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O型血孕妇血清中抗-A和抗-B IgG抗体检测方法改进
目的探讨检测O型血孕妇血清中抗-A和抗-B IgG抗体的佳实验条件,为新生儿ABO血型免疫溶血性疾病的早期诊断和预防提供依据.方法用2-巯基乙醇处理血清中IgM抗体后,分别用木瓜酶法、抗人球蛋白法及Biovue法测定其IgG抗体.结果血清倍比稀释后,2-巯基乙醇对抗-A和抗-B的IgM破坏率分别为93.33%(42/45)和97.78%(44/45),与2-巯基乙醇对原血清IgM的破坏率8.89%(4/45)和17.78%(8/45)比较,差异有显著性(P＜0.005).温浴20 min,2-巯基乙醇对抗-A和抗-B的IgM破坏率分别是93.33%(42/45)和95.56%(43/45);与温浴15 min的破坏率80.00%(36/45)和88.89%(40/49)比较,差异有显著性(P＜0.005);与温浴25 min的破坏率95.56%(43/45)和97.78%(44/45)比较,差异无显著性(P＞0.05).用木瓜酶法、抗人球蛋白法、Biovue法测定IgG抗体,其结果差异有显著性(P＜0.005).结论先将血清作倍比稀释,加等量2-巯基乙醇,在37℃温浴20 min后,用木瓜酶法检测IgG抗体为佳方法.
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HPLC法测定复方α酮酸片中四种氨基酸的含量
目的 建立复方α酮酸片中4种氨基酸的含量测定方法.方法 针对复方α酮酸片中赖氨酸醋酸盐、苏氨酸、组氨酸及酪氨酸四种氨基酸,采用反相高效液相法,以邻苯二甲醛(OPA)和2-巯基乙醇为衍生化试剂,测定四种氨基酸的含量.色谱柱为Lichrospher C18 25 cm×4.6 mm;流动相:乙腈-醋酸盐缓冲液系统梯度洗脱；检测波长:335 nm.结果 衍生化产物性质稳定；4种氨基酸在各自的浓度范围内线性关系良好(r＞0.999 0)；加样回收率为99.8％～101.1％,相对标准偏差均小于2.0％.结论 该方法准确,简便,重现性好,专属性强,可用于该产品的质量控制.
关键词： 柱前衍生化 邻苯二甲醛(OPA) 2-巯基乙醇 氨基酸 高效液相色谱法 -
脐带华通胶间充质干细胞向Flk1阳性细胞分化的研究
目的:诱导脐带华通胶间充质干细胞向Flk1阳性细胞分化.方法:胶原酶法分离培养脐带华通胶间充质干细胞,第3代细胞以含2-巯基乙醇的分化培养基培养,应用RT-PCR和流式细胞仪从mRNA和蛋白水平检测Flk1阳性细胞分化水平.结果:脐带华通胶间充质干细胞Flk1mRNA及蛋白表达极低,分化培养基培养后表达上调,48h达高峰(P＜0.05),之后表达降低.结论:2-巯基乙醇可诱导脐带华通胶间充质干细胞向Flk1阳性细胞分化,为从中分选Flk1阳性细胞进行进一步研究提供了依据.
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2-巯基乙醇处理对广州管圆线虫感染大鼠血清特异性IgG检测效果的影响
目的 探讨2-巯基乙醇处理对广州管圆线虫感染大鼠血清特异性IgG抗体检测效果的影响.方法 用2-巯基乙醇对感染广州管圆线虫大鼠血清处理后,进行ELISA检测, 观察标本阳性检出率的变化.结果 改进的方法具有较好的敏感性和特异性.通过用2-巯基乙醇对在感染后8、14、20、28、45天和60天6个时点采集的大鼠感染血清进行处理,可不同程度提高其在ELISA反应中的阳性检出率.结论 用2-巯基乙醇处理可提高广州管圆线虫感染大鼠血清特异性IgG抗体的阳性检出率.
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丹参注射液诱导骨髓基质干细胞定向发育为神经细胞的实验研究
目的:研究复方丹参注射液体外诱导人胚胎和成年小鼠骨髓基质干细胞(MSCs)体外定向神经细胞发育的规律.方法:应用复方丹参注射液诱导体外培养的人胚胎和成年小鼠骨髓基质干细胞,观察诱导过程中的形态学变化,并于诱导后5、24、72h分别应用抗Nestin、抗βⅢ-tubulin、抗MBP及抗GFAP抗体进行免疫细胞化学染色,RT-PCR检测mRNA表达,Westem Blot检测蛋白表达.应用5mmol/L和10 mmol/L的2-巯基乙醇作为诱导对照组.结果:复方丹参注射液和2-巯基乙醇均可诱导骨髓基质干细胞分化为神经样细胞,但复方丹参注射液诱导作用更为缓和,细胞死亡率远低于2-巯基乙醇诱导组.免疫细胞化学示Nestin和βⅢ-tubulin呈阳性表达,MBP及GFAP呈阴性表达.RT-PCR可见Nestin和βⅢ-tubulin mRNA呈阳性表达,Westem Blot检测证实,Nestin和βⅢ-tubulin蛋白呈阳性表达.结论:复方丹参注射液可在体外诱导人胚胎和成年小鼠骨髓基质干细胞向神经细胞发育,是较为理想的诱导剂.
