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mRNA差异显示技术筛选何首乌中二苯乙烯苷合成相关基因
【目的】筛选和克隆何首乌中二苯乙烯苷代谢相关酶基因。【方法】采用mRNA差异显示技术，对何首乌中二苯乙烯苷含量差异悬殊的不同组织（根、茎、叶）进行差异表达基因的筛选，将得到的差异基因连接pMD19-T载体进行测序后，通过数据库比对预测其基因功能。【结果】发现差异片段51条，选取其中9条进行半定量PCR验证，获得3条阳性差异片段。其中1条阳性片段为何首乌茎和叶特异表达，与甘氨酸脱氢酶高度同源，另外2条阳性片段为何首乌块根特异表达，分别与烯酰辅酶A水合酶、氨基肽酶N高度同源。【结论】通过mRNA差异显示技术得到的3个同源序列可为进一步研究何首乌中二苯乙烯苷生物合成途径提供帮助。
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二苯乙烯苷对人结肠癌细胞增殖及凋亡的影响
目的 研究二苯乙烯苷对人结肠癌细胞增殖及凋亡的作用,并探讨潜在的分子机制.方法 通过CCK8检测二苯乙烯苷对细胞增殖及顺铂化疗增敏的影响;流式细胞仪检测二苯乙烯苷对细胞凋亡的影响,Western blot检测二苯乙烯苷处理细胞后PI3K/AKT通路相关指标的变化.结果 CCK8结果显示,THSG可抑制HCT116和SW480细胞增殖,其对细胞的抑制呈时间和剂量依赖.THSG与顺铂联合运用可增加HCT116和SW480细胞对顺铂的敏感性.流式细胞仪检测结果显示,THSG作用于HCT116和SW480细胞后,细胞早期凋亡率呈剂量依赖递增.Western blot结果显示,THSG可上调PTEN的表达,下调P-AKT、P-IKKβ的磷酸化水平.结论 THSG可能通过抑制PI3K/AKT/NF-κB通路从而抑制HCT116和SW480细胞增殖并促进凋亡.
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HPLC法测定生发乌发口服液中二苯乙烯苷的含量
目的:建立生发乌发口服液中二苯乙烯苷含量测定的方法.方法:采用HPLC法进行测定,色谱柱为Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-水(16:84),柱温为室温,检测波长为320 nm.结果:二苯乙烯苷在1.52～75.76 μg/ml的范围内有良好的线性关系(r=0.9999),平均加样回收率为99.23％,RSD为1.98％(n=6).结论:本实验建立的二苯乙烯苷含量测定方法简便,准确,重复性好,可用于生发乌发口服液的质量控制.
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两种广西产何首乌炮制前后二苯乙烯苷和大黄素的含量考察
目的:研究广西产方茎何首乌与圆茎何首乌炮制后2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-3-D-葡萄糖苷与大黄素的含量变化,为科学评价广西产何首乌的质量提供参考依据.方法:采用HPLC法测定含量.结果:两种何首乌炮制样品中二苯乙烯苷及大黄素的含量差别极大,其中圆茎何首乌两种成分的含量较高.结论:两种广西产何首乌二苯乙烯苷及大黄素含量差别较大,应对广西产何首乌的种质资源进一步深入研究.
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HPLC法测定广西不同产地何首乌中二苯乙烯苷的含量
目的:考察广西不同产地何首乌中二苯乙烯苷的含量.方法:采用HPLC法测定,色谱柱为symmetryC18柱(4.6×150mm,5μm),流动相为乙腈-水(25:75),流速为1.0ml/min,检测波长为320nm.结果:不同产地的何首乌药材中二苯乙烯苷的含量差别很大,高的为6.06%,低的为0.04%.结论:平乐、恭城、宾阳、桂林等地所产何首乌中二苯乙烯苷的含量较高.
