜组织、EC组织的阳性率分别为25.00％(5/20)、60.00％(12/20)、93.10％(54/58),表达程度逐渐增强(P均＜0.05);Pokemon在Ⅱ型EC组织的阳性率97.14％(34/35)高于Ⅰ型的阳性率86.96％(20/23)(P=0.018);Pokemon在Ⅲ～Ⅳ期、Ⅱ型及Ki-67增殖指数≥50的内膜癌组织中表达程度较高(P=0.012、0.023、0.029);Ⅱ型EC组织中,Pokemon和突变型p53的秩和相关系数rS=0.669(P=0.000).结论 Pokemon的高表达引起突变型p53表达上调,可能是Ⅱ型EC的致癌模式之一.
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c-Myc和Pokemon与乳腺肿瘤
c-Myc基因是禽类髓细胞病毒(AMN)MC-29的V-Myc的细胞同源序列,它既是一种可易位基因,又是一种多种物质调节的可调节基因,也是一种可使细胞无限增殖,获永生化功能,促进细胞分裂的基因.
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Pokemon、c-myc与乳腺肿瘤
Pokemon(POK erythroid ontogenic factor)蛋白,即POK红系髓性致癌因子,是POK转录抑制物家族的一个成员,为ZBTB7基因所编码的产物.Pokemon蛋白作为转录因子参与一些细胞基因转录的调节,并在细胞分化过程中发挥着关键、多效性的功能.近来发现,Pokemon和c-myc在乳腺肿瘤致癌转化过程中发挥着至关重要的作用,并与乳腺肿瘤的发生密切相关.c-myc原癌基因编码核内DNA结合蛋白,调节其它基因的转录.其基因、mRNA及编码蛋白在多种肿瘤组织中均有异常.c-myc蛋白主要是通过促进cychnE/CDK2复合物的活性来调控G1期细胞进程的.
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Pokemon 和 p53 蛋白在肝细胞癌组织中的表达及临床意义
目的:探讨Pokemon和p53蛋白在人肝细胞癌组织中的表达,分析其与肝细胞癌转移复发的关系.方法:应用免疫组织化学法检测60例肝细胞癌组织和癌旁组织中Pokemon和p53蛋白的表达情况.结果:60例肝细胞癌组织中Pokemon和p53表达率显著高于癌旁组织(P＜0.05).Pokemon的表达与临床分期、肿瘤直径、肿瘤分化程度密切相关(P＜0.05)；p53的表达与脉管癌栓、术后复发、肝外转移及肿瘤分化程度密切相关(P＜0.05).Pokemon和p53的表达呈显著正相关(γ=-0.275,P=0.033).结论:Pokemon和p53蛋白的高表达可能在肝细胞癌的发生及进展中起着重要作用.
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Pokemon在鼻咽癌中的表达及临床意义
目的:研究鼻咽癌组织中原癌基因Pokemon的表达及其与鼻咽癌临床指标间的关系.方法:利用免疫组化SP法分析86例鼻咽癌和30例鼻咽慢性炎中Pokemon的表达,同时利用半定量RT-PCR法分析56例鼻咽癌与30例鼻咽部慢性炎症组织中Pokemon mRNA表达情况.结果:Pokemon在86例鼻咽癌组中高表达有67例(77.9%),明显高于在30例鼻咽慢性炎组中表达的7例(23.3%),且两者差异有统计学意义(P<0.05).Pokemon的表达与鼻咽癌临床病理分期和淋巴结转移有相关性(P
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Pokemon在卵巢上皮细胞肿瘤中的表达及意义
目的:探讨上皮性卵巢肿瘤组织中Pokemon的表达及临床意义.方法:采用免疫组化方法分别检测20例正常卵巢组织、20例卵巢良性肿瘤、30例卵巢上皮性癌组织中Pokemon蛋白表达水平,并分析其与卵巢癌临床病例特征的关系.结果:Pokemon在卵巢上皮性癌、卵巢良性肿瘤、正常卵巢组织中表达,表达率分别为90％、30％、5％,差异有统计学意义(P＜0.05).Pokemon过表达与卵巢癌组织分化程度、临床分期及淋巴结转移有关(P＜0.05),而与年龄无关(P＞0.05).结论:Pokemon在卵巢癌组织中高表达与卵巢癌组织分化程度、临床分期及淋巴结转移有关,在卵巢癌的发生发展中起重要作用.