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孕妇IgG抗体效价的检测新方法探讨
目的:探讨在孕妇IgG抗体效价的检测预处理过程中不加入2-巯基乙醇(2-Me)处理液是否可行.方法:检测孕妇IgM和IgG抗体效价,对试验结果进行比较.结果:IgG抗体效价通常高于IgM抗体效价,IgM抗体效价通常在1∶64以下,IgM和IgG抗体在抗体效价检测过程中有协同凝集作用.结论:可以对IgM抗体效价通常在1∶64以下孕妇不用2-Me处理液处理直接检测IgG抗体效价,对个别IgM抗体效价通常在1∶64以上,IgG抗体效价未超过同一孕妇IgM抗体效价者则需要进行预处理.
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亚砷酸诱导骨髓基质干细胞向神经细胞的分化作用
目的研究亚砷酸体外诱导骨髓基质干细胞(MSCs)向神经细胞分化的作用.方法应用亚砷酸诱导体外培养的人胚胎和成年小鼠MSCs,观察诱导过程中的形态学变化;应用抗Nestin、抗MAP2、抗βⅢ-tubulin、抗磷脂碱性蛋白(MBP)及抗胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体进行免疫细胞化学染色,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测mRNA表达,以2-巯基乙醇(BME)作为对照.结果经亚砷酸和BME诱导后,MSCs均表现为神经元细胞的形态特征.亚砷酸诱导组细胞形态变化较BME诱导组出现晚,且死亡率远低于后者.免疫细胞化学示Nestin、MAP2和βⅢ-tubulin阳性表达,MBP及GFAP为阴性表达.RT-PCR可见Nestin、MAP2、β-actin和βⅢ-tubulin mRNA阳性表达.结论亚砷酸和BME均可在体外诱导人胚胎和成年小鼠MSCs向神经细胞分化,但亚砷酸诱导更为缓和.
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新生儿ABO血型系统IgM血型抗体调查分析
目的 明确新生儿ABO血型系统IgM血型抗体产生的情况.方法 收集出生1周内的新生儿静脉血,采用微柱凝胶法结合盐水试管法鉴定新生儿IgM血型抗体.结果 与盐水法相比,微柱凝胶法鉴定新生儿IgM血型抗体凝集强度强,检出率高.经2-巯基乙醇灭活后血型抗体凝集强度减弱,IgM血型抗体检出率低.结论 多数新生儿已产生ABO血型系统IgM血型抗体,但抗体强度较弱,与宫内感染无直接关系.
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2-Me处理IgM型多发性骨髓瘤患者血型鉴定1例
1病例简介患者,女,82岁,因头晕,乏力10d,皮肤紫斑4d,加重1d入咸阳市二医院诊治.入院后查体:重度贫血貌,躯干及四肢可见散在斑状浅色紫斑;血常规示:RBC 1.11×1012/L,WBC 6.7×109/L,Plt 93×109/L,IgG 51.4g/L,IgM 10.88g/L,IgA 1.41g/L;经骨髓涂片检查诊断为多发型骨髓瘤(浆细胞型,MM).患者血样抽出后,立即凝集呈坚实块状,无法进行血型定型及进一步配血试验,遂由咸阳市中心血站血型室转送本科鉴定.
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2-巯基乙醇灭活血型IgM抗体的灭活时间研究
目的研究在一定浓度条件下,2-巯基乙醇(2-met)灭活血型IgM抗体的佳时间.方法对含IgG、IgM血型抗体,仅含IgM血型抗体的血清标本采用不同时间进行灭活,并测定其灭活效果.结果在灭活仅含天然血型IgM抗体,且盐水效价在1: 128的血清时,灭活40min可见微弱的盐水凝集,灭活50min、60min均无凝集发生;在灭活含IgG、IgM血型抗体的血清时,灭活50min、60min后,在盐水介质下无凝集发生,采用抗人球蛋白试验及凝聚胺试验均可发生凝集.结论用2-met灭活血型抗体的佳灭活时间是60min.
