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泉州市2008年与2010年手足口病流行特征研究
目的 探讨泉州市手足口病流行病学特征描述及其病原学变化,为制定有效防控措施提供依据.方法 采用描述性流行病学方法对2008年与2010年泉州市手足口病流行特征进行分析,并采用非条件logistic回归法计算泉州市手足口病不同病原相对风险因素.结果 ①2010年疫情呈“双峰型”流行,分别于5、9月达高峰；②2008年、2010年手足口病构成比都是以人口高密度区组高；③手足口病发病集中在1-岁～4-岁组,并且好发于男孩；④散居儿童的患儿构成比由2008年的78.30%逐渐降为2010年的73.39%,而幼托儿童的比例则从2008年18.16%上升为2010年23.24%；⑤从病原体的构成比来看,2008 ～2010年CoxA16由14.29%降到8.52%,而EV71则由43.13%升到73.32%；⑥EV71与CoxA16感染呈季节性差异,相对于冬春季节,夏秋季节感染EV71风险是CoxA16的2.8倍；⑦手足口病重症病例病原体以EV71为主.结论 手足口病仍然是威胁泉州市1～5岁小儿身心健康的传染病,呈春秋双峰型流行,易于在人口密度区组、散居儿童流行,特别是男童居多.重症病例以EV71感染为主,EV71与CoxA16感染呈季节性差异.
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EV71所致重症手足口病78例临床分析
目的 探讨肠道病毒71型(EV71)所致的重症手足口病(HFMD)患儿的临床特点及治疗转归.方法 对2010年3月～2012年11月收入院的78倒EV71所致的重症手足口病患儿的临床表现,实验室检查及治疗与转归资料进行分析.结果 78例患儿治愈69例(88.46％),治疗无效6例(7.69％),3例(3.85％)患儿留有单侧下肢迟缓性麻痹.结论 EV71感染可累及多系统多器官,早期发现危重征象,早期治疗多数预后良好.
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789名家长手足口病认知的调查
目的：了解家长对手足口病的认知情况。方法：对在我院儿科、急诊和儿童保健科门诊就医儿童的家长随机进行问卷调查，分析家长的认知情况。结果：大部分家长（74.1％）对手足口病处于一般认识水平。家长的学历越高得分越高，来自城镇的家长得分高于乡村的（P＜0.05）。结论：家长对手足口病的认知度不高，今后应通过多种途径加强宣传教育，并重点对低学历和来自乡村的家长进行宣教和评估。
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手足口病不同核酸检测方法敏感性比较
手足口病（HFMD）是由多种人肠道病毒引起的一种儿童常见传染病，是我国法定报告管理的丙类传染病。以发热和手、足、口腔等部位的皮疹和疱疹为主要症状。少数患者可出现无菌性脑膜炎、脑炎、急性弛缓性麻痹、神经源性肺水肿和心肌炎等，个别重症患儿病情进展快，可导致死亡。引起手足口病的肠道病毒有二十几种，其中能够引起比较严重后果的主要有两种，分别是EV71型和CA16型。2008年手足口病在全国爆发性流行，导致众多的重症患儿病情严重，甚至发生了死亡病例，经过实验室检测发现，2008年的主要流行型别就是EV71型，该型别也是肠道病毒中能够导致重症患儿的头号病毒。从2008年以来，国家对手足口病越加重视，坚持不懈开展监测工作。经过这几年的连续监测，我中心对本溪市手足口病的流行情况有了大概的了解，为医院的治疗工作提供了可靠的理论依据。
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肠道病毒71型VP1蛋白在昆虫杆状病毒表达系统的表达
目的 利用昆虫杆状病毒表达系统表达肠道病毒71型VP1蛋白并对其进行纯化.方法 首先通过化学合成法合成EV71 VP1基因,然后将EV71 VP1基因插入到供体质粒pFastBac1中,构成重组质粒pFastBac1-VP1,再转入JM190感受态细菌扩增,然后提取重组质粒pFastBac1-VP1转入DH10BacTM感受态细胞,通过转座从而获得重组质粒bacmid-VP1,采用脂质体Cellfectin Reagent将重组质粒bacmid-VP1转染Sf9细胞.通过SDS-PAGE、Western blot法检测目的蛋白的水平,经镍离子亲和层析,纯化VP1蛋白.结果 SDS-PAGE及Western blot法检测获得蛋白的相对分子质量与预期结果一致.Bradford分析纯化后蛋白的浓度为70 μg/mL,纯化度达90％.结论 利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达EV71 VP1蛋白.
