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微量连续流动荧光法同时测定滤纸干血样苯丙氨酸和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶及其在新生儿疾病筛查中的应用
目的:研究滤纸干血样苯丙氨酸和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶微量连续流式荧光法联合测定实验方法,并评价其在新生儿苯丙酮尿症和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症筛查中的应用价值.方法:直径3.2mm的新生儿滤纸干血样经萃取后用微量连续流动荧光分析仪同时测定苯丙氨酸和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶浓度,确定苯丙酮尿症和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的筛查阳性临界值.结果:在所建立的标本保存和分析条件下,新生儿滤纸干血样经30～120 min萃取后,苯丙氨酸在0～20mg/dl、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶在0～150 μM NADPH浓度范围内线性良好,苯丙氨酸和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶低检出限分别为0.2 mg/dl和2.0μM NADPH.苯丙氨酸高值和低值质控滤纸干血样的批内变异度分别为4.1％和5.3％,批间变异度分别为5.0％和5.6％;葡萄糖-6-磷酸脱氢酶批内变异度分别为4.9％和5.4％,批间变异度分别为5.1％和5.9％,测定平均回收率分别为98.2％和99.2％,并与PerkinElmer公司PHE和G6PD荧光定量法测定结果高度相关.50009例新生儿滤纸干血样PHE和G6PD呈非正态分布,用95％百分位数法确定筛查新生儿苯丙酮尿症的临界值为PHE ＞3.9 mg/dl为阳性,筛查新生儿G6PD缺乏症的临界值为G6PD ＜42 μM NADPH为阳性,苯丙酮尿症和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症筛查阳性率分别为0.064％和0.352％,发病率分别为0.016％和0.042％.结论:微量连续流式荧光分析法可同时检测新生儿滤纸干血样苯丙氨酸和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶含量,且灵敏度、特异性、重复性好,为筛查新生儿苯丙酮尿症和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症提供了简便、快速、费用低的方法.
关键词： 苯丙酮尿症 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 新生儿筛查 荧光法 -
溶血性黄疸患者实验室检测结果分析
目的：从实验室的角度分析溶血性黄疸的特点，为临床鉴别诊断溶血性黄疸提供实验室依据。方法选取2011年6月－2013年12月在广州医科大学附属沙井医院就诊的44例患者，其中包括遗传性溶血性疾病和溶血性疾病合并肝炎病毒感染的患者，对实验室检查结果包括血液学检查，生化指标和葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（G －6－PD）活性等进行分析。结果G －6－PD 缺乏症所致的溶血性黄疸，患者不一定有贫血表现。地中海贫血所致的溶血性黄疸，绝大多数患者红细胞呈小细胞低色素，平均红细胞体积（MCV）和平均红细胞血红蛋白含量（MCH）低于正常，α－地中海贫血血红蛋白（Hb）A2偏低，β－地中海贫血 Hb A2增高。溶血性黄疸网织红细胞可增高也可在正常范围内。尿液检查胆红素呈阴性，尿胆原含量正常或增高。生化检查非结合胆红素轻中度增高，结合胆红素正常，间接胆红素的量占到总胆红素量的70％～80％。ALT、AST、ALP 基本正常。溶血性黄疸患者合并肝炎病毒感染时，ALT、AST、ALP、GGT、总胆红素、直接胆红素、间接胆红素可显著升高。结论对原因不明或者不能用肝炎解释的黄疸以及轻中度黄疸，间接胆红素占到总胆红素的70％～80％的患者，都应该警惕溶血性疾病的可能，建议作 G －6－PD 酶活性测定和血红蛋白电泳筛查。
关键词： 贫血 溶血性 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 地中海贫血 实验室技术和方法 -
韶关市2004-2008年新生儿疾病筛查结果分析
目的 了解韶关市新生儿先天性甲状腺功能低于症(CH)、苯丙酮尿症(PKU)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)缺乏症的发病率及新生儿疾病筛查情况.方法 对韶关市2004年6月-2008年8月新生儿疾病筛查资料进行分析.结果 韶关市CH的发病率为1/2 178,G-6-PD缺乏症的发病率为5.19%,PKU未检出;韶关市近4年的新生儿疾病筛查率平均为53.90%.而且逐年上升.结论 新生儿疾病筛查对预防早期CH、PKU、G-6-PD缺乏症患儿,使其得到早期诊治,避免智能和体格发育障碍具有较大的临床价值,对提高我市出生人口素质具有重要意义.