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二苯乙烯苷对SAMP8鼠学习记忆和自由基清除的影响
目的 观察二苯乙烯苷(TSG)对老年性痴呆模型SAMP8鼠学习记忆能力和自由基清除的影响.方法 选用6月龄SAMP8鼠50只,随机均分为5组,每组10只:SAMP8对照组、阳性药石杉碱甲对照组、TSG低、中、高剂量组,另选用6月龄SAMR1鼠10只作正常对照组.各组分别灌胃相应药物50 d后,应用Morris水迷宫检测各组小白鼠学习记忆能力的变化和采用分光光度法测定各组小白鼠脑组织SOD、GSH-Px活性和MDA含量.结果 与SAMRl对照组比较,SAMP8鼠在隐蔽平台试验中表现出明显的学习记忆障碍,逃避潜伏期显著延长(P<0.05),TSG组从第3天起逃避潜伏期较SAMP8对照组显著缩短(P<0.05);探索试验中二苯乙烯苷组原平台象限的停留时间和穿越原平台次数明显多于SAMP8对照组.SAMP8组脑组织SOD、GSH-Px活性明显降低,MDA含量明显升高,而TSG组能明显提高脑组织SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量(P<0.05).结论 二苯乙烯苷能改善SAMP8鼠的学习记忆能力及有效清除脑组织自由基.
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二苯乙烯苷对APP/PS1双转基因小鼠海马区病理形态学及脑BACE 1表达的影响
目的：观察二苯乙烯苷(TSG)对 APP/PS1双转基因小鼠海马区病理形态学变化和脑组织中β-淀粉样前体蛋白裂解酶-1(BACE1)表达的影响，探讨其作用的可能机制，为临床应用提供实验依据。方法50只3月龄 APP/PS1双转基因小鼠，随机分为TSG低剂量(0.033 g·kg-1·d-1)组、TSG中剂量(0.1 g·kg-1·d-1)组、TSG高剂量(0.3 g·kg-1·d-1)组、石杉碱甲(阳性对照)组及模型组，正常对照组为10只同龄 C5B7L/6J 小鼠。各组给予60 d 相应药物后，苏木精-伊红(HE)染色法观察海马区病理形态学变化；用 Western blotting 法检测小鼠脑组织 BACE1蛋白表达水平。结果与模型组相比，各治疗组小鼠海马区形态均有不同程度的改善；BACE1表达水平均显著降低(P <0.01)。TSG各剂量组BACE1的表达量与石杉碱甲组相比，差异无统计学意义(P >0.05)。结论 TSG治疗阿尔茨海默病的机制可能与降低BACE1表达水平，减少β淀粉样蛋白(Aβ)产生，改善神经元损伤等有关。
关键词： 二苯乙烯苷 阿尔茨海默病 β-淀粉样前体蛋白裂解酶 1 -
反相高效液相色谱法测定何首乌颗粒中二苯乙烯苷的含量
目的 建立何首乌颗粒质量控制方法.以何首乌颗粒为研究对象,建立其质量标准,为科学评价、深入研究和有效控制何首乌颗粒质量提供理论依据.方法用超声提取法对何首乌颗粒进行提取,用反相高效液相色谱法测定何首乌颗粒中有效成分二苯乙烯苷的含量.结果 二苯乙烯苷的线性范围为8.0320～40.1600 μg/ml.回归方程为:A=368.21C-112.83,r=0.9993.平均回收率为101.1％,RSD为1.5％.结论 所建立的方法灵敏度较高,专属性较强,重复性较好,能准确快速地对何首乌颗粒的主要有效成分二苯乙烯苷的含量进行测定,为何首乌颗粒的进一步研究以及制定其质量标准提供了科学依据参考.