关键词： EV71 VP1蛋白 昆虫-杆状病毒表达系统 -
肠道病毒71型多表位-mGITRL真核表达质粒的构建、表达及其免疫原性研究
[目的]构建肠道病毒71型(EV71)多表位-mGITRL 真核表达质粒并对其免疫原性进行研究.[方法]串联已证实的VP1表位并合成(VP1’)；PCR扩增获得mGITRL,克隆至真核共表达载体pIRES中.对重组质粒进行测序鉴定后,以脂质体介导法转染至COS7细胞,通过Western blot方法检测其在COS7细胞中的表达.将构建好的重组质粒免疫小鼠,应用ELISA法检测小鼠血清中抗VP1的抗体滴度.[结果]PCR扩增出目的基因,测序证实真核共表达载体pIRES-VP1’-mGITRL构建成功,Western blot结果显示目的基因在COS7细胞和肌细胞中过表达.小鼠血清中检测出高滴度的抗VP1抗体.[结论]成功扩增出目的基因并构建VP1表位的重组真核共表达载体pIRES-VP1’-mGITRL,在COS7细胞和肌细胞中过表达,并获得高滴度的抗VP1抗体.
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EV71病毒特异性单克隆抗体的筛选及鉴定
目的:筛选高亲和力和高中和活性的抗EV71病毒的单克隆抗体(mAb), 并对其特异性和抗原表位进行鉴定.方法:采用葡萄球菌A蛋白亲和层析法纯化mAb, 并进行抗体的中和效价、交叉反应性以及表位进行分析.结果:筛选出1株抗EV71病毒的mAb, 纯度大于95%, 抗体滴度达到10-7, 对EV71病毒具有广谱中和特性, 与CA16无交叉反应, 为VP1特异性, 并识别EV71的构象型表位.结论:筛选出1株具有高亲和力和中和活性的EV71病毒的mAb, 为研制EV71病毒感染性疾病的诊断试剂提供了重要工具, 并为研制治疗性mAb提供了条件.
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EV71-CA16肠道病毒荧光定量RT-PCR诊断试剂盒的研制
目的 研制一种能同时检测EV71,CA16肠道病毒的二联实时荧光定量PCR检测试剂盒,主要用于EV71,CA16肠道病毒的快速检测和流行病学监测.方法 设计特异度的EV71型、CA16型基因的引物和探针,优化实时荧光定量PCR检测体系,并研究产品的灵敏度、精密度、稳定性和检测线性范围;同时对2014年5月份收集的26份样品进行检测.结果 试验得到了阳性重组质粒,线性范围在5* 102 copies/μl～105 copies/μl,该范围内检测结果良好;优化后肠道病毒CA16上下游引物和探针浓度分别为0.48,0.24μmol/L,EV71上下游引物和探针浓度分别为0.40,0.20 μmol/L.敏感度达到500 copies/μl,重复性变异系数CV≤5％;该荧光定量PCR检测试剂盒稳定性强,在-20℃下可以保存一年,对EV71,CA16肠道病毒具有良好的特异度.用该方法检测20份临床阳性样品和6份阴性样品,阳性检出率为100％ (20/20),阴性检出率为100％(6/6).结论 试验建立的EV71,CA16肠道病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法可用于EV71,CA16肠道病毒的临床诊断.
关键词： 荧光定量RT-PCR EV71 CA16肠道病毒 快速检测 -
一步法荧光定量PCR快速检测肠道病毒EV71
目的:建立一步法荧光定量RT-PCR方法快速检测肠道病毒EV71.方法:从Genebank中找出近2-3年中国大陆区域流行的EV71病毒VP1基因的序列进行比对,找出2-3个相对保守区域设计引物及taqman探针.筛选出一套表现良好的引物并进行反应条件的优化.结果:筛选出一套对EV71病毒具有高度灵敏度和特异性的引物及taqman探针,检测灵敏度达10copies VP1/μL,整个操作过程仅需2-3h.结论:该套引物及探针针对EV71具有良好特性,是用于EV71的日常监测和暴发时的应急诊断.