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PCR-DGGE法研究葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因突变
目的:应用PCR-DGGE法和DNA测序分析云南籍G6PD缺乏症患者基因突变类型和特点.方法应用硝基四氮唑蓝(NBT)纸片法进行G6PD缺乏症定性筛查,G6PD/6PGD比值法验证,应用PCR-DGGE法和DNA测序分析46例云南籍G6PD缺乏症患者基因突变类型和特点.结果:46例云南籍G6PD缺乏症样本中有30例经PCR-DGGE法分析G6PD exon 12发现有异常电泳条带,DNA测序证实26例(56.52%)为nt-1388G→A,4例(8.7%)nt-1376G→T.而PCR-DGGE法分析G6PD exon 2未发现有异常电泳条带的样本出现.结论:(1)nt-1388G→A(56.52%)、nt-1376G→T(8.7%)是云南省主要的基因突变型也是中国人中常见的两种突变型,揭示中华民族有着共同的起源;(2)所检样本中未发现nt95A→G.(3)应用PCR-DGGE法结合DNA测序检测G6PD缺乏症患者的基因型,阳性检出率高,方法简便、快捷、灵敏、结果准确可靠.
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汕头市龙湖地区育龄男女地中海贫血以及G6 PD缺乏症发病率流行病学调查
目的：了解本地区育龄男女地中海贫血以及葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（ G6PD）缺乏症发病率，以期为地中海贫血以及G6PD缺乏症的干预提供流行病资料，从而降低出生缺陷，促进优生优育。方法选择2013－08～2014－10间来汕头市龙湖区计划生育服务站体检的育龄男女2800例作为研究对象，采用“一管法”红细胞脆性试验进行地中海贫血筛查，采用改良的G6 PD量比值法进行G6PD缺乏症筛查，并对受检者进行优生指导，计算地中海贫血以及G6PD缺乏症发病率。结果2800例接受筛查的育龄男女中地中海贫血134例，发病率为4.79％；G6PD缺乏症105例，发病率为3.75％。其中有2例育龄男女同时合并地中海贫血和G6PD缺乏症。结论本地区地中海贫血以及G6PD缺乏症发病率均较高，地中海贫血以及G6PD缺乏症筛查方便、经济、快捷，能早期发现地中海贫血以及G6 PD缺乏症高危夫妇并采取及时干预，对降低出生缺陷，促进优生优育以及提高人口质量均均有重要的现实意义，值得在各地区推广。
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用脱离子水代替磷酸盐缓冲液检测高铁血红蛋白还原率
目的 简化高铁血红蛋白还原率测定的步骤,减少配制试剂,以及探讨影响高铁血红蛋白还原率测定的因素.方法 用脱离子水代替磷酸盐缓冲液测定98例住院及门诊患者全血的高铁血红蛋白还原率.结果 剔除6例无可比性的病例,2种方法所得结果差异无显著性(P＞0.05).结论 可以用脱离子水代替磷酸盐缓冲液测定高铁血红蛋白还原率.
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葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测定试剂盒（荧光比值法）的研制
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（glucose-6-phosphate dehydroge-nase，G6PD）参与了磷酸戊糖代谢过程，催化还原氧化型辅酶Ⅱ（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADP）[1]。作为红细胞中产生还原型辅酶Ⅱ（reduced nicotinamide ade-nine dinucleotide phosphate，NADPH）的唯一方式，保护红细胞免受氧化损伤。 G6PD 活性降低或缺失称为 G6PD 缺乏症，是一种X连锁不完全显性遗传疾病，该病影响了全世界2～4亿人口的健康[2]。在我国，G6PD缺乏症的发病率呈现南高北低的趋势[3]。G6PD缺乏症患者的主要临床表现为贫血、黄疸、血红蛋白尿，同时可伴有红细胞溶解产物对机体的刺激反应[4]。目前，对于该病尚无根治的方法。因此，对新生儿进行G6PD缺乏症筛查对于早发现、早预防具有重要的意义。此外，根据G6PD缺乏症的遗传方式，男性发病率高于女性，且女性中存在杂合子和纯合子2种类型。根据Lyon假说，女性中正常红细胞所占的比例影响G6PD缺乏症杂合子酶活性的高低，易造成杂合子漏诊[5]。国外研究表明，杂合子发生新生儿高胆红素血症的相对危险度达2.26，显著高于正常纯合子。同时，女性杂合子的后代有50％的G6PD缺乏症发病率。此外，女性杂合子在孕期及哺乳期若接触到诱发因素，将会引起流产、死胎或新生儿黄疸至核黄疸，故检出G6PD 女性杂合子对优生优育有重要意义[5]。由于人群中G6PD 的缺乏率高，而其同工酶6PGD 却未见有缺乏的报道，因此可将6PGD活性作为参照，通过G6PD/6PGD比值法评价G6PD 的活性，可检测到 G6PD 的微量变化。 G6PD/6PGD 比值法目前已作为公认的鉴定G6PD 缺乏症女性杂合子的方法被广泛认可。鉴于此，本研究研发了G6PD/6PGD比值法所用的新G6PD测定试剂盒，并对其与对照试剂盒进行比较，以证实新试剂盒的应用价值。
关键词： 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 新生儿筛查 试剂盒 -
遗传性溶血性疾病的诊断和治疗
遗传性溶血性疾病包括由红细胞膜异常、红细胞酶缺陷和血红蛋白(Hb)异常引起,以溶血和溶血性贫血为主要临床表现的遗传性疾病.该病是全球常见的遗传性疾病,全球约4亿人有葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺陷,2.69亿人携带该病的基因.因此,提高遗传性溶血性疾病的临床诊断和治疗水平具有重大意义.本文就3种常见的遗传性溶血性贫血的若干临床问题作一介绍.