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二苯乙烯苷含药血清作用于老年性痴呆细胞模型的佳条件筛选
目的 确定二苯乙烯苷含药血清作用于老年性痴呆(AD)细胞模型的佳条件.方法 利用细胞计数、MTT方法确立β淀粉样蛋白(Aβ)25-35片段在建立AD细胞模型时的浓度及筛选二苯乙烯苷含药血清作用的佳浓度,分别观察不同浓度血清及不同浓度Aβ25-35对AD细胞模型存活率的影响.结果 各种血清以5%浓度组的细胞存活率高.在5%血清浓度下,Aβ25-35 Oμmol/L和5μmol/L浓度组中各合药血清组细胞存活率均明显高于正常大鼠血清组(P<0.05或P<0.01),但在10μmol/L.Aβ25-35浓度时差异无显著性.结论 选用5μmol/L Aβ25-35及5%血清浓度建立NG108-15 AD细胞模型及药效考察体系较为合适,在此条件下能客观地评价二苯乙烯苷含药血清的药效.
关键词： 二苯乙烯苷 痴呆 老年性 β淀粉样蛋白 NG108-15细胞 -
二苯乙烯苷对D-半乳糖致拟痴呆小鼠学习记忆和海马APP、Aβ表达的影响
目的 观察二苯乙烯苷(TSG)对D-半乳糖致拟痴呆小鼠学习记忆能力及海马β淀粉样蛋白前体(APP)、β淀粉样蛋白(Aβ)表达的影响.方法 连续给昆明种小鼠灌胃TSG 50天,同时每天颈部皮下注射D-半乳糖建立痴呆小鼠模型,以Morris水迷宫为学习记忆评价指标,并采用免疫组化及图像分析测定各组小鼠海马组织APP、Aβ平均光密度和阳性细胞数.结果 在隐蔽平台试验中拟痴呆小鼠表现出明显的学习记忆障碍,逃避潜伏期显著延长(P<0.05),TSG各剂量组逃避潜伏期较模型组显著缩短(P<0.05);探索试验中TSG各剂量组原平台象限的停留时间和穿越原平台次数明显多于模型组.与模型组比较,TSG各剂量组能降低拟痴呆小鼠脑内APP、Aβ平均光密度值和阳性细胞数(P<0.05).以上效应均呈现一定的量效关系.结论 TSG各剂量能明显地改善拟痴呆小鼠的学习记忆能力,能减少或抑制APP、Aβ的过度产生,保护神经元免受Aβ的神经毒性.
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高效液相色谱法测定生发片中二苯乙烯苷的含量
目的 建立高效液相色谱法(HPLC)测定生发片中二苯乙烯苷的含量的方法 .方法 采用HPLC法;色谱柱:Kromasil C18(5 μm,250 mm×4.6 mm);流动相:乙腈-水(25 ∶75);检测波长:320 nm.结果二苯乙烯苷的线性范围为0.067～1.332 μg(r=0.9998).该方法 二苯乙烯苷回收率为98.7%(RSD=0.87%).结论 HPLC法能将二苯乙烯苷较好地分离检测,准确、可靠,重现性好,可作为生发片质量检测方法 .
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生发胶囊质量标准研究
目的 研究并建立中药生发胶囊的质量标准.方法 采用薄层色谱(TLC)法对方中墨旱莲、牡丹皮和何首乌进行色谱鉴别,采用高效液相色谱(HPLC)法测定何首乌中2、3、5、4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(C20H22O9)的含量.结果 鉴别方法 重复性好,专属性强.当进样量在0.0666～1.332 μg范围内时,2、3、5、4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系,平均加样回收率为97.96%,RSD=1.18%.结论 本研究的方法 可有效地控制生发胶囊的质量.
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二苯乙烯苷对Aβ25-35致NG108-15损伤的保护作用
目的 观察二苯乙烯苷对Aβ25-35诱导损伤的NG108-15细胞生长、分化的影响.方法 以Aβ25-35诱导NG108-15细胞建立痴呆细胞模型后加入二苯乙烯苷培养,观察NG108-15细胞的生长状态、存活率、突起率及突起平均长度.结果 与细胞模型组相比,二苯乙烯苷组能在一定程度上抑制Aβ25-35对痴呆细胞的损伤作用,细胞生长状态良好,细胞存活率、突起率及突起平均长度与模型组比较均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01).结论 二苯乙烯苷对Aβ25-35诱导的NG108-15细胞损伤具有保护作用.