关键词： TaqMan探针 EV71 肠道病毒 一步法荧光定量PCR -
12例危重症肠道病毒71型感染护理体会
目的:总结12例危重症肠道病毒71型感染(EV71)抢救和护理要点.方法:回顾性分析2010年3-7月我市手足口病定点医院住院12例EV71阳性死亡患儿临床资料及护理要点.结论:危重症EV71感染病例起病急,病情进展迅速,密切观察病情,及早发现重症病例,可以降低死亡率.
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2014年乌鲁木齐市手足口病病原学检测分析
目的：回顾性分析乌鲁木齐市在2014年的手足口病病原体的具体分布信息和资料。方法2014年，乌鲁木齐市共采集861例手足病患者的病原学标本，借助于Real-time PCR法对患者实施CoxA 16、肠道病毒以及EV71的检测工作。结果在861例患者的标本中，经检测，病毒核酸的阳性率可高达81.30%(700/861)，其中EV71阳性率为17.19%(148/861)、CoxA16阳性率为56.91%(490/861)；粪便标本的阳性率高90.82%，0~4岁的患儿占75.38%(649/861)；临床病例以散发病例为主。结论2014年，乌鲁木齐市的手足口病患者的病原体主要是CoxA 16，且以散发病例比较多见，0~4岁的婴幼儿属于高发人群，在对手足口病患者进行病原体检测时，实时荧光PCR法比较可靠，能够为该病症的防治提供一定的参考信息。
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仙居县2012~2013年手足口病病原学监测结果分析
目的：了解仙居手足口的病原型别和分布特征，为制定预防措施提供实验室依据。方法每月将监测点医院采集送检的咽拭子标本进行 EV71、CoxA16、肠道病毒通用核酸检测。结果2012~2013年共检测标本144例，阳性96例，男性发病高于女性，<5岁儿童占阳性构成比90.62%。2012年EV71阳性构成比为63.64%，而2013年EV71阳性构成比为14.63%、其他肠道病毒阳性构成比为70.73%。结论 EV71、CoxA16、其他肠道病毒都有可能是仙居县手足口病的主要病原体；5岁以下儿童是手足口感染易感人群。
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徐州地区2015~2016年手足口病流行病学特征分析
目的 回顾2015年1月~12月徐州地区儿童手足口病(HFMD)的临床流行病学特征.方法 利用统计学方法对2792例收治入院手足口病例进行流行病学资料分析.结果 在徐州地区,儿童HFMD发病年龄以3岁以下为主,男性多于女性,散居病例多于群居病例,乡村地区多发,疾病多发季节为3~7月份.普通型病例大多症状轻微,预后良好,超过半数病例并发病毒性脑炎,经积极处理后预后亦较好;重症病例10例,占总病例数0.36%,可并发严重并发症,如神经源性肺水肿,肺出血等,需积极处理以降低死亡率.结论 在徐州地区,HFMD发病具有明显易感人群及流行季节,在疾病流行季节对易感人群进行积极干预,争取早诊断、早治疗,以期获得良好预后.
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神经系统症状为首发的手足口病临床特点和意义
目的 探讨以神经系统为首发症状的手足口病患儿临床特点.方法 对2006年1月～2014年1月我院治疗的169例手足口病患儿的发病情况、临床表现、辅助检查、治疗及预后情况进行回顾性分析.结果 临床表现除发热、疱疹外,EV71感染合并神经系统并发症状者居多,脑脊液及脑MRI异常比例高.结论 EV71感染手足口病极易合并中枢神经系统感染,预后差,临床应重视.
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小儿重症手足口病的护理体会
总结近2a 来小儿重症手足口病的护理措施,预防并发症及后遗症,降低病死率.2010 年6 月~2012 年6月入住我科的手足口病患儿共512 例,有2/3 以上为重症患儿,其中包括9 例极重症手足口病患儿.近2a来手足口病重症病例有所增多,临床工作者应高度重视,加强诊断,根据病情制定周密的护理计划,预防并发症,大大提高治愈率,降低病死率.