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遗传性球形红细胞增多症合并G6PD缺乏1例报告
目的：探讨遗传性球形红细胞增多症（HS）合并葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G 6 PD）缺乏症的临床表现、发病机制和诊断经验。方法回顾分析1例5岁HS合并G 6 PD缺乏症患儿的临床表现、实验室检查，并复习国内外相关文献。结果患儿，男，5岁。因面色苍白伴黄疸，疑似地中海贫血就诊。红细胞计数2.65×1012/L，血红蛋白70.50 g/L，平均红细胞体积78.61 lf，平均球形红细胞体积66.26 lf，网织红细胞18%；镜检红细胞大小不等，以小细胞为主，球形红细胞约占15%；G6PD活性1.38 NBT；SDS-PAGE电泳和Western-blot均显示患儿带3蛋白部分缺失；基因结果显示，带3蛋白SLC4A1基因，一个位于4号外显子点突变c.113A＞ C，另一个位于6号内含子c.349+27C＞ T（IVS6nt+27C＞ T），确诊HS合并G 6 PD缺乏症。讨论临床上同时患有HS和G 6 PD缺乏症十分罕见，双重红细胞缺陷影响溶血诊断。
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137例上海地区出生新生儿家系G6PD基因突变分析
目的 了解上海地区出生的新生儿及其家系葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症基因突变特点,探讨该病的发病机制,提高诊断水平.方法 用高分辨率熔解曲线分析(HRM)技术对中国人常见的突变类型G1388A、G1376T、A95G、G392T、G871A、C1311T、C1024T、C406T进行分析鉴定.结果 137例新生儿的家系中258例患者有213例检出突变类型,45例未检出突变类型.单个位点突变184例,G1376T,66例(30.9%);G1388A,64例(30%);A95G,25例(11.7%);C1024T,16例(7.5%);G392T,10例(4.7%);C406T,3例(1.4%).复合位点突变共29例,G871A + C1311T + IVS11 93T→C,10例(4.7%);G1376T + IVS11 93T→C,7例(3.3%);C1311T + IVS11 93T→C,5例(2.3%);C406T + C1311T,2例(0.9%);G1388A + IVS11 93T→C,2例(0.9%);G1376T + C1311T + IVS11 93T→C,1例(0.5%);A95G + C1311T + IVS11 93T→C,1例(0.5%);C1024T + IVS11 93T→C,1例(0.5%).结论 随着外来人口的流入和通婚的增多,上海地区的G6PD基因突变也在发生变化,基因诊断是对该病分子水平的诊断,有利于杂合子的检测,以便做好产前筛查,同时对研究人口迁徙与遗传病分布之间的关系有一定意义.
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上海市新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症筛查及临界值确立
目的 开展上海地区新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症的筛查,确立筛查实验室的临界值,降低假阳性率,提高出生人口素质.方法 采用定量荧光法测定新生儿滤纸干血片上的G6PD浓度值;以G6PD/6PGD定量比值法对筛查阳性患儿进行确诊.结果 筛查新生儿217 447名(男婴116 549名,女婴100 898名),确诊患儿270例(男婴250例,女婴20例),新生儿G6PD缺乏症的发生率为0.18％,男婴发生率为0.31％,女婴发生率0.03％;新生儿、男婴和女婴G6PD浓度的临界值分别为2.165 U/g、1.97 U/g和2.165U/g.结论 开展新生儿疾病筛查可早期诊断和预防G6PD,值得在上海地区推广;筛查实验室建立新生儿、男婴、女婴各自的临界值,可降低G6PD缺乏症筛查的假阳性,提高筛查效率.