关键词： 二苯乙烯苷 老年性痴呆 β淀粉样蛋白 NG108-15细胞 -
二苯乙烯苷对多柔比星致小鼠心脏损伤的保护作用研究
目的:研究中药何首乌主要有效成分二苯乙烯苷(THSG)对多柔比星(DOX)致小鼠心脏损伤的保护作用及其机制.方法:取小鼠随机分为正常对照组、模型组和THSG高、中、低剂量组(150、100、50 mg·kg-1·d-1),每组20只,THSG各剂量组灌胃给予相应药物2d,第3天除正常对照组外其余各组单剂量腹腔注射DOX 15 mg·kg-1建立心脏损伤模型,建模同时THSG各剂量组继续灌胃给药5d,然后处死小鼠.观察各组小鼠体重、心脏指数、存活率和心肌病理形态变化,考察小鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)水平及心脏组织中丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量.结果:与正常对照组比较,模型组小鼠体重明显减轻(P＜0.01),心脏指数和存活率均略减小,LDH、CK、MDA水平均明显升高(P＜0.01),GSH含量明显降低(P＜0.01),可见明显的心肌纤维断裂甚至消失,心肌间质水肿并伴有局灶性心内膜下出血.与模型组比较,THSG高、中、低剂量组小鼠体重、心脏指数和存活率均无明显差异,LDH、CK、MDA水平均明显降低(P＜0.05或P＜0.01),GSH含量明显增加(P＜0.05或P＜0.01),心肌组织病理形态学变化明显好转.结论:THSG对DOX致小鼠心脏损伤具有保护作用,其机制可能与抗氧化损伤有关.
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含二苯乙烯苷大鼠血清对NG108-15痴呆模型细胞的影响
目的:观察含二苯乙烯苷(TSG)血清对NG108-15痴呆模型细胞的影响.方法:分别用TSG(0.3 g·kg-1)、阳性对照药石杉碱甲(0.02 mg·kg-1)等灌胃大鼠10 d后分离相应的含药血清,以β淀粉样蛋白(Aβ)25-35诱导NG108-15细胞成为痴呆细胞后用相应的含药血清培养,观察NG108-15细胞的生长状态、存活率、突起率及突起平均长度,并与模型组比较.结果:无论在增殖相或分化相中,TSG组细胞生长状态均良好;在增殖相细胞中,TSG组、模型组存活率分别为89.1%、64.6%(P<0.01);在分化相细胞中,TSG组存活率为74.3%,细胞突起率为(50.83±6.66)%,突起平均长度为(21.52±5.19)μm,模型组分别为59.2%、(41.42±7.23)%、(15.59±4.54)μm(P<0.05或P<0.01),TSG组各指标与石杉碱甲组相近.结论:含TSG大鼠血清对Aβ 25-35诱导的NG108-15痴呆模型细胞损伤具有保护作用.
关键词： 二苯乙烯苷 含药血清 大鼠 痴呆模型 β淀粉样蛋白25-35 NG108-15细胞 -
二苯乙烯苷对D-半乳糖致脑老化小鼠学习记忆及神经营养因子的影响
目的:观察何首乌提取物二苯乙烯苷(TSG)对D-半乳糖致痴呆模型小鼠学习记忆及脑内神经营养因子表达的影响.方法:将小鼠随机分为正常对照组、D-半乳糖模型组、VitE阳性对照组及TSG低、中、高剂量(0.033、0.1、0.3g/kg)6个组,除正常对照组外,其余各组小鼠在建立脑老化模型的同时灌胃给予相应药物60d,随后进行Morris水迷宫测试,并采用免疫组化的方法检测TSG对神经生长因子(NGF)和神经营养因子-3(NT-3)的影响.结果:与正常对照组比较,模型组小鼠在Morris水迷宫测试中游出时间和游出距离延长,海马CA1区NGF和NT-3的表达明显减少;TSG则能缩短小鼠游出时间和游出距离,增加海马CA1区NGF和NT-3的表达.结论:TSG能明显提高学习记忆能力,对阿尔茨海默病可能具有防治作用.