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重症EV71感染手足口病患儿的护理现状
从心理护理、消毒隔离、皮肤护理、口腔及饮食护理、高热的护理、病情观察及健康宣教方面对重症EV71感染手足口病患儿的护理现状进行了综述，说明加强医护人员的对重症EV71感染手足口病的护理，对于重症EV71感染手足口病患儿的治疗及危重患者的救治十分重要。
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海藻不同方法提取物体外抗病毒活性研究
目的:研究海藻4种不同方法提取物的体外抗病毒活性.方法:以呼吸道合胞病毒(RSV)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)、柯萨奇病毒B5(COXB5)、肠道病毒71型(EV71)4种病毒感染的人喉癌上皮细胞(Hep2)、横纹肌瘤细胞(RD)为模型,运用4种不同方法提取的海藻提取物对4种病毒感染的细胞进行治疗,并设利巴韦林、阿昔洛韦作为阳性对照药.采用细胞病变效应法(CPE法)结合4,5-二甲基噻唑-2,5-二苯基四唑溴化物(MTT)比色法检测细胞存活率,计算药物的治疗指数TI值,分析4种不同提取方法提取的海藻提取物对4种病毒的抑制作用.结果:海藻各提取物均有不同程度的抗病毒活性,其中水提取物抑制作用强,其对RSV、HSV-Ⅰ、COXB5、EV71的治疗指数TI值分别为413.00、310.83、7.36、176.07,与阳性对照药效果相当;乙醇超声提取物对COXB5效果较好,TI值为19.97.结论:海藻提取物具有体外抗RSV、HSV-Ⅰ、COXB5、EV71活性的作用.
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肠道病毒EV71 IgM抗体参考品的建立
目的：建立肠道病毒EV71 IgM抗体检测用参考血清盘。方法通过收集手足口病感染早期患者的咽拭子和血清，对咽拭子病毒进行分离、鉴定、基因分型，通过血清中和试验及酶联免疫吸附试验(捕获法)的验证，确定EV71 IgM抗体阳性样品，组建EV71 IgM抗体参考血清盘，并经3家实验室对该参考血清盘进行协同标定和确认。结果12名患儿的咽拭子中均分离到EV71病毒，在RD细胞上引起细胞病变。通过套式PCR扩增、序列测定后进化树分析确认均为流行的C4基因亚型。每名患儿的双份血清均可中和EV71病毒，抗体效价为1∶512~1∶2048。通过捕获法进行EV71 IgM抗体检测结果均为阳性。以此12份样品为原料制备EV71 IgM抗体阳性参考品，同时以12份EV71 IgM抗体阴性血清制备阴性参考品，建立了由12份阳性参考品、12份阴性参考品、1份低检出限参考品和1份精密性参考品组成的肠道病毒EV71 IgM抗体参考血清盘。通过3家实验室协同标定，各实验室间差异均无统计学意义。结论建立了EV71 IgM抗体检测参考血清盘，为相关检测试剂的质量控制和评价提供了参考标准。
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应用生物反应器培养Vero细胞制备EV71病毒初探
目的 应用生物反应器培养Vero细胞制备EV71病毒.方法 以3L生物反应器采用4g/L、8 g/L Cytodex-1微载体培养比较Vero细胞比生长率,并以4 g/L微载体培养EV71病毒.结果 4 g/L微载体培养Vero细胞3～4d微载体细胞密度达2.3×106/mL,按0.001的感染复数(MOI)接种EV71病毒,病毒收获液的滴度高达7.90 lgPFU/mL,较静置培养平均高出0.92 lgPFU/mL.结论 初步建立了3L生物反应器微载体培养Vero细胞制备EV71病毒的工艺,为进一步放大生产规模奠定了基础.
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宁夏手足口病患者病原学检测分析
目的 了解 2008年宁夏手足口病流行的病原.方法 采集手足口病患者的疱疹液、粪便、咽拭子标本进行病毒分离,阳性毒株用肠道通用和EV71、 CA16特异性引物进行 RT-PCR鉴定.结果 在采集到标本的335例患者中, 93例分离到 EV71病毒,感染率为27.76%;59例分离到 CA16,感染率为17.61%.结论 引起宁夏2008年手足口病主要病原是EV71和CA16.