关键词： 新生儿疾病筛查 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 发生率 临界值 -
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏导致急性溶血一例报道
基层医院受实验室条件限制,对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症的实验室筛查主要依靠化学方法,容易引起假阴性.作者报道我院1例疑似G6PD缺乏症患者应用生化方法检测未见G6PD活性明显下降,临床未能诊断为G6PD缺乏症,经对症治疗病情缓解后赴上级医院作基因检测确诊为蚕豆病.
关键词： 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 蚕豆病 急性溶血 病例报告 -
新生儿红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症合并胆红素脑病换血治疗1例的护理
总结1例新生儿红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症合并胆红素脑病换血治疗的护理体会.换血治疗前做好环境、用物、血液、患儿等各项准备,换血过程中密切协助医生、时刻监测患儿的病情并注意保暖,换血后做好蓝光照射的护理,注意饮食营养,出院时做好健康指导.住院9 d患儿病情好转出院.
关键词： 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 胆红素脑病 换血治疗 护理 -
宁波地区新生儿G6PD缺乏症筛查结果分析
目的 通过对新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症的筛查,了解宁波地区新生儿G6PD缺乏症的发病情况.方法 应用荧光分析方法对新生儿足跟血干血滤纸片进行初筛,对可疑阳性者召回,采集静脉血以G6PD/6PGD比值法进行确诊.结果 2014年全市活产新生儿91 587例,共筛查新生儿91 135例,筛查率99.51％;发现G6PD缺乏新生儿1 546例,初筛阳性率为1.69％;确诊G6PD缺乏症新生儿330例,发病率0.36％,其中男性发病率0.59％(283/47 819),女性发病率为0.11％(47/43 316),本地户籍新生儿发病率0.18％(87/48 315),非本地户籍新生儿发病率0.57％(243/42 820).结论 宁波市新生儿G6PD缺乏症发病率虽然较低,但每年也将近新增300余例患儿.因此,有必要进行新生儿G6PD筛查,以预防G6PD缺乏引起的病症,确保儿童健康成长.
关键词： 新生儿 疾病筛查 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 发病率 -
G6PD缺乏症与疟疾的选择优势及抗性机制研究进展
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)缺乏症是一种常见的遗传性溶血性疾病,其基因定位Xq28,G6PD基因突变导致G6PD活性降低,红细胞内还原型辅酶 Ⅱ(NADPH)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量下降,对细胞造成氧化损伤,在各种因素诱导下发生溶血反应.疟疾是危害全球健康的重要虫媒传染病,其流行地区与G6PD缺乏症高发地区具有高度一致性,普遍认为疟疾对G6PD缺乏症具有选择优势,G6PD缺乏症对疟疾有抗性作用,但其具体抵抗疟疾的机制尚不清楚.为了进一步探讨G6PD缺乏症与疟疾之间的复杂关系,本文从G6PD缺乏症与疟疾的选择优势、G6PD缺乏症对疟疾抗性机制等方面的研究进展进行综述.
关键词： 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 疟疾 选择优势 抗性机制 -
江西萍乡地区儿童葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因突变分析
目的 通过对江西萍乡地区确诊的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症患儿进行G6PD基因分析,分析本地区常见的G6PD基因突变类型,为确立G6PD缺乏症为新生儿筛查项目提供理论依据.方法 选取2012年1月至2016年1月因急性溶血在萍乡市人民医院儿科住院的并确诊为G6PD缺乏症患儿共65例,其中30例征得患儿家属同意,抽取静脉血,提取DNA,并进行PCR-基因测序,确定基因突变类型.结果 30例G6PD缺乏症患儿共检出3种基因突变类型,其中G1388A 19例(63.3％)、G1376T 8例(26.7％),C1159T 1例(3.3％),2例(6.7％)测序未找到突变位点,也无缺失突变.在2例G1376T家系中,有1个家系兄弟2人均为蚕豆病患者.结论 G1388A、G1376T为萍乡地区常见的G6PD缺乏症基因突变类型.
关键词： 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 基因 突变 筛查 儿童 -
新生儿Rh溶血病并葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症1例
1 临床资料患儿,女,15h.因皮肤、巩膜黄染进行性加重5h入院.患儿系第3胎(第1胎人工流产,第2胎出生约12h因黄疸未及时治疗至胆红素脑病死亡)足月顺产,体质量3100g.