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靶向 Pokemon 基因 shRNA 重组质粒的构建及其在 CNE2细胞的筛选
目的：构建3个靶向 Pokemon 基因的短发夹 RNA（shRNA）真核表达载体，在鼻咽癌细胞株 CNE2中筛选出干扰效果佳的载体。方法：依据 shRNA 设计原则，针对 Pokemon mRNA 序列设计并化学合成3对RNA 干扰序列，经酶切、连接和转化，插入 PRNAT - U6.1/ Neo 质粒，经 DNA 测序验证。脂质体介导 shRNA 重组质粒及空白质粒转染 CNE2细胞，荧光定量 PCR 和 Western blot 检测 Pokemon 在 mRNA 和蛋白水平的表达，转染空白质粒的 CNE2作为阴性对照，未加处理的 CNE2作为空白对照。结果：DNA 测序结果显示 shRNA片段与设计序列一致；转染各重组质粒后的 CNE2细胞，与阴性对照相比，Pokemon 基因在 mRNA 和蛋白水平均有下调表达，其中以 shRNA2重组质粒干扰 Pokemon 表达的作用显著。结论：筛选出高效干扰 Pokemon表达的重组质粒 shRNA2，为研究 Pokemon 基因在鼻咽癌发生发展中的作用提供有效的研究工具。
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大肠癌中Pokemon的表达及其临床意义
目的:探讨原癌基因Pokemon(POK erythroid mye-loid ontogenic)在大肠癌组织中的表达及其与临床特征之间的关系.方法:采用逆转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测47例大肠癌患者癌、癌旁组织、癌以远大肠组织中Pokemon mRNA的表达水平,分析其与临床特征之间的关系;采用免疫组化ABC法检测53例大肠癌组织中Pokemon蛋白的表达,结合随访资料分析其与患者生存时间的关系.结果:大肠癌癌组织和癌旁组织中Pokemon mRNA水平显著高于正常大肠组织(P＜0.05),而癌与癌旁组织中的表达无显著性差异;Pokemon mRNA的表达水平与大肠癌Dukes分期、分化程度及淋巴结转移相关(P＜0.05),而与患者的性别、年龄、吸烟、饮酒、肿瘤位置、大小及浸润深度无关;Pokemon表达阴性的大肠癌患者存活率明显高于阳性表达患者(P＜0.05).结论:Poke-inon在大肠癌和癌旁组织中高表达,并对大肠癌的预后评价有重要意义,且可能成为大肠癌治疗中有效的新的靶基因.
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鼻咽癌组织中Pokemon、Ku70的表达及临床病理学意义
目的 研究鼻咽癌组织中Pokemon、Ku70的表达及其临床病理学意义.方法 采用免疫组织化学Envision二步法检测Pokemon、Ku70在47例鼻咽癌(鼻咽癌组)、20例鼻息肉(鼻息肉组)石蜡包埋组织中的表达,探讨与TNM分期、浸润、转移的关系.结果 (1)Pokemon在鼻咽癌组及鼻息肉组中阳性表达率分别为68.1%(32/47)、25.0%(5/20),差异有统计学意义(χ2=10.53,P＜0.05).不同分型的鼻咽癌组织中,角化性鳞状细胞癌组与非角化癌组Pokemon的阳性表达率分别为45.0%、85.2%,差异有统计学意义(χ2=8.54,P＜0.05).不同TNM的鼻咽癌组织中,Ⅰ期+Ⅱ期组、Ⅲ期+Ⅳ期组Pokemon的阳性表达率分别为88.0%、45.5%,差异有统计学意义(χ2=9.75,P＜0.05).在有无淋巴结转移的鼻咽癌组织中,有淋巴结转移组、无淋巴结转移组Pokemon的阳性表达率分别为86.7%、35.5%,差异有统计学意义(χ2=13.18,P＜0.05).⑵Ku70在鼻咽癌组及鼻息肉组中阳性表达率分别为61.7%(29/47)、30.0%(6/20),差异有统计学意义( χ2=5.65,P＜0.05).不同分型的鼻咽癌组织中,角化性鳞状细胞癌组与非角化癌组Ku70的阳性表达率分别为55.0%、66.7%,差异无统计学意义( χ2=0.66,P＞ 0.05).不同TNM分期的鼻咽癌组织中,Ⅰ期+Ⅱ期组、Ⅲ期+Ⅳ期组Ku70的阳性表达率分别为72.0%、50.0%,差异无统计学意义( χ2=2.40,P＞ 0.05).在有无淋巴结转移的鼻咽癌组织中,有淋巴结转移组、无淋巴结转移组Ku70的阳性表达率分别为73.3%、35.5%,差异有统计学意义( χ2=4.75,P＜0.05).结论 提示Pokemon及Ku70在鼻咽癌的发生发展中起重要作用;Pokemon与Ku70可能成为判定预后的生物标志物.