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何首乌提取物二苯乙烯苷对东莨菪碱致学习记忆障碍模型小鼠的影响
目的:观察何首乌提取物二苯乙烯苷( TSG)对东莨菪碱致学习记忆障碍模型小鼠的影响.方法:将小鼠随机分为空白对照组、模型组、 TSG组(低、高剂量组)和阳性对照组(吡拉西坦) ,分别灌胃给药,之后造模并进行 Morris水迷宫测试和避暗测试.结果:与模型组小鼠比较,在 Morris水迷宫测试中,空白对照组、阳性对照组及 TSG高剂量组小鼠搜索时间及搜索距离均明显缩短( P<0.05);在避暗测试中, TSG组小鼠受电击次数明显减少( P<0.05),潜伏期延长.结论:何首乌提取物 TSG对东莨菪碱所致小鼠学习记忆障碍具有一定的改善作用.
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高效液相色谱法同时测定消脂饮中2组分的含量
目的:建立以高效液相色谱法同时测定消脂饮中丹酚酸B和二苯乙烯苷含量的方法.方法:色谱柱为Kromesile C18,流动相为乙腈-0.15%磷酸水溶液,并进行梯度洗脱,检测波长为320nm,流速为1ml/min,柱温为30℃.结果:丹酚酸B、二苯乙烯苷进样量分别在0.8 336μg～8.336μg(r=1.0 000)、0.352μg～3.52μg(r=1.0 000)范围内与峰面积积分值线性关系良好;平均回收率分别为99.5%(RSD=0.40%)、100.2%(RSD=0.70%).结论:本方法准确、简便、重现性好、回收率高,可用于本品的质量控制.
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HPLC法同时测定补肾通络方中马钱苷、阿魏酸和二苯乙烯苷的含量
目的:建立同时测定补肾通络方中马钱苷、阿魏酸和二苯乙烯苷含量的方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为HypersilC18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.1％醋酸水溶液(35∶65,V/V),检测波长为240 nm(马钱苷)、320 nm(阿魏酸和二苯乙烯苷),柱温为30℃,流速为1.0 ml/min,进样量为10 μl.结果:马钱苷、阿魏酸和二苯乙烯苷的质量浓度分别在0.050～2.500(r=0.999 9)、0.005～0.250(r=0.999 9)、0.060～3.000(r=0.999 8)μg/ml范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系;精密度试验的RSD＜2％,稳定性、重复性试验的RSD＜3％;马钱苷、阿魏酸和二苯乙烯苷的平均加样回收率分别为98.31％ (RSD=1.92％,n=6)、96.33％(RSD=1.91％,n=6)和100.78％(RSD=1.93％,n=6).结论:该方法简单、准确,灵敏度高,可用于补肾通络方的质量控制.
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麒麟丸质量标准的提高研究
目的:提高麒麟丸的质量标准.方法:采用薄层色谱(TLC)法定性鉴别麒麟丸中的丹参、锁阳、枸杞子、青皮；采用高效液相色谱法测定何首乌中二苯乙烯苷的含量.色谱柱为Kromasil 100-5 C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(15∶85,V/V),流速为1.0 ml/min,柱温为25℃,检测波长为320 nm.结果:TLC图谱斑点清晰、分离度好,且阴性对照无干扰.二苯乙烯苷的进样量在0.040 04～0.600 60 μg范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.999 9)；精密度、稳定性、重复性试验的RSD均＜2％；平均加样回收率为96.40％,RSD=0.93％ (n=6).结论:提高后的质量标准能更好地控制麒麟丸的质量.