关键词： 婴儿 新生 Rh溶血病 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 高胆红素血症 -
贵州省17例葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症患者临床特征和致病基因突变分析
目的 探讨中国贵州省17例葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症患者的临床特征及分子遗传特征.方法 分析患者的临床特征,收集患者及其部分母亲外周血,提取基因组DNA,针对C6PD基因所有编码外显子及外显子和内含子交界处进行PCR扩增测序.结果 患者的临床表型多样,如表现为蚕豆病、药物性溶血、新生儿高胆红素血症、感染性溶血及慢性非球形红细胞性溶血性贫血等.3例患者有伴发病,分别为α地中海贫血、急性髓系白血病M2型、新生儿肛门膜状狭窄.基因分析显示G1376T、G1388A及A95G是常见的3种G6PD基因突变类型.G1376T、G1388A及A95G占总突变的发生率为82.4％.2例患者仅有c.1311C＞T,IVS11 nt93T＞C变异.世界范围内首次发现1例贵州省榕江县患者有一新的c.G1388A,IVS10-10 T＞G基因复合变异.1例贵州省贵阳市患者母亲为c.1376 G ＞T,1311C ＞T,IVS11 nt93 T＞C基因复合变异携带者.结论 G6PD缺乏症具有一个广泛的临床异质性.世界范围内首次发现G6PD缺乏症患者中存在一新的G6PD基因复合变异单倍型c.G1388A,IVS10-10 T＞G,丰富了G6PD基因多态谱.贵州省患者可能存在G6PD基因复合变异单倍型c.1376 G＞T,1311C＞T,IVS11 nt 93 T＞C.
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葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因启动子甲基化研究
目的 了解葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)基因启动子区甲基化改变特点,探讨甲基化改变与G6PD缺乏症的关系.方法 将2013年8月至2014年7月期间195例贫血查因或体检儿童分为G6PD缺乏组(130例)和对照组(65例).荧光定量PCR检测G6PD mRNA表达情况.甲基化敏感性高分辨率熔解曲线分析(MS-HRM)结合重亚硫酸盐PCR测序法(BSP)等方法分析G6PD mRNA表达偏低的G6PD缺乏症患者的基因启动子甲基化改变情况,另对G6PD mRNA表达正常的44例女性标本(G6PD缺乏组7例和正常对照组37例)的G6PD基因启动子甲基化情况进行分析.结果 22例(16.9％,22/130) G6PD缺乏症患者的G6PD mRNA表达偏低,其中的16例男性均无甲基化、6例女性均存在部分甲基化.44例G6PD mRNA表达正常的G6PD缺乏组及对照组女性中,40例检测到部分甲基化,4例无甲基化(G6PD缺乏组1例,对照组3例).结论 基因启动子区甲基化与男性G6PD缺乏症没有关联.女性人群G6PD基因存在部分甲基化与无甲基化,提示甲基化改变对女性G6PD缺乏症可能有一定影响.
关键词： 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 甲基化 X染色体失活 失活逃逸 儿童 -
G6PD缺陷与肠道病毒71型手足口病的关系
目的 探讨葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)缺陷对肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染所致手足口病的影响及可能机制.方法 选取确诊为EV71感染手足口病的男性患儿220例,根据病情分为普通组(145例)和重症组(75例);将同期体检的132例健康男性儿童设为对照组.用全自动生化仪进行血液中G6PD、还原型谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)水平的测定.结果 重症组G6PD缺陷比例明显高于对照组(P＜0.0125).重症组中G6PD缺陷患儿的总热程、精神异常时间、肢体抖动持续时间及住院时间均较G6PD正常者长(P＜0.05).急性期及恢复期普通组与重症组患儿血中GSH、G6PD水平均低于对照组(P＜0.05),MDA水平均高于对照组(P＜0.05).普通组及重症组G6PD缺陷患儿急性期血GSH水平均低于G6PD活性正常患儿,MDA水平均高于G6PD活性正常患儿(P＜0.01).急性期及恢复期患儿GSH水平与G6PD活性均呈正相关(分别r=0.61、0.58,均P＜0.01);急性期患儿MDA水平与G6PD活性呈负相关(r=-0.29,P＜0.01).结论 G6PD缺陷可能是EV71型手足口病的易感因素,伴G6PD缺乏的患儿病情可能更重,其机制可能与氧化应激有关.
关键词： 肠道病毒71型 手足口病 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 儿童