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Pokemon基因干扰对泌乳素腺瘤细胞的影响及其分子机制
目的:探讨原癌基因pokemon干扰对泌乳素腺瘤细胞的影响及其分子机制,为可能的泌乳素腺瘤分子靶向治疗提供依据.方法:从泌乳素腺瘤患者手术切除的肿瘤组织中分离培养原代肿瘤细胞,利用siRNA技术构建pokemon稳定干扰泌乳素腺瘤细胞系(siRNA1、siRNA2和siRNA3),采用荧光定量PCR及Western blot验证pokemon的表达;同时运用CCK8检测pokemon基因干扰对泌乳素腺瘤细胞增殖的影响.采用Western blot检测在泌乳素腺瘤组织及siRNA稳定干扰细胞中pokemon对下游cyclin-A、p14ARF和p21蛋白表达的影响.结果:3株pokemon基因干扰泌乳素腺瘤细胞均构建成功.与空白质粒对照组比较,干扰组的细胞增殖能力均较对照组明显减弱(P均＜0.05),且siRNA2干扰效率高.与正常泌乳素腺组织比较,泌乳素腺瘤组织中pokemon蛋白表达明显增加(P=0.042),而其下游蛋白p14ARF、cyclin-A以及p21表达均显著降低(P均＜0.05).与空白质粒对照组比较,在siRNA2干扰组细胞中p14ARF、cyclin-A和p21蛋白表达水平均明显升高(P均＜0.05).结论:pokemon基因干扰可上调泌乳素腺瘤细胞中肿瘤相关抑制因子的表达,提示pokemon可能作为泌乳素腺瘤治疗的潜在靶位点.
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SRPK-1和Pokemon在乳腺癌中表达及意义
目的 探讨SRPK-1与Pokemon蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义.方法 选取110例女性乳腺癌患者为观察组和38例体检为正常乳腺组织者的女性为对照组,采用免疫组织化学法检测其乳腺组织中SRPK-1与Pokemon蛋白的表达水平,分析其与乳腺癌临床特征的关系,以及SRPK-1与Pokemon蛋白的相关性.结果 乳腺癌患者SRPK-1和Pokemon蛋白的阳性率为74.5％ (82/110)、81.8％ (90/110);正常乳腺组织中SRPK-1和Pokemon蛋白的阳性率分别为15.8％ (6/38)、21.1％ (8/38).两组中SRPK-1与Pokemon蛋白的阳性表达率比较均有统计学意义(P＜0.05).SRPK-1与Pokemon蛋白的表达与乳腺癌腋窝淋巴结转移相关(P＜0.05),与TNM分期、年龄、肿瘤大小、生存期无关(P＞0.05).SRPK-1与Pokemon蛋白表达呈正相关(rs=0.588,P＜0.05).结论 SRPK-1与Pokemon是治疗乳腺癌一个新的途径,为乳腺癌的诊断及治疗提供了一个有效的靶方向.
